介紹
多能性干細胞(PSCs)是基礎(chǔ)研究和應(yīng)用的基本工
具，包括再生治療、藥物開發(fā)和毒理學評估。盡管
無滋養(yǎng)層系統(tǒng)的問世大大提升了PSCs的可擴展性，
但細胞團塊傳代技術(shù)(如使用分散酶、膠原酶或EDTA
等試劑)通常不適用于下游實驗應(yīng)用，如高通量篩
選、基因編輯和定向分化。
單細胞培養(yǎng)是干細胞培養(yǎng)研究中的標準和慣常方
法。通過利用單細胞解離傳代技術(shù)，科學家們能夠
獲得值得信賴的細胞用于下游應(yīng)用和克隆篩選、成
像和細胞分選比較，也可用于對細胞復蘇和細胞數(shù)
量要求很高的懸浮培養(yǎng)。Gibco
?
 RevitaCell?添加劑
可與Essential 8?培養(yǎng)基結(jié)合使用，用于單細胞傳
代時可實現(xiàn)zui大的細胞存活率。與其他商品化的配
方不同，RevitaCell?添加劑包括rho相關(guān)蛋白激酶
(ROCK)抑制劑，其選擇性優(yōu)于傳統(tǒng)的ROCK抑制劑
(如Y-27632和thiazovivin)，可與包含抗氧化劑和具
有自由基清除劑特性的分子結(jié)合使用。這種混合物
可以zui大程度地降低單細胞傳代的影響，大大提升
細胞總存活率，有助于確保提升下游實驗中細胞供
應(yīng)的穩(wěn)定性和存活率。
材料與方法
PSC培養(yǎng)和擴增
在無滋養(yǎng)層條件下，使用Essential 8?培養(yǎng)基在玻
連蛋白(VTN-N)包被的培養(yǎng)板中培養(yǎng)H9人胚胎干細
胞(hESCs)和人誘導性多能干細胞(使用episomal附
著體載體生成的hiPSCs)。每3至5天傳代hiPSCs一
次 ，達到~80%匯合)。
使用TrypLE? Select酶或StemPro
?
 Accutase
?
細胞
消化液進行hiPSCs單細胞傳代
對于單細胞傳代實驗(參考圖1中的工作流程)，使
用不含鈣和鎂的DPBS沖洗細胞，然后使用預熱的
TrypLE? Select酶(1 mL每6孔板的一個孔)進行處
理。將細胞置于37°C、5% CO2培養(yǎng)箱中孵育5分
鐘。孵育后，使用Pipetman
?
 P1000吹吸細胞5至10
次，以獲得單個細胞。然后將細胞懸液轉(zhuǎn)移至
含有3 mL新鮮Essential 8?培養(yǎng)基的錐形管內(nèi)，稀
釋消化液，以200 x g離心4分鐘。吸棄培養(yǎng)基，小
心不要攪動細胞沉淀，在添加了1X RevitaCell?添
加劑的Essential 8?培養(yǎng)基中復蘇并培養(yǎng)(細胞接種
密度如圖1所示)分種后18-24小時細胞，然后每天僅
補充Essential 8?培養(yǎng)基進行培養(yǎng)