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酶聯(lián)法檢測(cè)血吸蟲(chóng)抗體2012/10/10: [檢測(cè)方法]ELISA法[方法學(xué)原理]將血吸蟲(chóng)可溶性抗原與固相載體聯(lián)結(jié)形成固相抗原，加待檢血清，如血清中有特異性抗體則與固相抗原相結(jié)合，形成固相抗原抗體復(fù)合物；再加HRP標(biāo)羊抗人IgG抗體，形成固相抗原—抗體—羊抗人IgG酶標(biāo)記抗體復(fù)合物，在此基礎(chǔ)上加酶底物顯色，顏色深度與抗體含量成正比。[標(biāo)本準(zhǔn)備]不抗凝靜脈血2ml[試劑]1．日本分體血吸蟲(chóng)可溶性抗原2．HRP標(biāo)記羊抗人IgG3．0．05mmol／LpH9．6碳酸鹽緩沖液4．稀釋液和洗滌液5．酶底物液6．2mol／LH2504溶液7．正常人（

間接熒光抗體染色法檢測(cè)瘧疾2012/10/10: 瘧疾（malaria）是瘧原蟲(chóng)經(jīng)按蚊叮咬傳播的傳染病，臨床上以間歇性寒戰(zhàn)、高熱、大汗和脾大、貧血等為特征，惡性瘧疾能引起兇險(xiǎn)發(fā)作。常見(jiàn)檢測(cè)方法為間接熒光抗體染色法檢測(cè)瘧原蟲(chóng)抗體。[檢測(cè)方法][方法學(xué)原理]抗原片上加患者血清，若血清中含有瘧原蟲(chóng)抗體，即可與抗原結(jié)合成相應(yīng)的抗原抗體復(fù)合物，此復(fù)合物再與熒光標(biāo)記抗人IgG抗體結(jié)合，zui后通過(guò)熒光顯微鏡觀察熒光反應(yīng)。[試劑]1．0．01mol／LpH7．6PBS2．熒光標(biāo)記抗人IgG抗體3．陰性對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照血清4．抗原片[檢測(cè)步驟]1．用鉛筆將抗原片

利用玻璃微珠裂解酵母細(xì)胞2012/10/08: 裂解酵母菌的方法是將玻璃微珠和菌細(xì)胞一起渦旋振蕩進(jìn)行機(jī)械破碎。此法充分利用玻璃微珠的快速轉(zhuǎn)動(dòng)撞擊酵母菌從而機(jī)械破碎裂解酵母細(xì)胞。由此可見(jiàn)，這是一種強(qiáng)有力的裂解方法，但在裂解過(guò)程中又傳輸大量的能量，導(dǎo)致樣本的變性。因此，和哺乳動(dòng)物細(xì)胞的研究比較，酵母菌的免疫沉淀試驗(yàn)并不是一個(gè)好的方法，特別是研究蛋白質(zhì)的性質(zhì)和結(jié)構(gòu)時(shí)，該方法是不可取的。1．準(zhǔn)備工作由于免疫沉淀有多個(gè)步驟，且包括數(shù)小時(shí)孵育，因此在實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前必須安排好時(shí)間，注意適當(dāng)利用過(guò)夜孵育的間隙。這將有助于決定何時(shí)開(kāi)始裂解細(xì)胞。同時(shí)應(yīng)注意，酵母菌免

組織培養(yǎng)細(xì)胞的裂解2012/10/08: 對(duì)于組織培養(yǎng)中生長(zhǎng)的細(xì)胞，zui有效的裂解方法是用去污劑進(jìn)行處理。雖然有多種去污劑可用于裂解細(xì)胞，但zui常用的是TritonX—100或NP—40等非離子型去污劑。非離子型去污劑能溶解胞質(zhì)和細(xì)胞膜，破壞分子間許多微弱的結(jié)合鍵，并能溶解大部分經(jīng)常研究的蛋白質(zhì)抗原，但對(duì)于大分子多聚抗原則無(wú)效，在大多數(shù)情況下該抗原也是難以研究的。濃度介于0．1％～1％的去污劑即可滿(mǎn)足幾乎所有溶解需求。非離子型去污劑裂解液一般補(bǔ)充等離子濃度的鹽和接近中性的pH。在某些情況下，需要較劇烈的抽提條件以釋出所研究的抗原或除

