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解說ELISA實(shí)驗(yàn)必須設(shè)置復(fù)孔的原因2016/04/07: 在前面的技術(shù)分享內(nèi)容及操作建議中，上海恒遠(yuǎn)強(qiáng)烈建議標(biāo)準(zhǔn)品及樣本進(jìn)行復(fù)孔檢測(cè)。近日，一位來自同濟(jì)大學(xué)的姜老師致電我司何，采購(gòu)了一盒96T人HCG酶聯(lián)免疫試劑盒。在何發(fā)送出說明書及操作技巧word文檔時(shí)，姜老師問道：Elisa中為什么要設(shè)置復(fù)孔？對(duì)這一問題，何笑著答道：其實(shí)這個(gè)問題也有不少客戶問過，我們推薦設(shè)置復(fù)孔的主要原因有三個(gè)。①計(jì)算平均值，確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果更準(zhǔn)確；②解決實(shí)驗(yàn)中誤操作造成的跳孔現(xiàn)象；③計(jì)算CV值，對(duì)實(shí)驗(yàn)的操作和試劑盒的精密度進(jìn)行評(píng)估。技術(shù)指導(dǎo)：購(gòu)買我公司Elisa試劑盒，在實(shí)驗(yàn)中遇到

血清的鑒別方法及作用2016/03/31: 血清的鑒別方法：血液凝固析出的淡黃色透明液體。如將血液自血管內(nèi)抽出，放入試管中，不加抗凝劑，則凝血反應(yīng)被激活，血液迅速凝固，形成膠凍。凝血塊收縮，其周圍所析出之淡黃色透明液體即為血清，也可于凝血后經(jīng)離心取得。在凝血過程中，纖維蛋白原轉(zhuǎn)變成纖維蛋白塊，所以血清中無(wú)纖維蛋白原，這一點(diǎn)是與血漿zui大的區(qū)別。而在凝血反應(yīng)中，血小板釋放出許多物質(zhì)，各凝血因子也都發(fā)生了變化。這些成分都留在血清中并繼續(xù)發(fā)生變化，如凝血酶原變成凝血酶，并隨血清存放時(shí)間逐漸減少以至消失。這些也都是與血漿區(qū)別之處。但大量未參加凝

TUNEL法檢測(cè)細(xì)胞凋亡的優(yōu)勢(shì)2016/03/29: TUNEL法檢測(cè)細(xì)胞凋亡的優(yōu)勢(shì)細(xì)胞凋亡中,染色體DNA雙鏈斷裂或單鏈斷裂而產(chǎn)生大量的粘性3'-OH末端，可在脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶（TdT）的作用下，將脫氧核糖核苷酸和熒光素、過氧化物酶、堿性磷酸酶或生物素形成的衍生物標(biāo)記到DNA的3'-末端，從而可進(jìn)行凋亡細(xì)胞的檢測(cè)，這類方法稱為脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的缺口末端標(biāo)記法（terminal-deoxynucleotidyltransferasemediatednickendlabeling,TUNEL）。由于正常的或正在增殖的細(xì)胞幾乎沒有D

恒遠(yuǎn)分享:血清保存的六點(diǎn)注意事項(xiàng)2016/03/23: 血清保存的六點(diǎn)注意事項(xiàng)(1)需要長(zhǎng)期保存的血清必須儲(chǔ)存于-20℃-70℃低溫冰箱中。4℃冰箱中保存時(shí)間切勿超過1個(gè)月。由于血清結(jié)冰時(shí)體積會(huì)增加約10%，因此，血清在凍入低溫冰箱前，必須預(yù)留一定體積空間，否則易發(fā)生污染或玻璃瓶?jī)隽选?2)一般廠商提供的血清為無(wú)菌，無(wú)需再過濾除菌。如發(fā)現(xiàn)血清有懸浮物，則可將血清加入培養(yǎng)液內(nèi)一起過濾，切勿直接過濾血清。(3)瓶裝血清解凍需采用逐步解凍法:-20℃至-70℃低溫冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天。然后移入室溫，待全部溶解后再分裝。在溶解過程中需不斷輕輕搖

