人2,3Dinor血栓烷B2 elisa試劑盒說明書 上海瑞齊生命科學工程有限公司以*產(chǎn)品為標準,自主研究開發(fā)了一系列應用于分子生物學、蛋白質學、免疫學研究的相關產(chǎn)品,全面完善了生產(chǎn)流程和產(chǎn)品質量控制體系,同時利用自身的優(yōu)勢不斷整合國內外資源,逐步擴大產(chǎn)品種類和范圍,代理了美國R&D、RB、BD、GBD、DSL、BIOO等品牌的ELISA試劑盒,力爭成為生物技術和食品安全檢測領域zui的產(chǎn)品供應商。 使用目的: 本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關液體樣本中2,3Dinor血栓烷B2(2,3-dinor-TXB2)含量。 elisa試劑盒實驗原理 本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人2,3Dinor血栓烷B2(2,3-dinor-TXB2)水平。用純化的人2,3-dinor-TXB2抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入2,3-dinor-TXB2,再與HRP標記的2,3-dinor-TXB2抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的2,3-dinor-TXB2呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中人2,3Dinor血栓烷B2(2,3-dinor-TXB2)濃度。 試劑盒組成 1 30倍濃縮洗滌液 20ml×1瓶 7 終止液 6ml×1瓶 2 酶標試劑 6ml×1瓶 8 標準品(640pg/ml) 0.5ml×1瓶 3 酶標包被板 12孔×8條 9 標準品稀釋液 1.5ml×1瓶 4 樣品稀釋液 6ml×1瓶 10 說明書 1份 5 顯色劑A液 6ml×1瓶 11 封板膜 2張 6 顯色劑B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1個 標本要求 1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融 2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。 操作步驟 1. 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。 320pg/ml 5號標準品 150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液 160pg/ml 4號標準品 150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液 80pg/ml 3號標準品 150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液 40pg/ml 2號標準品 150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液 20pg/ml 1號標準品 150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液 2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。 3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。 4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用 5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。 6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。 7. 溫育:操作同3。 8. 洗滌:操作同5。 9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘. 10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。 11. 測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。 操作程序總結: 1.準備試劑,樣品和標準品 2.加入準備好的樣品和標準品,37℃反應30分鐘 3.洗板5次,加入酶標試劑,37℃反應30分鐘 4.洗板5次,加入顯色液A、B,37℃反應10分鐘 5.加入終止液 6.15分鐘之內度OD值 7.計算
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