1.方法提要

   本標(biāo)準(zhǔn)采用的的方法是計(jì)數(shù)濃度法，即通過(guò)收集懸浮在空氣中的生物性粒子于專門的培養(yǎng)基（選擇能證實(shí)其能夠支持微生物生長(zhǎng)的培養(yǎng)基），經(jīng)若干時(shí)間和適宜的生長(zhǎng)條件讓其繁殖到可見(jiàn)的菌落計(jì)數(shù)，以判定該潔凈室的微生物濃度。

2.人員的職責(zé)及培訓(xùn)

   潔凈室（區(qū)）的測(cè)試人員應(yīng)進(jìn)行本專業(yè)的培訓(xùn)并獲得相應(yīng)資格后才能履行對(duì)潔凈室（區(qū)）測(cè)試的職責(zé)，其中包含涉及的衛(wèi)生知識(shí)和基本微生物知識(shí)。

   潔凈室（區(qū)）的測(cè)試人員應(yīng)選擇與生產(chǎn)操作的空氣潔凈度級(jí)別要求相適應(yīng)的穿戴方式，外面的衣服不能帶進(jìn)100000級(jí)以上的區(qū)域。

3.儀器、輔助設(shè)備和培養(yǎng)基

   選擇合適的浮游菌采樣器，包括采用無(wú)油的抽氣泵，較低的氣流流速和較大的采樣流量，以保證培養(yǎng)基表面的水分不被吹干。

   本測(cè)試需要具備儀器、輔助設(shè)備和培養(yǎng)基如下：

   a)浮游菌采樣器；

   b)培養(yǎng)皿；

   c)培養(yǎng)基（大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基、沙氏瓊脂培養(yǎng)基）

   d)恒溫培養(yǎng)箱；

   e)高壓蒸汽滅菌器。

4.浮游菌采樣器原理

   浮游菌采樣器一般采用撞擊法原理，可分為狹縫式采樣器、離心式或針孔式采樣器。狹縫式采樣器由內(nèi)部風(fēng)機(jī)將氣流吸入，通過(guò)采樣器的狹縫式平板，將采集的空氣噴射并撞擊到緩慢旋轉(zhuǎn)的平板培養(yǎng)基表面上，附著的活微生物粒子經(jīng)培養(yǎng)后形成菌落。離心式采樣器由于內(nèi)部風(fēng)機(jī)的高速旋轉(zhuǎn)，氣流從采樣器前部吸入從后部流出，在離心力的作用下，空氣中的活微生物的粒子有足夠的時(shí)間撞擊到的固形培養(yǎng)基條上，附著的活微生物粒子經(jīng)培養(yǎng)后形成菌落。針孔式采樣器是氣流通過(guò)一個(gè)金屬蓋吸入，蓋子上是密集的經(jīng)過(guò)機(jī)械加工的特質(zhì)小孔，通過(guò)風(fēng)機(jī)將收集的細(xì)小的空氣流直接撞擊到平板培養(yǎng)基表面上，附著的活微生物粒子經(jīng)培養(yǎng)后形成菌落。

5測(cè)試要點(diǎn)

5.1必須按照測(cè)試儀器的檢定周期，定期對(duì)儀器作檢定。使用校驗(yàn)合格，且在使用有效期內(nèi)的儀器。

5.2測(cè)試儀器在未進(jìn)入被測(cè)區(qū)域時(shí)，若必需，則先清潔表面，或在相應(yīng)的潔凈室內(nèi)準(zhǔn)備和存放（用保護(hù)罩或其他適當(dāng)?shù)赝庹直Ｗo(hù)儀器）。

5.3在100級(jí)潔凈室內(nèi)用紙時(shí)，上面應(yīng)蒙上一張透明不沾塵的覆蓋物，在100級(jí)潔凈室內(nèi)不能用鉛筆盒橡皮。

5.4使用測(cè)試儀器時(shí)應(yīng)嚴(yán)格按照儀器說(shuō)明書操作。

5.4.1儀器開(kāi)機(jī)，預(yù)熱至穩(wěn)定后，方可按儀器說(shuō)明書的規(guī)定對(duì)儀器進(jìn)行校正，同時(shí)檢查采樣流量，并根據(jù)采樣量設(shè)定采樣時(shí)間。