恒遠(yuǎn)與您分享免疫組化的實(shí)驗(yàn)步驟及特點(diǎn)2016/03/16: 恒遠(yuǎn)與您分享免疫組化的實(shí)驗(yàn)步驟及特點(diǎn)免疫組化實(shí)驗(yàn)步驟：1.石蠟切片置于67℃烘箱中，烘片2小時(shí)，脫蠟至水，用pH7.4的PBS沖洗三次，每次3分鐘（3×3’）。2.取一定量pH=6.0檸檬酸鹽緩沖液，加入微波盒中，微波加熱至沸騰，將脫蠟水化后的組織切片置于耐高溫塑料切片架上，放入已沸騰的緩沖液中，中檔微波處理10分鐘，取出微波盒流水自然泠卻，從緩沖液中取出玻片，先用蒸餾水沖洗兩次，之后用PBS沖洗2×3’。（注：不是所有的抗體都需要微波修復(fù)的，視具體情況而定）3.每張切片加1滴3%H2O2，室溫

恒遠(yuǎn)實(shí)驗(yàn)技術(shù)解答ELISA試劑盒操作問題2016/03/10: 昨日，一位來自江蘇大學(xué)的董老師通過我公司上方所示的與我公司何咨詢。其中，咨詢到了一些實(shí)驗(yàn)問題，下面來看上海恒遠(yuǎn)為董老師解答ELISA試劑盒操作問題?！鲉枺簶?biāo)本檢測(cè)血清，肝，腦，腎，懷疑是組織是組織液?jiǎn)柊俜种嗌偈裁词怯糜诮M織勻漿，濃度是多少呢？組織勻漿，勻漿按10%，即1組織勻漿加9，生理鹽水勻漿可以選擇，也可以選擇，但選擇，值=7。2-7。4，濃縮液?！鲉枺寒?dāng)包在zui后的計(jì)算，使用一般的試劑盒測(cè)試來衡量組織蛋白濃度，zui后計(jì)算，我們也需要這樣做嗎如何計(jì)算?對(duì)組織樣品，我們建議做定量蛋白質(zhì)。

DEAE-瓊脂糖凝膠CL-6B操作注意事項(xiàng)2016/03/08: DEAE-瓊脂糖凝膠CL-6BDEAE-瓊脂糖凝膠CL-6B是將二乙胺基乙基鍵合在快流速瓊脂糖凝膠上形成的一種弱陰離子交換介質(zhì)。廣泛用于生物制藥和生物工程下游蛋白質(zhì)、核酸及多肽的離子交換制備。外觀本品呈白色，球狀、無(wú)嗅、無(wú)味、無(wú)肉眼可見雜質(zhì)。理化指標(biāo)項(xiàng)目指標(biāo)離子交換基團(tuán)-O-CH2CH2-N+(C2H5)2H離子交換類型弱陰離子，可交換離子Cl-基質(zhì)6%交聯(lián)瓊脂糖蛋白質(zhì)吸附容量120mgHSA/ml介質(zhì)總離子交換容量0.13~0.17mmol/ml介質(zhì)形狀球形粒徑45~165μm流速*150cm

開學(xué)特獻(xiàn)：WB實(shí)驗(yàn)的錦囊妙計(jì)2016/03/02: WesternBlot實(shí)驗(yàn)它是分子生物學(xué)、生物化學(xué)和免疫遺傳學(xué)中常用的一種實(shí)驗(yàn)方法。其基本原理是通過特異性抗體對(duì)凝膠電泳處理過的細(xì)胞或生物組織樣品進(jìn)行著色。通過分析著色的位置和著色深度獲得特定蛋白質(zhì)在所分析的細(xì)胞或組織中表達(dá)情況的信息。于此同時(shí)，我們好多客戶反映做該實(shí)驗(yàn)檢測(cè)失敗，由此分析：WB實(shí)驗(yàn)真的不好做，還是客戶沒有把握好WB實(shí)驗(yàn)的注意事項(xiàng)或者小訣竅？現(xiàn)恒遠(yuǎn)公司年終總結(jié)做WB實(shí)驗(yàn)的錦囊妙計(jì)：1.清洗好玻璃板，我公司技術(shù)強(qiáng)調(diào)這一步工作不能偷懶，很多時(shí)候跑完電泳撬膠時(shí)會(huì)因?yàn)椴ＡО宀桓蓛裟z粘在板上

