[實驗原理]

    大腸桿菌是含有長約3000Kb的環(huán)狀染色體的棒狀細菌，它能在僅含碳水化合物（如葡萄糖，提供碳源和能量）和提供氮、磷、微量元素的無機鹽的極限培養(yǎng)基上快速生長。如果用含氨基酸、核苷酸前體、維生素以及其它一些細菌不能合成的代謝成分的豐富培養(yǎng)基來培養(yǎng)，那么大腸桿菌會生長的更快。大多數(shù)應(yīng)用于DNA重組技術(shù)的細菌是大腸桿菌K-12株的衍生菌株。

    當(dāng)大腸桿菌在液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)時，其開始裂殖前，先進入一個生長滯后期。在豐富培養(yǎng)基中，它能在20-30min內(nèi)復(fù)制一代，這種指數(shù)生長相稱之為對數(shù)期。zui后，當(dāng)培養(yǎng)基中的營養(yǎng)成分和氧耗盡或當(dāng)培養(yǎng)基中廢物的含量達到抑制細菌的快速生長的濃度時，菌體密度就達到一個比較恒定的值。在通常的實驗室培養(yǎng)中，在這一時期的細胞密度一般為1*109—2*109ml，細胞停止迅速分裂。這就是細菌生長的飽和期，而所謂的新鮮飽和即指當(dāng)培養(yǎng)液中細胞密度剛到達這一水平。

    培養(yǎng)特征是指微生物在培養(yǎng)基上所表現(xiàn)的群體形態(tài)和生長情況。細菌培養(yǎng)特征的常規(guī)檢驗包括平面上的菌落特征，液體培養(yǎng)時的生長特征以及斜面培養(yǎng)上的菌苔特征。菌落是個體微生物在固體培養(yǎng)基上生長繁殖成的肉眼可見的群落。在一定的培養(yǎng)條件下，不同的細菌形成的菌落形狀是不一樣的。

[儀器、材料與試劑]

(一) 儀器和材料

    超凈工作臺酒精燈 無菌培養(yǎng)皿及試管 接種環(huán) 無菌牙簽 涂布棒DH5α菌株

(二) 試劑

    LB液體培養(yǎng)基：每升含10g胰蛋白胨、5g酵母提取物、5g NaCL、1mL 1M NaOH

    LB固體培養(yǎng)基：每升含10g胰蛋白胨、5g酵母提取物、5g NaCL、1mL 1M NaOH、15g瓊脂糖

[實驗步驟]

（一） 在固體培養(yǎng)基中培養(yǎng)

    將已熔化的LB固體培養(yǎng)基冷涼到50℃左右（即熱而不燙手），按無菌操作倒入無菌培養(yǎng)皿內(nèi)，冷卻凝固成平板，將涂布棒的三角部分浸沒于酒精中，取出后再通過燈焰，點燃其上的乙醇，待涂布棒上的火焰熄滅后，將其觸碰無菌瓊脂平板的表面使其冷卻。然后，取少許菌液（100uL）滴在平板上，用涂布棒作圓周運動將菌液涂布均勻，待平板干后于37℃倒置培養(yǎng)。待菌落長出后，觀察菌落特征

（二） 在液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)

    取5mL液體培養(yǎng)基加入一支無菌試管中，用無菌牙簽挑一個單菌落浸沒于培養(yǎng)液中并輕輕振動，使待接種的細菌分散在培養(yǎng)液中，蓋好試管，在搖床上以60r/min于37℃培養(yǎng)至飽和（約6h），觀察液體培養(yǎng)物是否混濁。利用分光光度計監(jiān)測，按每0.1 OD值大約相當(dāng)于108細胞/mL計算細菌濃度。