(一)原理
細胞內還原型谷胱甘肽((GSH)可保護細胞免受損傷,藥物或毒物可通過使細胞內GSH耗竭而導致細胞受損。
(二)材料
1.96孔培養(yǎng)板培養(yǎng)的待測細胞與對照組細胞。
2.O.1mol/L PBS(pH8.0) 0.1mol/L Na2HPO4溶液170ml和O.1mol/L NaH2PO 4溶液34ml混勻。
3.DTNB溶液用0.1mol/L PBS配成6.5%TCA溶液。
(三)方法
培養(yǎng)細胞的96孔培養(yǎng)板,傾去培養(yǎng)液,加入O.1mol/L PBS洗滌各孔,倒掉PRS,加入6.5%TCA 0.05ml,4℃放置30min,再加入0.25ml的DTNB溶液,10min后在420nm處比色。
(四)結果
可計算受試物組細胞GSH的相對含量(%)
細胞GSH的相對含量越高,則細胞毒性越低;細胞GSH的相對含量越低,則細胞毒性越高。也可計算細胞GSH的含量,但要先繪制GSH的標準曲線,方法類似于蛋白質標準曲線。
(五)注意事項
若細胞在24孔培養(yǎng)板或6孔培養(yǎng)板上培養(yǎng),可將細胞刮下來,經(jīng)超聲破碎或用溶解液溶解,再測定GSH量,但在96孔培養(yǎng)板上培養(yǎng)則不必刮細胞,可直接經(jīng)6.5%TCA提取GSH,直接比色。
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