個別組織細胞的培養(yǎng)

體內組織細胞在體外培養(yǎng)時，所需培養(yǎng)環(huán)境基本相似，但由于物種、個體遺傳背景及所處發(fā)育階段等的不同，各自要求條件有一定差別，所采取的培養(yǎng)技術措施亦不盡相同，現介紹個別組織細胞培養(yǎng)的要點如下:
一、上皮細胞培養(yǎng)
    上皮細胞包括腺上皮是很多器官如肝、胰、乳腺等的功能成分，又由于癌起源于上皮組織，故上皮細胞培養(yǎng)特別受到重視。但上皮細胞培養(yǎng)中?；祀s有成纖維細胞，培養(yǎng)時生長速度往往超過上皮細胞，并難以純化，同時上皮細胞難以在體外長期生存，因此純化和延長生存時間是培養(yǎng)關鍵。
    體內上皮細胞生長在膠原構成的基膜，因此培養(yǎng)在有膠原的底物上可能利于生長，另外人或小鼠表皮細胞培養(yǎng)在以3T3細胞為飼養(yǎng)層（用射線照射后）時，細胞易生長并可發(fā)生一定程度的分化現象。降低PH、Ca2+含量和溫度，向培養(yǎng)基中加入表皮生長因子，均有利于表皮細胞生長。
    以表皮細胞為例，用皮膚表皮和分離培養(yǎng)法可獲得純上皮細胞，其法如下（黑木凳志夫  1981）
    1、取材：外科植皮或手術殘余皮膚小塊，早產看產兒皮膚更好，取角化層薄者，切成0.5－1平方厘米小塊。
2、置0.02%EDTA中，室溫，5分鐘。
    3、換入0.25%胰蛋白酶中，4℃置夜。
    4、分離：取出皮塊，用血管鉗或鑷子將表皮與層分開。
    5、取出表皮，剪成更小的塊后，置0.25%胰酶中，37℃，30—60分鐘。
    6、反復吹打，制成懸液。
    7、培養(yǎng)：用80目不銹鋼紗網濾過后，低速離心，吸去上清。
    8、直接加入培養(yǎng)基（Eagle加20%小牛血清）制成細胞懸液，接種入培養(yǎng)瓶，CO₂溫箱培養(yǎng)。
    二、內皮細胞培養(yǎng)
 內皮細胞易于從大血管分離培養(yǎng)成單層細胞，對于研究內皮細胞再生、腫瘤促血管生長因子（TAF）等有很大價值。
  研究人內皮細胞培養(yǎng)以人臍帶靜脈灌流消化法zui為簡便，其法如下：
1、產后新鮮臍帶，無菌剪取10—15厘米長一段，如不能立即培養(yǎng)，可于12小時內保存于4℃。
2、用三通注射器吸取溫PBS液注入臍靜脈中洗去殘血，在入口處用線繩扎緊，以防液體返流。
3、用血管鉗夾緊臍帶一端，從另一端向臍靜脈中徐徐注入終濃度為0.1%的粗制膠原酶，充滿血管，消化3—10分鐘；注入口用線繩扎，以防液體返流。
4、吸出含有內皮細胞的消化液，于離心管中，注入溫PBS輕輕反復沖洗后，一并注入離心管中（此步驟可重復）。5、離心去上清，加入RPMI1640培養(yǎng)液制成細胞懸液，接種入培養(yǎng)器皿中，置溫箱培養(yǎng)。兩至三天可見細胞長成單層。
三、神經膠質細胞培養(yǎng)
    神經細胞（神經元）不易培養(yǎng)，只有在適宜情況下，如接種在膠原底層上，或加入神經生長因子和膠質細胞因子時，可出現一定程度的分化，長出突起等現象

，但很難使之增值。而神經膠質細胞是神經

組織中比較容易培養(yǎng)的成分。
  人、鼠等腦組織即可用于神經膠質細胞培養(yǎng)，不僅能獲得生長的膠質細胞，也可形成能傳代的二倍體細胞系。一般說來，膠質細胞在培養(yǎng)中生長不穩(wěn)定，不易自發(fā)轉化，但對外界因素仍保持很好的敏感性，可用ROUS病毒和SV₄等誘發(fā)轉化。
養(yǎng)方法如下：
1、從手術室無菌取腦髓灰質或白質后，仔細剝除腦膜、血管和纖維成分，置Hanks液中漂洗一、二次。
2、置于30—50倍體積的Hanks液中，此時腦組織比較柔軟，反復吹打即制成細胞懸液。
3、把懸液注入離心管室溫中直立5—10分鐘后，細胞或細胞團快自然下沉，脂肪等雜物易漂浮，可吸除上層、反復二、三次，即可排除脂肪成分和其它碎塊并獲較多細胞成分。
4、在沉降物中加入適量培養(yǎng)液，通過紗網成紗布過濾，計數并調整細胞密度。  
5、接入培養(yǎng)瓶或皿中，置5%CO₂溫箱中培養(yǎng)。
該細胞適應環(huán)境過程較長，接種后貼壁較慢。貼壁后短期內也可能不見細胞分開現象，然而一旦生長后即能迅速進入旺盛的增殖狀態(tài)。細胞傳代可以0.25%胰酶消化處理。