ELISA實(shí)驗(yàn)中如何確定樣本的稀釋倍數(shù)2016/02/24: ELISA檢測(cè)系統(tǒng)可謂是免疫學(xué)反應(yīng)應(yīng)用到科研生產(chǎn)中zui為靈敏的技術(shù)手段。可是在新老手操作過程中總是會(huì)出現(xiàn)或大或小的問題，常見問題有：1.同一個(gè)試劑盒，每次檢測(cè)樣品時(shí)，均需要帶標(biāo)準(zhǔn)品嗎？能否節(jié)約？２.如何確定樣本的稀釋倍數(shù)？3.使用標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋液來稀釋嗎？我司資深技術(shù)統(tǒng)一做出如下答復(fù)：1:嚴(yán)格意義上，每次檢測(cè)樣品都要帶標(biāo)準(zhǔn)品，擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線。原因是每次檢測(cè)都要受不同條件的影響，比如人為操作，環(huán)境的變化等。2：不能節(jié)約，建議您盡量把樣本同時(shí)檢測(cè)3：一般來說，ELISA是不需要稀釋的，除非你的測(cè)定值超

腎病綜合征患者血清免疫球蛋白及補(bǔ)體檢測(cè)的意義2016/02/18: 腎病綜合征(NS)是指包括大量的蛋白尿、低蛋白血癥、高脂血癥和水腫等一組多種臨床癥狀的腎臟疾病。NS的臨床特點(diǎn)可描述為三高一低,三高即指大量蛋白尿(≥3.5g/d)、水腫、高脂血癥,一低是指血漿蛋白水平低(≤30g/L)。病情嚴(yán)重者會(huì)有漿膜腔積液、無(wú)尿表現(xiàn)。在NS的發(fā)生過程中由于單核巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、血小板以及炎癥介質(zhì)等侵犯患者的腎臟,從而導(dǎo)致腎小球?yàn)V過膜分子屏障和電荷屏障受損,引起腎小球?yàn)V過膜的通透性改變,對(duì)血漿蛋白(以清蛋白為主)的通透性增加,導(dǎo)致尿中蛋白含量增多,形成大量

恒遠(yuǎn)解析ELISA加樣時(shí)移液槍的正確使用方法2016/02/17: 大家經(jīng)常會(huì)討論移液的問題，這個(gè)步驟在ELISA實(shí)驗(yàn)中的卻是比較重要的。在加樣品和加顯色液的時(shí)候是定量的，產(chǎn)生氣泡可能會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果影響蠻大的?？傊?，掌握微量加樣器加樣必須注意的關(guān)鍵點(diǎn)是可以幫助您在實(shí)驗(yàn)中避免不必要的麻煩。恒遠(yuǎn)為您解析ELISA加樣時(shí)移液槍的正確使用方法。1.加樣不可太快，要避免加在孔壁上部，不可濺出和產(chǎn)生氣泡。加樣太快，無(wú)法保證微量加樣的準(zhǔn)確性和均一性。加在孔壁上部的非包被區(qū)，易導(dǎo)致非特異吸附。濺出會(huì)對(duì)鄰近孔產(chǎn)生污染。出現(xiàn)氣泡則反應(yīng)液界面有差異。2.試劑的加入在國(guó)產(chǎn)試劑盒中基本上均

如何在免疫組化中處理弱陽(yáng)性的問題2016/01/27: 如何在免疫組化中處理弱陽(yáng)性的問題如果陰性對(duì)照沒有染色而陽(yáng)性對(duì)照標(biāo)本弱陽(yáng)性，除了考慮上述因素外，還應(yīng)考慮：①標(biāo)本的固定方式，不當(dāng)?shù)墓潭ǚ绞交蚬潭〞r(shí)溫度過高，都會(huì)影響到所檢測(cè)的抗原的數(shù)量和質(zhì)量。②不適當(dāng)?shù)目乖迯?fù)方式，由于石蠟切片在制作的過程中固定劑對(duì)抗原的封閉作用，必須用抗原熱修復(fù)或酶消化或兩種同時(shí)使用的抗原雙暴露法，至于使用哪一種方法，應(yīng)參照生產(chǎn)廠家的說明，同時(shí)結(jié)合標(biāo)本的具體情況而定。③抗體的稀釋度是否過高或者孵育的溫度/時(shí)間是否正確。一般試劑生產(chǎn)廠家都會(huì)對(duì)試劑給出一定的使用范圍，但是由于使用者

