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抗胰島細(xì)胞抗體自身抗原2012/03/09: 單個(gè)靶抗原的鑒定有助于改善胰島自身抗體的臨床應(yīng)用價(jià)值。闡明特異性T細(xì)胞和針對(duì)p-胰島細(xì)胞自身反應(yīng)的HLA作用機(jī)制，以zui終闡明引起胰島自身免疫性損害的機(jī)制。以患者血作為疾病相關(guān)抗體或T細(xì)胞的來(lái)源，結(jié)合分離的胰島或p細(xì)胞衍生細(xì)胞株已鑒定出一系列糖尿病相關(guān)自身抗原。判斷一個(gè)有重要致病作用的抗原的標(biāo)準(zhǔn)是其組織分布，在l型糖尿病中自身免疫性應(yīng)是直接針對(duì)β細(xì)胞的，但已鑒定出的糖尿病相關(guān)抗原卻大多數(shù)分布在其他組織，更進(jìn)一步地說(shuō)，ICA抗體所識(shí)別的胰島中的所有細(xì)胞而不是β細(xì)胞。按組織分布將靶抗原分成4類：①

FITC（異硫氰酸熒光素）2012/03/01: 基本信息異硫氰酸熒光素（fluoresceinisothiocyanate,FITC）純品為黃色或橙黃色結(jié)晶粉末，易溶于水和酒精溶劑。有兩種異構(gòu)體，其中異構(gòu)體Ⅰ型在效率、穩(wěn)定性與蛋白質(zhì)結(jié)合力等方面都更優(yōu)良。FITC分子量為389.4，zui大吸收光波長(zhǎng)為490～495nm，zui大發(fā)射光波長(zhǎng)為525～530nm，呈現(xiàn)明亮的黃綠色熒光。FITC在冷暗干燥處可保存多年，是目前應(yīng)用zui廣泛的熒光素。其主要優(yōu)點(diǎn)是人眼對(duì)黃綠色較為敏感，通常切片標(biāo)本中的綠色熒光少于紅色。FITC是在熒光素的基礎(chǔ)上通過(guò)化學(xué)

抗胰島細(xì)胞抗體自身抗體2012/03/01: 胰島細(xì)胞抗體（Isletcellautoantibodies，ICA）在1974年用O型血患者的胰腺組織冷凍切片，經(jīng)間接免疫熒光法（11F）檢測(cè)胰島依賴性糖尿病及其他器官特異性自身免疫性疾病患者血清時(shí)發(fā)現(xiàn)抗胰島細(xì)胞抗體。胰島細(xì)胞抗體檢測(cè)--------------------------------------------------------------------------------抗體方法新IDDM*病情控制胰島細(xì)胞抗體人類胰腺冰凍切片（11F）75％～86％2％～4％CF-胰島素補(bǔ)

Science技術(shù)新突破觀測(cè)病毒內(nèi)部2012/02/11: 生物通報(bào)道自從顯微鏡被發(fā)現(xiàn)以來(lái)，科學(xué)家們一直致力于改進(jìn)這一技術(shù)用于顯示更小的細(xì)胞結(jié)構(gòu)以深入了解人類細(xì)胞、細(xì)菌和病毒的內(nèi)部機(jī)制。如今來(lái)自國(guó)立衛(wèi)生研究員(NIH)下屬關(guān)節(jié)炎、肌肉骨骼肌皮膚疾病國(guó)家研究院(NIAMS)的研究人員開(kāi)發(fā)了一種新技術(shù)可清楚觀察到病毒內(nèi)的結(jié)構(gòu)。他們?cè)谝黄?1月13日)的《科學(xué)》(Science)雜志上報(bào)道了這一成果。生物通www.ebiotrade.com獲取：Bio-RadChemiDocMP多色熒光成像系統(tǒng)資料低溫電子顯微鏡(cryo-EM)技術(shù)是一種可幫助科學(xué)家們對(duì)諸如

華大基因、墨爾本大學(xué)Nature Genetics新文章2012/02/11: 摘要：生物通www.ebiotrade.com1月15日，來(lái)自澳大利亞墨爾本大學(xué)、華大基因等處的研究人員聯(lián)合在《自然遺傳學(xué)》(NatureGenetics)發(fā)表了題為“Whole-genomesequenceofSchistosomahaematobium”的研究論文，報(bào)告了對(duì)埃及血吸蟲(chóng)(Schistosomahaematobium)全基因組測(cè)序的研究成果。索?。篗illipore抑制劑技術(shù)手冊(cè)生物通www.ebiotrade.com生物通報(bào)道1月15日，來(lái)自澳大利亞墨爾本大學(xué)、華大基因等處的研

