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elisa試劑盒實驗應注意事項

來源:上海瑞齊生命科學工程有限公司   2015年09月03日 22:33  
上海瑞齊生命科學工程有限公司提供各種種屬、各種系列elisa試劑盒,于實驗室科學研究用,不適用于臨床診斷。公司提供免費代測服務,詳情請或咨詢在線人員。
  
  elisa試劑盒試驗應注意事項:
  
  1.正式試驗時,應分別以陽性對照與陰性對照控制試驗條件,待檢樣品應作一式二份,以保證實驗結果的準確性。有時本底較高,說明有非特異性反應,可采用羊血清、兔血清或BSA等封閉。
  
  2.在ELISA中,進行各項實驗條件的選擇是很重要的,其中包括:
  
  (1)固相載體的選擇:許多物質可作為固相載體,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體,在使用前均可進行篩選:用等量抗原包被,在同一實驗條件下進行反應,觀察其顯色反應是否均一性,據此判明其吸附性能是否良好。
  
 ?。?)包被抗體(或抗原)的選擇:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時,要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0~9.6之間。吸附溫度,時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18~24小時。蛋白質包被的zui適濃度需進行滴定:即用不同的蛋白質濃度(0.1、和10μg/ml等)進行包被后,1.0在其它試驗條件相同時,觀察陽性標本的OD值。選擇OD值zui大而蛋白量zui少的濃度。對于多數蛋白質來說通常為1~10μg/ml。
  
 ?。?)酶標記抗體工作濃度的選擇:首先用直接ELISA法進行初步效價的滴定(見酶標記抗體部份)。然后再固定其它條件或采取“方陣法”(包被物、待檢樣品的參考品及酶標記抗體分別為不同的稀釋度)在正式實驗系統(tǒng)里準確地滴定其工作濃度。
  
 ?。?)酶的底物及供氫體的選擇:對供氫體的選擇要求是價廉、安全、有明顯地顯色反應,而本身無色。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌作用,應注意防護。有條件者應使用不致癌、靈敏度高的供氫體,如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后,應加入強酸或強堿以終止反應。通常底物作用時間,以10-30分鐘為宜。
  
  底物使用液必須新鮮配制,尤其是H2O2在臨用前加入。
  
  公司是國內免疫學產品主要供應商之一,提供各種原裝、分裝檢測elisa試劑盒,質優(yōu)價廉.有著豐富服務經驗和深厚專業(yè)背景的團隊為您提供技術服務和支持,有任何試劑盒方面的問題都能幫您解決,免除您的后顧之憂。讓您的實驗省時省力,更好的為您服務。

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