甲基丁香酚的用途及保存方法2016/01/19: 甲基丁香酚用途：可作丁香香氣的提調(diào)劑?？稍诨ㄏ阈突蛩幉菹阈突驏|方香型中產(chǎn)生溫和的底蘊(yùn)。可少量用于玫瑰、香石竹、依蘭、紫丁香、梔子、風(fēng)信子、白蘭、金合歡、晚香玉、香紫蘇、薰衣草、月桂朗姆、男用古龍等香型中，也可用于食用香精，主要是作辛香的修飾劑，提供姜樣香味等，煙草香精中亦可用之。甲基丁香酚的保存方法：1。常溫保存：通常用于化學(xué)性質(zhì)比較穩(wěn)定的標(biāo)準(zhǔn)品,建議保存于干燥陰涼的地方。2。4度冷藏：用于常溫下不是很穩(wěn)定的物質(zhì),保存于冰箱冷藏室。3。-20度冷凍：用于化學(xué)性質(zhì)不穩(wěn)定,常溫下容易分解的物質(zhì)。4。

上海恒遠(yuǎn)與您分享：人B型腦鈉肽ELISA試劑盒操作與應(yīng)用2016/01/12: 使用目的：本試劑盒用于測(cè)定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中B型腦鈉肽（BNP）含量。實(shí)驗(yàn)原理本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中人B型腦鈉肽（BNP）水平。用純化的人B型腦鈉肽（BNP）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入B型腦鈉肽（BNP），再與HRP標(biāo)記的B型腦鈉肽（BNP）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。MB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的B型腦鈉肽（BNP）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在45

掌握三點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)曲線不再是難題2016/01/05: ELISA實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制選擇什么方程去擬合？做校準(zhǔn)曲線時(shí)，曲線擬合類型是選擇線性還是二次方程（曲線）。二者哪一個(gè)更？這兩個(gè)問題幾乎是剛開始接觸所有做ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)的新手必問的問題。因?yàn)闃?biāo)準(zhǔn)曲線做的好與壞會(huì)直接影響到實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，甚至是關(guān)系到實(shí)驗(yàn)的成敗。恒遠(yuǎn)技術(shù)為您總結(jié)以下要點(diǎn)：1.在S曲線的低濃度部分可以用乘冪方程很好的擬合，中低濃度部門可以用直線方程，中間部門可用對(duì)數(shù)方程，而中后段可用四參數(shù)。免疫檢測(cè)時(shí)尺度點(diǎn)（可以是倍比稀釋的，也可以不是）濃度假如和相應(yīng)的吸光度（OD）值假如能夠呈現(xiàn)直

年底搶先看:實(shí)驗(yàn)動(dòng)物各種體液、骨髓樣本的采集方法2015/12/30: 一、消化液的采集(一)唾液1.直接抽取法在急性實(shí)驗(yàn)中，可用吸管直接插入動(dòng)物口腔或唾液腺導(dǎo)管抽吸唾液，此法非常簡(jiǎn)單，但從口腔抽吸唾液會(huì)有雜質(zhì)混入。2.腮腺瘺法在慢性實(shí)驗(yàn)中,收集狗的唾液，要用外科手術(shù)方法將腮腺導(dǎo)管開口移向體外，即以腮腺導(dǎo)管為中心，切成一直徑約2～3cm的圓形粘膜片，將此粘膜片，與周圍組織分開，穿過皮膚切口引到頰外,將帶有導(dǎo)管開口的粘膜片與周圍的皮膚縫合,腮腺分泌的唾液就流出頰外。這種方法可以收集到較純凈的唾液。(二)胃液1.直接收集胃液法急性實(shí)驗(yàn)時(shí)，先將動(dòng)物麻醉，將插胃管經(jīng)口插入胃