測(cè)序解析光合作用背后的機(jī)制2012/02/11: 摘要：生物通www.ebiotrade.com在近日召開(kāi)的植物和動(dòng)物基因組大會(huì)上，孟山都基因組分析中心的研究人員ToddMichael介紹了他們?nèi)绾卫肐onPGM測(cè)序儀對(duì)玉米石(又名白花景天)這種植物的基因組進(jìn)行測(cè)序。在干旱條件下，這種植物可從標(biāo)準(zhǔn)的C3光合作用轉(zhuǎn)換到景天酸代謝(CAM)。索?。篒onPGM測(cè)序資料生物通www.ebiotrade.com生物通報(bào)道在近日召開(kāi)的植物和動(dòng)物基因組大會(huì)上，孟山都基因組分析中心的研究人員ToddMichael介紹了他們?nèi)绾卫肐onPGM測(cè)序儀對(duì)玉米石

抗甲狀腺球蛋白抗體檢測(cè)方法臨床意義2012/02/10: 過(guò)去用于檢測(cè)Tg自身抗體的方法有：沉淀試驗(yàn)、間接免疫熒光(11F)、血凝試驗(yàn)、ELISA和放射定量分析。目前常用IIF法和ELISA法。IIF法熒光圖形為在甲狀腺濾泡腔內(nèi)出現(xiàn)波浪狀著染。在甲狀腺炎患者中抗TPO抗體檢測(cè)方法的靈敏度稍遜于抗Tg抗體，但實(shí)際上兩者的檢出率不相上下。用高靈敏度方法檢測(cè)Tg，可能會(huì)降低與疾病相關(guān)的特異性。一些評(píng)估Tg自身抗體特異性的研究表明，甲狀腺功能正常的個(gè)體與自身免疫性甲狀腺炎免疫應(yīng)答之間存有一定的差別。正常人亦可產(chǎn)生能識(shí)別相同或具有交叉反應(yīng)性抗原表位的抗體。另一方

抗體標(biāo)記直接法和間接法的選用2012/02/10: 很多免疫學(xué)技術(shù)依賴于標(biāo)記抗體的使用。對(duì)抗體進(jìn)行標(biāo)記主要是用于抗原的定位分析，在某些情況下，也可以對(duì)混雜有大量其他分子的樣本中的抗原進(jìn)行定量檢測(cè)。由于抗體與其相應(yīng)抗原具有很高的親和力，因此帶有易識(shí)別標(biāo)記物的抗體可以定位分析抗原，并且是一種理想的快速價(jià)廉的定量測(cè)定方法。需要使用標(biāo)記抗體的三種方法，即免疫染色法、免疫印跡法和免疫分析。此三種方法均能定位復(fù)雜混合物中的抗原，而且通過(guò)適當(dāng)?shù)膶?duì)照也能定量測(cè)定。就免疫染色法而言，其目的就是定位正常細(xì)胞環(huán)境中出現(xiàn)的抗原。在此背景下，所有抗原均暴露于抗體，而抗體只

凝膠電泳前的蛋白質(zhì)烷化2012/02/10: 1．如果使用經(jīng)免疫沉淀法得到的蛋白，按常規(guī)洗滌免疫復(fù)合物。盡可能*去除zui后的洗液。如果使用其他來(lái)源的蛋白，則將其轉(zhuǎn)入20mmol／L的磷酸鹽溶液中(pH7．0)，或直接在20／1l水中重懸蛋白。蛋白濃度應(yīng)低于lmg／m1。2．加入20u1．5％SDS和20mmol／LDTI。3．加熱至85C10min，仔細(xì)將上清液移入另一試管。4．加入10rd新鮮配制的0．2mmol／LN-乙基順了烯二酰亞胺(NEM)，12．5mg／m1的水溶液為飽和溶液)，使用前臨時(shí)配制。85℃溫育10min，有利于NE

用多聚甲醛固定懸浮細(xì)胞2012/02/10: 所有的固定方案必須做到：①防止抗原丟失；②透化細(xì)胞以便使抗體進(jìn)入；③盡量使抗原保持能與抗體結(jié)合的狀態(tài)；④維持細(xì)胞正常結(jié)構(gòu)。常用的固定劑種類很多，固定劑的正確選擇取決于被研究抗原的性質(zhì)及所用抗體的特性。固定劑可分為兩大類：有機(jī)溶劑和交聯(lián)劑。有機(jī)溶劑如乙醇和丙酮能夠去除脂類物質(zhì)使細(xì)胞脫水，把蛋白質(zhì)沉淀在細(xì)胞結(jié)構(gòu)上。交聯(lián)劑一般通過(guò)自由氨基基團(tuán)把生物分子橋連起來(lái)，形成一個(gè)相互連接的抗原網(wǎng)。兩種方法均使蛋白質(zhì)抗原部分變性。因此，在細(xì)胞染色中，能夠識(shí)別變性蛋白的抗體更加有用。在某些情況下，只有用此類抗體才能