病毒性腦炎實(shí)驗(yàn)室診斷與結(jié)果分析2012/09/22: 目前，我國(guó)流行的主要是乙型腦炎和森林腦炎。而在世界各地還有不同類(lèi)型的病毒性腦炎流行，其病原體為各種不同的蟲(chóng)媒病毒，如屬于A組病毒的東方馬腦炎、西方馬腦炎；屬于B組病毒的圣路易腦炎、波瓦生腦炎、蘇格蘭腦炎等。波瓦生腦炎波瓦生腦炎是由波瓦生腦炎病毒引起的，經(jīng)蜱傳播的中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染的自然疫源性疾病。潛伏期7—14d。起病急，持續(xù)高熱、頭痛，隨之出現(xiàn)中樞神經(jīng)癥狀及腦膜刺激征，部分病例出現(xiàn)肢體強(qiáng)直或偏癱。病死率高達(dá)50％，發(fā)病以?xún)和嘁?jiàn)。本病分布于加拿大、美國(guó)和北歐，多發(fā)生于夏秋季，其診斷主要依賴(lài)于血清

病毒性出血熱實(shí)驗(yàn)室診斷與結(jié)果分析2012/09/22: 病毒性出血熱（viralhemorrhagicfever，VHF）是指由多種RNA病毒引起，經(jīng)嚙齒動(dòng)物或節(jié)肢動(dòng)物傳播的一組臨床綜合征，微血管損害和滲透性增加為本組疾病的基本病變，肝、心、腦、腎等器官也可受累，發(fā)熱、肌痛、出血為臨床特征。不同病種間病死率差異很大。[病因?qū)W]引起病毒性出血熱的是多種RNA病毒，其中腎綜合征出血熱和漢坦病毒肺綜合征由漢坦病毒屬病毒引起；立夫特山谷熱由白蛉熱病毒屬病毒引起；克里米亞—?jiǎng)偣鲅獰嵊杉{羅病毒屬病毒引起；拉沙熱、阿根廷出血熱和玻利維亞出血熱由沙粒病毒屬病毒引起

懸浮細(xì)胞用甩片機(jī)黏附于載玻片2012/09/20: 處理懸浮細(xì)胞的一個(gè)簡(jiǎn)單辦法是在固定細(xì)胞之前把細(xì)胞黏附在固相支持物上。方法之一是使用甩片機(jī)。細(xì)胞在固定之前，用特殊的離心方法將細(xì)胞甩至載玻片上。需要注意的是離心力可使細(xì)胞壓癟并擴(kuò)張，使抗體更容易結(jié)合細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)，但也輕微扭曲了正常的細(xì)胞結(jié)構(gòu)。1．所需溶液和儀器PBS及甩片機(jī)。2．操作步驟（1）用PBS洗滌細(xì)胞（400r/min2X106／m1；離心5min），并重懸于PBS中。調(diào)整濃度至1～（2）將顯微鏡載玻片固定于甩片機(jī)的轉(zhuǎn)頭上，然后加入0．1—0．5ml細(xì)胞懸液；（3）迅速使離心力達(dá)到1200

