目前臨床上使用血清標(biāo)本測定的標(biāo)志物一般有傳染性病原體的抗原和抗體、腫瘤標(biāo)志物、激素、特種蛋白、細(xì)胞因子和治療藥物等。試劑的加入在國產(chǎn)試劑盒中基本上均是從滴瓶中滴加,ELISA試劑盒除了要留意滴加的角度外,滴加的速度也很重要,滴加太快,很輕易泛起重復(fù)滴加或加在兩孔之間的現(xiàn)象,這樣就會在孔內(nèi)的非包被區(qū)泛起非特異吸附,從而引起非特異顯色。免疫酶技術(shù)的主要試劑為固相的抗原或抗體、酶標(biāo)記的抗原或抗體和與標(biāo)記酶直接關(guān)聯(lián)??勺鞴滔噍d體的物質(zhì)很多,zui常用的是聚苯乙烯。聚苯乙烯具有較強的吸附蛋白質(zhì)的性能,抗體或蛋白質(zhì)抗原吸附其上后保留原來的免疫活性。聚苯乙烯為塑料,可制成各種形式,在測定過程中,它作為載體和容器,不參與化學(xué)反應(yīng),加之它的價格低廉,所以被普遍采用。
聚苯乙烯載體的形狀主要有三種:小試管、小珠和微量反應(yīng)板。小試管的特點是還能兼作反應(yīng)的容器,zui后放入分光光度計中比色。小珠一般為直徑0.6cm的圓球,表面經(jīng)磨砂處理后吸附面積大增加。如用特殊的洗滌器,在洗滌過程中使圓珠滾動淋洗,效果更好。zui常用的載體為微量反應(yīng)板,于ELISA測定的產(chǎn)品也稱為ELISA板,通用的標(biāo)準(zhǔn)板形是8×12的96孔式。為便于作少量標(biāo)本的檢測,有制成8聯(lián)或l2聯(lián)孔條的,放入座架后,大小與標(biāo)準(zhǔn)ELISA板相同。ELISA板的特點是可以同時進(jìn)行大量標(biāo)本的檢測,并可在特定的比色計上迅速讀出結(jié)果?,F(xiàn)在已有多種自動化儀器用于微量反應(yīng)板型的ELISA檢測,包括加樣、洗滌、保溫、比色等步驟,對操作的標(biāo)準(zhǔn)化極為有利。
良好的ELISA試劑盒板應(yīng)該是吸附性能好,空白值低,孔底透明度高,各板之間和同一板各孔之間性能相近。聚苯乙烯ELISA試劑盒板由于配料的不同和制作工藝的差別,各種產(chǎn)品的質(zhì)量差異很大。因此每一批號的聚苯乙烯制品在使用前須檢查其性能。常用的檢查方法為:以一定濃度的人IgG(一般為10ng/ml)包被ELISA板各孔后,每孔內(nèi)加入適當(dāng)稀釋的酶標(biāo)抗人IgG抗體,保溫后洗滌,加底物顯色,終止酶反應(yīng)后分別測每孔溶液的吸光度??刂品磻?yīng)條件,使各讀數(shù)在0.8左右。計算所有讀數(shù)的平均值。
所有單個讀數(shù)與平均讀數(shù)之差應(yīng)小于10%.與聚苯乙烯類似的塑料為聚氯乙烯。作為ELISA試劑盒固相載體,聚氯乙烯板的特點為質(zhì)軟板薄,可切割,價廉、但光潔度不如聚苯乙烯板。聚氯乙烯對蛋白質(zhì)的吸附性能比聚苯乙烯高,但空白值有時也略高。
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