免疫親和純化的操作步驟2012/02/09: 1．主要內(nèi)容純化率為1000～10000倍?？焖偌兓乖?，層析柱?？芍貜?fù)使用?？色@得純化的抗原。不能用于定量測(cè)定。純化效果取決于抗原的濃度和抗體的親和力需要適當(dāng)純化的抗體。2．操作步驟(1)將抗體結(jié)合到蛋白A或蛋白G微珠上。對(duì)于一般用途的層析柱，每毫升濕的微珠大約可以結(jié)合2mg單克隆抗體或親和純化的多克隆抗體。將抗體和蛋白A或蛋白G微珠混合制成稀薄的勻漿，在總量為10ml的溶液中加入大約lml微珠，室溫孵育1h，輕輕搖動(dòng)混勻。(2)用10倍體積的0．2mol／L硼酸鈉(pH9．0)洗滌微珠2次，

為何使用標(biāo)記蛋白2012/02/09: 標(biāo)記蛋白具有許多優(yōu)點(diǎn)。原則上，該方法為檢測(cè)各種細(xì)胞成分中感興趣的蛋白提供廠新的手段。①如果開(kāi)放閱讀框已經(jīng)被克隆化，但是由于蛋白是新發(fā)現(xiàn)的，或者由于蛋白免疫原性較弱，目前尚沒(méi)有針對(duì)該蛋白產(chǎn)物的抗體時(shí)，此標(biāo)記技術(shù)具有重要的應(yīng)用價(jià)值。隨著基因組的研究，由基因工程進(jìn)入蛋白工程，標(biāo)記技術(shù)顯得越來(lái)越重要。②由于標(biāo)記物不是天然蛋白氨基酸序列的固有部分，與標(biāo)記物結(jié)合的試劑在進(jìn)行蛋白提純過(guò)程中，對(duì)蛋白功能產(chǎn)生影響的可能性較小。③只要具備適當(dāng)?shù)妮d體，標(biāo)記蛋白可在任何細(xì)胞中進(jìn)行表達(dá)；例如，相同的標(biāo)記蛋白既可在細(xì)菌中表

Real-Time PCR2012/02/09: 所謂Real-TimePCR技術(shù)，是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)累積實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，zui后通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。利用熒光信號(hào)的變化實(shí)時(shí)檢測(cè)PCR擴(kuò)增反應(yīng)中每一個(gè)循環(huán)擴(kuò)增產(chǎn)物量的變化,通過(guò)Ct值和標(biāo)準(zhǔn)曲線的分析對(duì)起始模板進(jìn)行定量分析。real-timePCR技術(shù)即實(shí)時(shí)熒光定量PCR避免了傳統(tǒng)PCR以終產(chǎn)物監(jiān)測(cè)定量產(chǎn)生的偏差，提高實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性。該技術(shù)已經(jīng)被廣泛用于監(jiān)測(cè)細(xì)胞mRNA表達(dá)量的變化；比較不同組織的mRNA表達(dá)差異；驗(yàn)證基因芯片，siRNA干擾

探秘云南轉(zhuǎn)基因克隆豬神奇熒光助推人類醫(yī)學(xué)研究2012/02/09: 摘要：云南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院近日成功育成10頭攜帶綠色熒光蛋白和瘦素蛋白的轉(zhuǎn)基因克隆豬引起各界廣泛關(guān)注，2月3日記者在云南農(nóng)業(yè)大學(xué)了解到，這一成果將有助于脂肪沉積以及人類肥胖病和糖尿病等疾病的研究，也將使轉(zhuǎn)基因克隆技術(shù)在功能基因驗(yàn)證、疾病模型、異種器官移植等領(lǐng)域的應(yīng)用前景更為廣闊。云南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院近日成功育成10頭攜帶綠色熒光蛋白和瘦素蛋白的轉(zhuǎn)基因克隆豬引起各界廣泛關(guān)注，2月3日記者在云南農(nóng)業(yè)大學(xué)了解到，這一成果將有助于脂肪沉積以及人類肥胖病和糖尿病等疾病的研究，也將使轉(zhuǎn)基因克

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