何經(jīng)理在線解答相關(guān)ELISA試劑盒問題2015/12/25: 昨日來自遼寧醫(yī)學(xué)院的汪老師在線咨詢ELISA試劑盒并提出了一些相關(guān)ELSIA試劑盒的使用問題，對(duì)此，我司何為汪老師一一進(jìn)行分析解答。問題1：萬(wàn)一購(gòu)買了你們公司的試劑盒之后實(shí)驗(yàn)結(jié)果不理想怎么辦呢？答：實(shí)驗(yàn)結(jié)果不理想請(qǐng)及時(shí)與客服或，我們可以幫您一起分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果。如果僅憑實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)無(wú)法判斷，您可以將試劑盒發(fā)回給我們進(jìn)行售后檢測(cè)。如果是試劑盒本身的質(zhì)量問題，可以為您退換貨；如果是實(shí)驗(yàn)操作的問題，我們可以給您一些改進(jìn)的建議。問題二：為什么有的試劑盒是采用競(jìng)爭(zhēng)ELISA法？答：小分子抗原或半抗原因?yàn)槿狈勺鲓A

技術(shù)分析:為何ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)結(jié)果反應(yīng)靈敏度低2015/12/21: 安徽大學(xué)李老師在我司訂購(gòu)了小鼠HPV16L1AbElisa試劑盒。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，反映陽(yáng)性對(duì)照、質(zhì)控在內(nèi)的所有板孔顏色均較淡。這是什么原因造成的?我司技術(shù)分析如下：1.試劑盒必須在有效期內(nèi)使用，超過有效期的產(chǎn)品可能會(huì)產(chǎn)生很弱的信號(hào)。2.試劑盒沒有按規(guī)定進(jìn)行保存，受高溫影響；3.試劑、樣品用前未平衡至室溫4.加入試劑的體積和時(shí)間有誤，移液器計(jì)量不準(zhǔn)，吸嘴內(nèi)水分太多或不清潔；5.洗板及加樣過程中，酶標(biāo)受污染失活而失去催化顯色劑顯色的能力6.孵育時(shí)間及孵育溫度未達(dá)到要求，反應(yīng)板放入培養(yǎng)箱時(shí)注意溫度并及時(shí)調(diào)

如何提高雙抗原夾心法的ELISA實(shí)驗(yàn)靈敏度2015/12/14: 大家都知道在Elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)中靈敏性是非常關(guān)鍵的一步，靈敏性的高低會(huì)直接影響實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。應(yīng)如何提高雙抗原夾心法ELISA實(shí)驗(yàn)的靈敏性呢？我司何給出以下建議：歡迎參考閱讀。一般而言，降低雜交反應(yīng)緩沖液的離子強(qiáng)度（例如加PEG，商業(yè)化的產(chǎn)品有東洋坊的CanGetSignal，大概200元左右）可以提高抗原-抗體反應(yīng)的速度，提高靈敏度，但是會(huì)降低特異性（背景高了），所以需要在洗滌的時(shí)候補(bǔ)償過來。不知道你捕獲抗原和報(bào)告抗原的濃度條件是怎么優(yōu)化的，建議你多試試比例；血清的稀釋倍數(shù)選擇是否合適，多用幾種

ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)常見問題解決方案匯總2015/12/07: ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)因其靈敏度較高、特異性較好而廣泛應(yīng)用于臨床上，但操作中的各環(huán)節(jié)對(duì)檢測(cè)效果影響較大，稍不注意，就有可能導(dǎo)致顯色不全、花板。問題主要集中在這幾個(gè)方面：選材、加樣、孵育、洗板、顯色、終止、讀板。問題及解決方案具體解析如下：選材選擇質(zhì)量?jī)?yōu)良的檢測(cè)試劑，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。加樣出現(xiàn)問題可能原因1.血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣。2.手工操作中，加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過長(zhǎng)（特別是室內(nèi)溫度較高時(shí)）。3.加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。解決方案1.標(biāo)本為

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