用于染色培養(yǎng)細(xì)胞標(biāo)本的制備2012/09/20: 用于染色的培養(yǎng)細(xì)胞既可以是貼壁細(xì)胞，也可以是懸浮細(xì)胞。貼壁細(xì)胞通常使其生長(zhǎng)在合適的固相支持物上；懸浮細(xì)胞可以直接固定，也可以通過(guò)甩片或使用化學(xué)黏合劑黏附在固相支持物上。（一）貼壁細(xì)胞貼壁細(xì)胞的準(zhǔn)備比較簡(jiǎn)單，可以使其生長(zhǎng)于適當(dāng)?shù)妮d玻片、蓋玻片或塑料組織培養(yǎng)皿中。如果實(shí)驗(yàn)要求高分辨率或需拍照，細(xì)胞應(yīng)生長(zhǎng)于載玻片或蓋玻片上；如果實(shí)驗(yàn)的分辨率要求不高，或者是大量樣品的篩選，可使細(xì)胞生長(zhǎng)于塑料組織培養(yǎng)皿中。將貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)在固相支持物上有其*的優(yōu)點(diǎn)，操作步驟，如沖洗、固定、通透及染色均較簡(jiǎn)單易行，便于同時(shí)進(jìn)

用人血清進(jìn)行噬菌體ElISA2012/09/18: [器材和試劑]●包被緩沖液●PBST●PBBST[PBS，1％TritonX—100，3％BSA（Sigma）]●兔抗人Fc—特異性IgG（Pierce）：用包被緩沖液稀釋為5．0ug/ml①●HRP標(biāo)記的抗噬菌體抗體（AmershamBiosciences）：用封閉液以1/10000比例稀釋●顯色液[3，3’，5，5’—四甲基聯(lián)苯胺（TMB）液體底物系統(tǒng)，Sigma][方法]1．將200ul兔抗人Fc—特異性IgG等量分加到各孔中。4℃孵育過(guò)夜。2．用PBST洗滌多孔板。3．加250ulPBB

gⅥ-cDNA融合噬菌體親和選擇2012/09/18: 每一輪的親和選擇包括原始的或富集的gⅥ—cDNA文庫(kù)中噬菌粒顆粒的獲取和純化以及它們自身的淘選過(guò)程。介紹兩種不同的方法來(lái)抽提特異的噬菌體。1噬菌體文庫(kù)的獲取和純化在每輪淘選循環(huán)中的起始部分，（富集的）Topl0F，細(xì)胞經(jīng)輔助噬菌體被雙重感染以便產(chǎn)生和純化gⅥ—cDNAt噬菌粒顆粒，從而進(jìn)行下一輪的淘選。在淘選過(guò)程中，如果沒(méi)有特異的緩沖液且噬菌體對(duì)誘餌的親和力較高（如免疫親和篩選），此時(shí)經(jīng)雙重感染獲得的噬菌體顆粒并不一定要純化。2生物素化的誘餌的制備用不同的配體標(biāo)準(zhǔn)化淘選的一個(gè)方法是用普通的標(biāo)記物

蛋白酶的分類(lèi)及作用位點(diǎn)2012/09/10: 蛋白酶分類(lèi)作用位點(diǎn)已知抑制物氨基肽酶金屬蛋白酶帶有自由氨基的L-氨基酸氨基末端；不能分解由X-Pro、·D或·Q組成的肽鍵2，2，雙吡啶，1．1（）-菲咯啉菠蘿蛋白酶巰基蛋白酶無(wú)特異性α2巨球蛋白，TPCK，TLCK，烷化羧肽酶A鋅金屬蛋白酶帶有自由氨基酸的L—氨基酸羧基端；不能分解R、P或羥脯氨酸EDTA，EGTA羧肽酶B鋅金屬蛋白酶K，R羧基端EDTA，EGTA，堿性氨基酸羧肽酶Y絲氨酸羧肽酶氨基酸羧基端PMSF組織蛋白酶C琉基蛋白酶氨基端雙肽，可通過(guò)K，R或P氨基端作為第二或第三個(gè)氨基酸封