5.4.2采樣口必須用便于消毒及化學(xué)性能穩(wěn)定的材料制造。

5.4.3采樣管嚴(yán)禁滲漏，內(nèi)壁應(yīng)光滑。

5.4.4采樣管的長(zhǎng)度應(yīng)根據(jù)測(cè)點(diǎn)的高度定，盡量減少?gòu)澢?/span>

6培養(yǎng)皿

6.1一般采用90mm×15mm規(guī)格的培養(yǎng)皿?？筛鶕?jù)所選用采樣器選擇合適的培養(yǎng)皿。

6.2離心式采樣器采用的固形培養(yǎng)條。

7培養(yǎng)基

   大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基（TSA）或沙氏培養(yǎng)基（SDA）或其他用戶認(rèn)可并經(jīng)驗(yàn)證了的培養(yǎng)基。其配制方法見(jiàn)附錄B。

8恒溫培養(yǎng)箱

   必須定期對(duì)恒溫培養(yǎng)箱進(jìn)行校驗(yàn)。

9測(cè)試步驟

9.1測(cè)試前儀器、培養(yǎng)皿表面必須嚴(yán)格消毒。

9.1.1采樣器進(jìn)入被測(cè)房間前先用消毒房間的消毒劑滅菌，用于100級(jí)潔凈室的采樣器宜預(yù)先放在被測(cè)房間內(nèi)。

9.1.2用消毒劑擦凈培養(yǎng)皿的外表面。

9.1.3采樣前，先用消毒劑清洗采樣器的頂蓋、轉(zhuǎn)盤以及罩子的內(nèi)外面，采樣結(jié)束，再用消毒劑輕輕噴射罩子的內(nèi)壁和轉(zhuǎn)盤。

9.1.4采樣口及采樣管，使用前必須高溫滅菌。如果消毒劑對(duì)采樣管的外壁及內(nèi)壁進(jìn)行消毒時(shí)，應(yīng)將管中的殘留液倒掉晾干。

9.1.5采樣者應(yīng)穿戴與被測(cè)潔凈區(qū)域相應(yīng)的工作服，在轉(zhuǎn)盤上放入或調(diào)換培養(yǎng)皿前，雙手用消毒劑消毒或戴無(wú)菌手套操作。

9.1.6采樣儀器經(jīng)消毒后先不放入培養(yǎng)皿，開(kāi)啟浮游菌采樣器，使儀器中的殘余消毒劑蒸發(fā)，時(shí)間不少于5min，并檢查流量并根據(jù)采樣量調(diào)整設(shè)定采樣時(shí)間。

9.1.7關(guān)閉浮游菌采樣器，放入培養(yǎng)皿，蓋上蓋子。

9.1.8置采樣口于采樣點(diǎn)后，開(kāi)啟浮游菌采樣器進(jìn)行采樣。

10培養(yǎng)

10.1全部采樣結(jié)束后，將培養(yǎng)皿倒置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

10.2采用大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基（TSA）配制的培養(yǎng)皿經(jīng)采樣后，在30℃~35℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，時(shí)間不少于2d；采用沙氏培養(yǎng)基（SDA）配制的培養(yǎng)皿經(jīng)采樣后，在20℃~25℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，時(shí)間不少于5d。

10.3每批培養(yǎng)基應(yīng)有對(duì)照試驗(yàn)，檢驗(yàn)培養(yǎng)基本身是否污染?？擅颗x定3只培養(yǎng)皿作對(duì)照培養(yǎng)。

11菌落計(jì)數(shù)

11.1用肉眼對(duì)培養(yǎng)皿上所有的菌落直接計(jì)數(shù)，標(biāo)記或在菌落計(jì)數(shù)器上點(diǎn)計(jì)，然后用5~10倍放大鏡檢查，有否遺漏。

11.2若平板上右2個(gè)或2個(gè)以上的菌落重疊，可分辨時(shí)仍以2個(gè)或2個(gè)以上菌落計(jì)數(shù)。

12注意事項(xiàng)

12.1使用前應(yīng)仔細(xì)檢查每個(gè)培養(yǎng)皿的質(zhì)量，培養(yǎng)基及培養(yǎng)皿有變質(zhì)、破損或污染的不能使用。

12.2對(duì)培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件及其他參數(shù)做詳細(xì)的記錄。

12.3由于細(xì)菌種類繁多，差別甚大，計(jì)數(shù)時(shí)一般用透射光于培養(yǎng)皿背面或正面仔細(xì)觀察，不要漏計(jì)培養(yǎng)皿邊緣生長(zhǎng)的菌落，并須注意細(xì)菌菌落或培養(yǎng)基沉淀物的區(qū)別，必要時(shí)用顯微鏡鑒別。