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一、紫外分光光度計(jì)作用和組成部件
許多有機(jī)化合物在紫外區(qū)具有特征的吸收光譜，因此可用紫外分光光度法對(duì)有機(jī)物質(zhì)進(jìn)行定性鑒定，結(jié)構(gòu)分析及定量測(cè)定．紫外分光光度法定量測(cè)定的依據(jù)是比耳定律。首先確定化合物的紫外吸收光譜，確定zui大吸收波長(zhǎng)。在選定的波長(zhǎng)下，作出化合物溶液的工作曲線，根據(jù)在相同條件下測(cè)得待測(cè)液的吸光度值來(lái)確定待測(cè)液中化合物的含量。凡具有芳香環(huán)或共軛雙鍵結(jié)構(gòu)的有機(jī)化合物，根據(jù)在特定吸收波長(zhǎng)處所測(cè)得的吸收度，可用于藥品的鑒別、純度檢查及含量測(cè)定。可見(jiàn)-紫外分光光度計(jì)。其應(yīng)用波長(zhǎng)范圍為200～400nm的紫外光區(qū)、400～850nm的可見(jiàn)光區(qū)。紫外分光光度計(jì)主要由輻射源（光源）、色散系統(tǒng)、檢測(cè)系統(tǒng)、吸收池、數(shù)據(jù)處理機(jī)、自動(dòng)記錄器及顯示器等部件組成。
許多有機(jī)化合物在紫外區(qū)具有特征的吸收光譜，因此可用紫外分光光度法對(duì)有機(jī)物質(zhì)進(jìn)行定性鑒定，結(jié)構(gòu)分析及定量測(cè)定．紫外分光光度法定量測(cè)定的依據(jù)是比耳定律。首先確定化合物的紫外吸收光譜，確定zui大吸收波長(zhǎng)。在選定的波長(zhǎng)下，作出化合物溶液的工作曲線，根據(jù)在相同條件下測(cè)得待測(cè)液的吸光度值來(lái)確定待測(cè)液中化合物的含量。凡具有芳香環(huán)或共軛雙鍵結(jié)構(gòu)的有機(jī)化合物，根據(jù)在特定吸收波長(zhǎng)處所測(cè)得的吸收度，可用于藥品的鑒別、純度檢查及含量測(cè)定。可見(jiàn)-紫外分光光度計(jì)。其應(yīng)用波長(zhǎng)范圍為200～400nm的紫外光區(qū)、400～850nm的可見(jiàn)光區(qū)。紫外分光光度計(jì)主要由輻射源（光源）、色散系統(tǒng)、檢測(cè)系統(tǒng)、吸收池、數(shù)據(jù)處理機(jī)、自動(dòng)記錄器及顯示器等部件組成。
二、手動(dòng)紫外分光光度計(jì)與自動(dòng)紫外分光光度計(jì)的區(qū)別
手動(dòng)紫外分光光度計(jì)是帶刻度盤(pán)顯示波長(zhǎng)的，只能用手動(dòng)調(diào)節(jié)波長(zhǎng)大小。
自動(dòng)紫外分光光度計(jì)是LCD或LED顯示波長(zhǎng)的，通過(guò)設(shè)置鍵選擇需要的波長(zhǎng)，再有馬達(dá)傳動(dòng)走到設(shè)置的波長(zhǎng)。
手動(dòng)紫外分光光度計(jì)是帶刻度盤(pán)顯示波長(zhǎng)的，只能用手動(dòng)調(diào)節(jié)波長(zhǎng)大小。
自動(dòng)紫外分光光度計(jì)是LCD或LED顯示波長(zhǎng)的，通過(guò)設(shè)置鍵選擇需要的波長(zhǎng)，再有馬達(dá)傳動(dòng)走到設(shè)置的波長(zhǎng)。
三、紫外分光光度計(jì)測(cè)定樣品步驟
1、首先，知道所需要測(cè)量物質(zhì)的特征吸收波長(zhǎng)是多少，這個(gè)可在國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)或其他相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)或方法。例如測(cè)量總氮的話，就需要220和275nm這2個(gè)波長(zhǎng)，所以必須買紫外的光度計(jì)，并且?guī)щp波長(zhǎng)測(cè)定功能，例如測(cè)總磷是697nm，只需買臺(tái)可見(jiàn)光度計(jì)就可以了。