TCA沉淀過(guò)濾法，斑點(diǎn)法2012/09/10: TCA沉淀——過(guò)濾法1．為了檢測(cè)放射性標(biāo)記物結(jié)合蛋白質(zhì)的摻入量，每個(gè)樣本吸取一定量（通常為5／／1）加入盛有100t~lBSA溶液（1mg／m1）的1．5m1錐形管中。2．每管加入lmll0％冰冷的三氯醋酸，混勻。3．冰上孵育30min。4．將玻璃纖維濾紙置于一適當(dāng)?shù)倪^(guò)濾器上，用少量的10％三氯醋酸真空過(guò)濾，預(yù)先濕潤(rùn)濾紙。5．滴加樣本于濾紙的中央，而末摻入標(biāo)記物則通過(guò)濾紙除去，被TCA沉淀的蛋白質(zhì)則吸附在濾紙上。6．再用少量的10％三氯醋酸（數(shù)毫升）洗滌2次。7．用少量的95％乙醇洗滌2次。8．

肉毒梭菌診斷技術(shù)2012/09/07: 疾病診斷、細(xì)菌鑒定，關(guān)鍵在鑒定毒素。從材料中如能迅速檢出毒素為，檢出速度快，治療預(yù)防能及時(shí)。從癥狀、流行病學(xué)懷疑肉毒癥后，應(yīng)先千方百計(jì)地在極短時(shí)期內(nèi)證明檢材中是否有肉毒梭菌毒素，搶時(shí)間救人。在設(shè)法證明毒素存在的同時(shí)，進(jìn)行細(xì)菌分離、鑒定及產(chǎn)毒能力測(cè)定。（1）檢驗(yàn)程序檢驗(yàn)菌株是否產(chǎn)生肉毒毒素，或污染食品中是否有產(chǎn)毒素的肉毒梭菌存可按圖進(jìn)行檢驗(yàn)。檢樣接種肝湯35℃培養(yǎng)3天檢樣接種TPCYT肉湯2℃培養(yǎng)5天↓↓取液體部分7000r/min離心30min↓取上清中過(guò)滅菌↓↓↓血清學(xué)試驗(yàn)禽眼瞼閉合試驗(yàn)小白鼠

DNA限制酶分析與切割2012/09/07: 本實(shí)驗(yàn)是以質(zhì)體pBluescriptIISK（-）為材?，以?同限制酶作用，經(jīng)電泳分離DNA片段后，比較各DNA片段的泳動(dòng)?與分子?，藉此練習(xí)限制酶的使用、電泳分析及簡(jiǎn)?DNA限制圖譜（restrictionmap）的建?。以DNA操作為主的各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)必須維持溶液與容器?受核酸分解酵素污染，因此請(qǐng)同學(xué)遵守以下原則并養(yǎng)成習(xí)慣：a.請(qǐng)隨時(shí)保持實(shí)驗(yàn)桌的清潔。b.微?移液器頭及微?離心管取出后?即將蓋子蓋上。c.請(qǐng)勿用手觸摸滅過(guò)菌的微?移液器頭、微?離心管及各種容器的內(nèi)部。d.溶液打開(kāi)后，蓋子請(qǐng)勿隨意置放

制備scFv接頭DNA2012/09/02: 器材和試劑]●PCR試劑和設(shè)備●1ug任何舍有scFv及（GIy4Ser）3接頭的載體●RHuJH引物、RHuVκ引物和RHuVλ引物，10pmol/ul[方法]1．在0．5ml微量離心管內(nèi)配制用于擴(kuò)增的主混合液。所顯示的主混合液用于VH—Vκ接頭。對(duì)于VH—Vλ接頭的主混合液，n＝29。單個(gè)反應(yīng)主混合液/ul（n＝25）●水37925●10×Vent緩沖液5．0125●20×dNTPs2．562．5●VentDNA聚合酶0．512．52．取24支0．5ml試管，每管分別加入RHuJH引物和RH

電感受態(tài)大腸桿菌TGl的制備2012/09/02: 器材和試劑]●大腸桿菌TGl菌株（Stratagen）●37℃孵育箱（NewBrunswickScientmc）●SorvatlRC5離心機(jī)（或同類(lèi)型），GS3轉(zhuǎn)頭（均在4℃預(yù)冷）●預(yù)冷的500m1聚丙烯離心管●2L有擋板錐形瓶●基本培養(yǎng)瓊脂板[105gK2HP04、4．5gKH2P04、1g（NH4）2S04、0．5gNa3C6H5O72H2O、15g瓊脂加水至幾。高壓滅菌，冷卻至錐形瓶微溫；接著加入lmllmol/LMgS04、0．5ml1%維生素B：（硫胺）和10m120%右旋糖?！?×Y

