1.試劑和溶液

1）轉(zhuǎn)印緩沖液：0.025M Tris base , 0.187 M甘氨酸 , 25%甲醇

2）氨基黑溶液：0.1% 酸性黑10B

3）1×TBST：25mM Tris-HCl ( pH 8.0 ) , 0.2 M NaCl ,0.1%Tween 20

4）封閉液：TBST配制的5%牛奶

5）抗體稀釋液：TBST配制的5%牛奶

6）顯色系統(tǒng)：ECL顯色

2.實(shí)驗(yàn)步驟

1電泳：將裂解液進(jìn)行SDS-PAGE電泳，80v，30分鐘，120v，90分鐘；

2轉(zhuǎn)膜：PVDF膜在甲醇中浸泡約30秒左右，濾紙浸泡在轉(zhuǎn)印緩沖液預(yù)濕，半干法轉(zhuǎn)印到PVDF膜上，10v，150分鐘；

3染色：氨基黑染色5分鐘，甲醇褪去背景色，觀(guān)察條帶；

4膜活化：將PVDF膜置于甲醇活化1min，用純水洗膜2次后再用TBST洗滌3次；

5封閉：將膜條置于5%牛奶或2% BSA中，室溫混搖2h；

6一抗孵育：將待檢抗體用3%牛奶或2% BSA稀釋到合適濃度（參照抗體說(shuō)明書(shū)，根據(jù)客戶(hù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，稀釋度上下浮動(dòng)一個(gè)數(shù)量級(jí)都為正常），將膜放入對(duì)應(yīng)的已稀釋待檢樣品中，置4℃混搖孵育隔夜；

7洗滌：取出膜放在TBST中洗滌3×5min；

8二抗孵育：將膜取出放入稀釋好的HRP標(biāo)記的二抗（參照二抗說(shuō)明書(shū)進(jìn)行稀釋?zhuān)┲校覝鼗鞊u2h；

9洗滌：取出膜放在TBST中洗滌3×5min；

10ECL顯色：將膜取出放入混勻的ECL顯色液中，孵育3min，將膜取出貼在有熒光角標(biāo)的膠片上，迅速用保鮮膜包好；

11曝光：把底片放在暗盒中，根據(jù)熒光強(qiáng)度分別對(duì)X光膠片作不同時(shí)間段的曝光，曝光結(jié)束后，將底片取出，1min顯影，30s清洗，1min定影，30s清洗，晾干；

12結(jié)果分析：用掃描儀將曝光后的X光膠片掃描，做后續(xù)結(jié)果分析。

慧穎生物為完善的產(chǎn)品供應(yīng)渠道和售后服務(wù)。我們力求工作，在處理客戶(hù)的咨詢(xún)、訂購(gòu)、到貨、售后服務(wù)、等方面追求更專(zhuān)業(yè)、更快捷、更及時(shí)。

上海試劑銷(xiāo)售的經(jīng)營(yíng)原則是“質(zhì)量*，誠(chéng)信*”，以“質(zhì)量是企業(yè)的生命，誠(chéng)信是經(jīng)營(yíng)的資本”為警醒，嚴(yán)把所售出商品的質(zhì)量關(guān)，不做任何有損顧客利益的事情。

一直以來(lái)試劑銷(xiāo)售都為廣大科研工作者的工作提供材料或者是研究條件，我們是依托廣大科研工作者的信任才能發(fā)展至今，并且與廣大科研者的科研工作一直成長(zhǎng)，我們對(duì)此一直非常感謝眾多的新老顧客，如今又是一年的試劑購(gòu)買(mǎi)旺季，我們?cè)噭╀N(xiāo)售也是為了感謝并且回饋廣大新老顧客，特推出生物試劑銷(xiāo)售中心熱賣(mài)動(dòng)物血清，確保，確保質(zhì)量穩(wěn)定，爭(zhēng)取批次間差異降到zui小，真正的讓您感到物有所值。試劑銷(xiāo)售在此希望廣大科研工作的工作可以步步皆高，生活如意幸福。

生物試劑銷(xiāo)售中心細(xì)胞庫(kù)400種類(lèi)細(xì)胞株細(xì)胞系，20多株耐藥株，超低折扣，種類(lèi)涵蓋：成纖維細(xì)胞 長(zhǎng)尾綠猴胚胎細(xì)胞 長(zhǎng)尾綠猴腎細(xì)胞 小鼠乳腺癌細(xì)胞 人膀胱癌細(xì)胞 人T細(xì)胞白血病細(xì)胞 人腎細(xì)胞腺癌細(xì)胞 人腎透明細(xì)胞腺癌細(xì)胞 人甲狀腺癌細(xì)胞 卵巢癌細(xì)胞 干細(xì)胞 結(jié)腸癌細(xì)胞 胃癌細(xì)胞 乳腺類(lèi)細(xì)胞 等

細(xì)胞室專(zhuān)家，植物細(xì)胞培養(yǎng)，原代細(xì)胞培養(yǎng)，細(xì)胞飼養(yǎng)界*—試劑銷(xiāo)售

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主要耐藥株種類(lèi)：人乳腺癌阿霉素耐藥細(xì)胞株，人乳腺癌紫杉醇耐藥株，人肺腺癌紫杉醇耐藥株，人肝癌氟尿嘧啶耐藥株，人結(jié)腸癌長(zhǎng)春新堿耐藥株，人口腔上皮癌長(zhǎng)春新堿耐藥株，人結(jié)腸癌紫杉醇耐藥株，人結(jié)腸癌氟尿嘧啶耐藥株，人卵巢癌順鉑耐藥株，人白血病阿霉素耐藥株，人卵巢癌紫杉醇耐藥株，人胃癌順鉑耐藥株，人白血病阿霉素耐藥株，人乳腺癌阿霉素耐藥細(xì)胞株，人結(jié)腸癌長(zhǎng)春新堿耐藥株，人肝癌氟尿嘧啶耐藥株，人乳腺癌抗雌激素耐藥株，人乳腺癌Tamoxifen耐藥株，小鼠激素依賴(lài)性乳腺癌細(xì)胞。

熱賣(mài)耐藥株代號(hào)：K562/Adr細(xì)胞，BIU-87/Adr細(xì)胞，A549/DDP細(xì)胞，NCI-H446/VP細(xì)胞，A549/Taxol細(xì)胞，A549/DDP細(xì)胞，H1975/培美曲塞細(xì)胞，BEL-7402/FU細(xì)胞，HCT-8/VCR細(xì)胞，HCT-8/FU細(xì)胞，HCT-8/Taxol細(xì)胞，A2780/Taxol細(xì)胞，A2780/DDP細(xì)胞，MCF-7/Adr細(xì)胞，Eca-109/VCR細(xì)胞，PATU-8988/FU細(xì)胞，PATU-8988/FU細(xì)胞，HCT116/L-OHP細(xì)胞，LOVO/ADR細(xì)胞，SGC7901/DDP細(xì)胞，SGC7901/VCR細(xì)胞，L1210/DDP細(xì)胞，H446/VP細(xì)胞，COC1/DDP細(xì)胞，HepG2/ADR細(xì)胞等。