2、第二步：知道所測(cè)量的物質(zhì)的實(shí)驗(yàn)方法，需要哪些儀器和設(shè)備，還有玻璃器皿等，同時(shí)還有比較完成測(cè)量所需要的所有化學(xué)試劑等。這個(gè)可以在標(biāo)準(zhǔn)或?qū)嶒?yàn)方法中找到，基本在互聯(lián)網(wǎng)上都可以找到電子版的測(cè)量方法。
3、第三步：配置好所需測(cè)量物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)濃度溶液，一般是5~8個(gè)標(biāo)準(zhǔn)溶液，濃度建議從高到低，建議每個(gè)不同濃度貼上標(biāo)簽，以防順序搞錯(cuò)。注意，部分實(shí)驗(yàn)需要往標(biāo)準(zhǔn)溶液中加顯色劑之后才可以用光度計(jì)進(jìn)行測(cè)量。
4、第四步：設(shè)置好光度計(jì)的測(cè)量波長(zhǎng)，這就需要熟悉光度計(jì)的基本操作，一般測(cè)量物質(zhì)的濃度都是用的標(biāo)準(zhǔn)曲線法，就是對(duì)應(yīng)光度計(jì)中的定量測(cè)量功能。具體操作時(shí)*步，把儀器的波長(zhǎng)調(diào)整到我們所需要的波長(zhǎng)，例如測(cè)量總磷直接把波長(zhǎng)走到697nm，之后放入裝好蒸餾水的比色皿到樣品室做空白，就是熟稱的調(diào)零。第三部把標(biāo)準(zhǔn)溶液放入樣品室，依次測(cè)量他們的吸光度，儀器一般會(huì)自動(dòng)記錄之后就會(huì)給出標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，實(shí)驗(yàn)完畢。如果儀器不能直接記錄吸光度，可以先記在筆記本上，之后用excel軟件進(jìn)行計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)曲線。判斷做出的標(biāo)準(zhǔn)曲線是否能用，看哪個(gè)R值即那個(gè)相關(guān)系數(shù)，一般zui少做出0.999就可以用了，差一點(diǎn)的儀器也可以做出0.99.
5、第五步：把未知樣品放入樣品室就可以直接測(cè)量出樣品濃度。
1、首先，知道所需要測(cè)量物質(zhì)的特征吸收波長(zhǎng)是多少，這個(gè)可在國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)、行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)或其他相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)或方法。例如測(cè)量總氮的話，就需要220和275nm這2個(gè)波長(zhǎng)，所以必須買紫外的光度計(jì)，并且?guī)щp波長(zhǎng)測(cè)定功能，例如測(cè)總磷是697nm，只需買臺(tái)可見(jiàn)光度計(jì)就可以了。
2、第二步：知道所測(cè)量的物質(zhì)的實(shí)驗(yàn)方法，需要哪些儀器和設(shè)備，還有玻璃器皿等，同時(shí)還有比較完成測(cè)量所需要的所有化學(xué)試劑等。這個(gè)可以在標(biāo)準(zhǔn)或?qū)嶒?yàn)方法中找到，基本在互聯(lián)網(wǎng)上都可以找到電子版的測(cè)量方法。
3、第三步：配置好所需測(cè)量物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)濃度溶液，一般是5~8個(gè)標(biāo)準(zhǔn)溶液，濃度建議從高到低，建議每個(gè)不同濃度貼上標(biāo)簽，以防順序搞錯(cuò)。注意，部分實(shí)驗(yàn)需要往標(biāo)準(zhǔn)溶液中加顯色劑之后才可以用光度計(jì)進(jìn)行測(cè)量。