2011年諾貝爾獎(jiǎng)2012/08/16: 2011年度諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)北京時(shí)間3日下午揭曉，來(lái)自加拿大、美國(guó)和盧森堡的三名科學(xué)家因在免疫系統(tǒng)方面的貢獻(xiàn)獲獎(jiǎng)。據(jù)外電報(bào)道，來(lái)自瑞典卡羅琳醫(yī)學(xué)院的消息稱(chēng)，2011年度諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)由三人分享。其中一半獎(jiǎng)勵(lì)布魯斯·巴特勒（BruceA.Beutler）和朱爾斯·霍夫曼（JulesA.Hoffmann）在激活先天免疫方面的發(fā)現(xiàn)。另外一半獎(jiǎng)勵(lì)拉爾夫·斯坦曼（RalphM.Steinman）“發(fā)現(xiàn)樹(shù)狀細(xì)胞和它在適應(yīng)性免疫中的作用”。此前曾獲得拉斯克獎(jiǎng)的中國(guó)科學(xué)家屠呦呦無(wú)緣本屆生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)。

帶血針管扎人能傳播艾滋病嗎?2012/08/13: 扎人傳播HIV，成功率低于千分之三艾滋病毒污染的血液離開(kāi)人體后，多長(zhǎng)時(shí)間病毒會(huì)死亡，目前醫(yī)學(xué)界尚未明確的答案。因?yàn)椋@與血液存儲(chǔ)環(huán)境的溫度、濕度、紫外線(xiàn)條件以及容器等都有直接關(guān)系。不過(guò)，想通過(guò)扎人傳播艾滋病毒，是非常困難的。即使是艾滋病人的新鮮血液，在無(wú)意中扎入他人體內(nèi)——比如醫(yī)生給病人打針后誤扎了自己——在不采取任何防護(hù)措施的前提下，感染艾滋病毒的幾率也只有3‰，即1000人中有3人會(huì)被感染。如果在被扎后及時(shí)采取防護(hù)措施，被艾滋病病毒感染的風(fēng)險(xiǎn)還會(huì)再減少80%。針管里的血會(huì)很快凝固，想擠出來(lái)都

華中農(nóng)大專(zhuān)家可能鎖定結(jié)核病菌基因2012/08/13: 一個(gè)新的科研成果可能使抗結(jié)核病工作前進(jìn)一大步；前日，記者從華中農(nóng)大蛋白質(zhì)組學(xué)研究中心獲悉，該校農(nóng)業(yè)微生物學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室何正國(guó)教授的課題組發(fā)現(xiàn)，基因WhiB—3可能是調(diào)控結(jié)核病原潛伏感染和耐藥性的關(guān)，鍵基因之一。據(jù)介紹，結(jié)核病的罪魁禍?zhǔn)资墙Y(jié)核分枝桿菌，而在組成結(jié)核分枝桿菌的基因中，哪些基因是起關(guān)鍵作用，并控控制其他基因，導(dǎo)致結(jié)核病病原傳染和產(chǎn)生耐藥性的基因“黑老大”呢?如果能找出它，就能有針對(duì)性的進(jìn)行研究，并生產(chǎn)出柜關(guān)藥物。何正國(guó)教授說(shuō)，基因WhiB—3可能就是起關(guān)鍵作用的功能基因之一”?；碴P(guān)成

透析袋用什么封口2012/08/08: 使用時(shí)，一端用橡皮筋或線(xiàn)繩扎緊，也可以使用特制的透析袋夾夾緊。小量體積溶液的透析，可在袋內(nèi)放一截兩頭燒園的玻璃棒或兩端封口的玻璃管，以使透析袋沉入液面以下。http://m.duoo135.com/st217887/product_7233223.htmlwww.shjinsuibio.com

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