文章標(biāo)題：J558細(xì)胞

關(guān)鍵詞：J558細(xì)胞培養(yǎng)，J558細(xì)胞價格，來源，染色鑒定，特征特性

中文名稱：小鼠骨髓瘤細(xì)胞

生長狀態(tài)：貼壁生長

來源：美國ATCC

1.試劑和溶液

乙醇: 無水乙醇，95%乙醇，85%乙醇，70%乙醇

抗原修復(fù)液: 0.01M的檸檬酸鈉緩沖液：58.82g檸檬酸三鈉及7.56g檸檬酸溶于200ml純水，調(diào)pH至 6.0，純水1:100稀釋為工作液

3%過氧化氫-甲醇: 30%的過氧化氫與無水甲醇1:9稀釋

10X PBS: 80g NaCl，2g KCl, 14.4g Na2HPO4 和2.4g KH2PO4 加1 L純水，調(diào)pH至 7.4

洗滌液: 1×PBS：純水稀釋10× PBS；1× PBST：含0.05% Tween-20 的1×PBS（1×PBST）super block，生物素標(biāo)記的UltraTekAnti-Polyvalent二抗，酶標(biāo)親和素UltraTek HRP，DAB

顯色試劑盒：Cat. KT1002a

抗體稀釋液：3%BSA-PBS

0.5%鹽酸-乙醇：0.5～1%鹽酸，95.0～95.5%乙醇

蘇木素：蘇木精2g溶于250ml無水乙醇，十六水合硫酸鋁17.6g 溶與750ml純水，以上溶液充分混合，加入碘酸鈉 0.2g和冰醋酸20ml

2.實(shí)驗(yàn)步驟

1組織固定：烘箱溫度65-75℃ 30min或者65℃隔夜；

2脫蠟：二甲苯浸泡三次，每次10分鐘；

3水化：依次經(jīng)過無水乙醇，95%乙醇，85%乙醇，70%乙醇浸泡，每次5min；

4洗滌：自來水沖洗1次，PBS浸泡3min；

5抗原修復(fù)：放入稀釋100倍的檸檬酸鹽緩沖液(pH 6.0) 中，高壓鍋煮沸10min，常溫冷卻30min；

6洗滌：純水浸泡2次，PBS浸泡1次，每次3min；

7滅活酶：室溫下3%過氧化氫-甲醇暗處處理切片15min；

8洗滌：純水浸泡1次，PBS浸泡2次，每次3min；

9封閉：加入適當(dāng)體積的super block（KT1002a Reagent A），37℃溫箱孵育5min；

10洗滌：純水浸泡1次，PBS浸泡2次，每次3min；

11一抗：加入反應(yīng)體積為0.15ml，適合濃度的一抗, 37℃ 濕盒孵育60min。

12洗滌：PBST浸泡3次，PBS浸泡1次，每次3min；

13加入適當(dāng)體積生物素標(biāo)記的UltraTek Anti-Polyvalent的二抗（KT1002a Reagent B），37℃濕盒孵育10min；

14洗滌：PBST浸泡3次，PBS浸泡1次，每次3min；

15加入適當(dāng)體積酶標(biāo)親和素UltraTek HRP（KT1002a Reagent C）, 37℃濕盒孵育10min；

16洗滌：PBST浸泡3次，PBS浸泡1次，每次3min；

17顯色：滴加適量DAB顯色液(KT1003a)至切片上，室溫顯色1~5min，自來水沖洗；

18復(fù)染：蘇木素染色5min，蒸餾水沖洗5min；

19分化： 0.5%鹽酸乙醇混合液中分化，自來水沖洗3-4次， PBS中浸泡10-20秒返藍(lán)，自來水沖洗2次。

20脫水：經(jīng)過70%乙醇，85%乙醇，95%乙醇，無水乙醇浸泡，每次5min；

21透明：二甲苯浸泡2次，每次10-15min；

22封片：晾干后加中性樹膠，蓋玻片封片；

23結(jié)果：顯微鏡觀察，記錄結(jié)果。 

細(xì)胞培養(yǎng)是一種無菌操作技術(shù)，要求工作環(huán)境和條件必須保證無微生物污染和不受其它有害因素的影響。細(xì)胞培養(yǎng)室和設(shè)計原則是防止微生物污染和有害因素影響，要求工作環(huán)境清潔、空氣清新，干燥和無煙塵。細(xì)胞培養(yǎng)室的設(shè)計原則一般是無菌操作區(qū)設(shè)在室內(nèi)較少走動的內(nèi)側(cè)，常規(guī)操作和封閉培養(yǎng)于一室，而洗刷消毒在另一室。

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