4、第四步：設(shè)置好光度計(jì)的測(cè)量波長(zhǎng)，這就需要熟悉光度計(jì)的基本操作，一般測(cè)量物質(zhì)的濃度都是用的標(biāo)準(zhǔn)曲線法，就是對(duì)應(yīng)光度計(jì)中的定量測(cè)量功能。具體操作時(shí)*步，把儀器的波長(zhǎng)調(diào)整到我們所需要的波長(zhǎng)，例如測(cè)量總磷直接把波長(zhǎng)走到697nm，之后放入裝好蒸餾水的比色皿到樣品室做空白，就是熟稱的調(diào)零。第三部把標(biāo)準(zhǔn)溶液放入樣品室，依次測(cè)量他們的吸光度，儀器一般會(huì)自動(dòng)記錄之后就會(huì)給出標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，實(shí)驗(yàn)完畢。如果儀器不能直接記錄吸光度，可以先記在筆記本上，之后用excel軟件進(jìn)行計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)曲線。判斷做出的標(biāo)準(zhǔn)曲線是否能用，看哪個(gè)R值即那個(gè)相關(guān)系數(shù)，一般zui少做出0.999就可以用了，差一點(diǎn)的儀器也可以做出0.99.
5、第五步：把未知樣品放入樣品室就可以直接測(cè)量出樣品濃度。
四、紫外分光光度計(jì)連續(xù)測(cè)量一個(gè)樣品，沒(méi)拿出來(lái)出現(xiàn)吸收值下降原因
這是由于開(kāi)始外壁上的溶液沒(méi)有擦干凈，需檢查一下儀器是否穩(wěn)定，是否存在儀器造成的基線漂移，如果是同一個(gè)比色皿沒(méi)有更換待測(cè)樣品溶液的話，便是儀器的問(wèn)題，如果波動(dòng)范圍為千分之幾的波動(dòng)誤差，大可以忽略不計(jì)。另外，可在此波長(zhǎng)下，用純水連續(xù)多次測(cè)定來(lái)觀測(cè)機(jī)器的穩(wěn)定性。有可能是儀器不太穩(wěn)定：1.儀器沒(méi)有事先預(yù)熱，不穩(wěn)定；2.光源已經(jīng)不行啦；3.聚集體隨著時(shí)間分解了，感覺(jué)不對(duì)路兩種可能：氘燈壽命出了問(wèn)題；重新放入的樣如果不是一個(gè)容量瓶的話，建議做下溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)考慮是否是檢測(cè)器的問(wèn)題，當(dāng)拿出樣品打開(kāi)蓋光源遮住。
這是由于開(kāi)始外壁上的溶液沒(méi)有擦干凈，需檢查一下儀器是否穩(wěn)定，是否存在儀器造成的基線漂移，如果是同一個(gè)比色皿沒(méi)有更換待測(cè)樣品溶液的話，便是儀器的問(wèn)題，如果波動(dòng)范圍為千分之幾的波動(dòng)誤差，大可以忽略不計(jì)。另外，可在此波長(zhǎng)下，用純水連續(xù)多次測(cè)定來(lái)觀測(cè)機(jī)器的穩(wěn)定性。有可能是儀器不太穩(wěn)定：1.儀器沒(méi)有事先預(yù)熱，不穩(wěn)定；2.光源已經(jīng)不行啦；3.聚集體隨著時(shí)間分解了，感覺(jué)不對(duì)路兩種可能：氘燈壽命出了問(wèn)題；重新放入的樣如果不是一個(gè)容量瓶的話，建議做下溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)考慮是否是檢測(cè)器的問(wèn)題，當(dāng)拿出樣品打開(kāi)蓋光源遮住。
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