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上海美軒生物科技有限公司
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細(xì)胞究竟怎么養(yǎng)？2024/05/13
細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的廣泛應(yīng)用讓我們對生命的奧秘有了更深一步的理解，同時也為醫(yī)學(xué)研究和臨床治療提供了重要支持。無論是研究者還是醫(yī)生，對細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的掌握都是至關(guān)重要的，它們將開啟更多關(guān)于生命的精彩探索之旅。讓我們一起走進細(xì)胞的微觀世界，探尋其中的無限可能吧！01細(xì)胞復(fù)蘇和傳代1.1細(xì)胞復(fù)蘇將凍存細(xì)胞從液氮中取出后，在37℃水浴鍋內(nèi)不斷搖動促進其融化。移入15ml離心管中，加入8ml預(yù)熱的1640wan全培養(yǎng)基，輕輕吹勻，離心，1000rpmX5min，棄上清液。加入8ml1640培養(yǎng)基清洗，棄上清液。加
傳代細(xì)胞培養(yǎng)2017/05/31
傳代細(xì)胞培養(yǎng)實驗原理：傳代細(xì)胞的培養(yǎng)使用已成功構(gòu)建的細(xì)胞株，大量培養(yǎng)狀態(tài)良好的同種細(xì)胞，并維持細(xì)胞種的延續(xù)。傳代培養(yǎng)是細(xì)胞培養(yǎng)常規(guī)操作之一，也是所有細(xì)胞生物學(xué)實驗的基礎(chǔ)。傳代細(xì)胞根據(jù)細(xì)胞的生長習(xí)性可分為貼壁細(xì)胞和懸浮細(xì)胞。實驗流程：1.觀察培養(yǎng)基是否正常，細(xì)胞狀態(tài)如何，細(xì)胞密度如何，決定是否傳代。觀察時擰緊蓋子。2.加熱PBS、versene、培養(yǎng)基，(提前做好)瓶子不要倒著放，不要讓液體接觸到瓶塞。3.打開超凈臺(先開風(fēng)機，后開照明)，用75%乙醇清潔臺面，點燃酒精燈。不要把廢液缸拿出去倒，如
熒光原位雜交原理及步驟2017/05/23
熒光原位雜交/FISH技術(shù)服務(wù)熒光原位雜交FISH的原理：熒光原位雜交（FluorescenceinsituhybridizationFISH）的基本原理是用已知的標(biāo)記單鏈核酸為探針，按照堿基互補的原則，與待檢材料中未知的單鏈核酸進行特異性結(jié)合，形成可被檢測的雜交雙鏈核酸。由于DNA分子在染色體上是沿著染色體縱軸呈線性排列，因而可以將探針直接與染色體進行雜交從而將特定的基因在染色體上定位。與傳統(tǒng)的放射性標(biāo)記原位雜交相比，熒光原位雜交具有快速、檢測信號強、雜交特性高和可以多重染色等特點，因此在分子
蛋白質(zhì)印跡的實驗原理、方法與步驟2017/05/16
蛋白質(zhì)印跡的實驗原理、方法與步驟實驗原理WesternBlot（蛋白質(zhì)印跡或免疫印跡）技術(shù)，以蛋白質(zhì)為檢測對象，“探針”是抗體，“顯色”用標(biāo)記的二抗。實驗采用聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAGE）將樣品蛋白質(zhì)分離，再轉(zhuǎn)移到固相載體（PVDF尼龍膜或NC膜）上；固相載體以非共價鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且保持電泳分離的多肽類型及其生物學(xué)活性不變；然后以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原，與其對應(yīng)的抗體（一抗）發(fā)生免疫反應(yīng)，特異性一抗再與和酶耦聯(lián)的第二抗體反應(yīng)，zui后在酶的作用下，導(dǎo)致底物顯色或化學(xué)發(fā)光顯影，來檢測
流式細(xì)胞技術(shù)實驗方法2017/05/02
流式細(xì)胞技術(shù)實驗方法PI染色操作步驟1、將單細(xì)胞懸液加入2ml圓底離心管中，離心，1500rpm,5min，棄上清液。2、加入PBS1ml離心洗滌1次，棄上清。3、加入2ml預(yù)冷的70%酒精，4℃固定30min，或是-20℃固定過夜。4、離心，棄上清液。5、用1×PBS1ml洗滌1次，離心。6、加入RNaseA(工作濃度20ug/ml)于500ul1×PBS中，37℃孵育30min，離心。7、用1×PBS1ml洗滌1次，離心。8、加入PI(工作濃度50ug/ml)于500ul1×PBS中，室溫避
ELISA 原理與類型2017/04/24
1.ELISA的原理ELISA的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學(xué)活性，酶標(biāo)記的抗原或抗體既保留其免疫學(xué)活性，又保留酶的活性。在測定時，受檢標(biāo)本（測定其中的抗體或抗原）與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開。再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體，也通過反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。此時固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物
免疫組化的標(biāo)準(zhǔn)步驟2017/04/17
免疫組化步驟（ABC法）1。4%多聚甲醛常規(guī)灌注固定，取材并置20%蔗糖溶液（4℃）中過夜。蠟塊制作。切片，貼片。0.01MKPBS清洗5min×3后；2。加入配好的0.3%的過氧化氫甲醇溶液（甲醇80ml＋0.01MKPBS100ml＋30%過氧化氫）30min，以消除內(nèi)源性過氧化物酶的影響，0.01MPBS清洗5min×3；3。加入配好的0.3%TritonX100（30%TritonX100＋0.01MKPBS100ml）30min，以增加細(xì)胞的通透性，0.01MKPBS清洗5min×3；
流式細(xì)胞術(shù)中熒光補償該如何調(diào)節(jié)？2017/04/10
在討論流式細(xì)胞術(shù)中熒光補償該如何調(diào)節(jié)的問題前，我們先了解下流式實驗為何需要調(diào)補償？熒光分子在被激發(fā)后都會發(fā)射特定波長范圍的光，但是這些熒光的發(fā)射光之間會發(fā)生光譜重疊。熒光補償?shù)恼{(diào)節(jié)是糾正熒光素發(fā)射光譜重疊的過程，即從一個被檢測的熒光信號中減掉溢漏過來的其他光。熒光發(fā)射光光譜重疊示例：以FITC和PE為例來看光譜重疊。FITC單染管的熒光會部分漏到PE通道中，而這部分需要從PE通道中減掉溢漏過來的FITC熒光。那么熒光補償該如何調(diào)節(jié)呢？?調(diào)節(jié)電壓?檢測熒光通道的自發(fā)熒光?每個熒光通道做單染管對照檢
PCR技術(shù)操作步驟2017/04/05
PCR實驗步驟典型的PCR由（1）高溫變性模板；（2）引物與模板退火；（3）引物沿模板延伸三步反應(yīng)組成一個循環(huán)，通過多次循環(huán)反應(yīng)，使目的DNA得以迅速擴增。其主要步驟是：將待擴增的模板DNA置高溫下（通常為93℃-94℃）使其變性解成單鏈；人工合成的兩個寡核苷酸引物在其合適的復(fù)性溫度下分別與目的基因兩側(cè)的兩條單鏈互補結(jié)合，兩個引物在模板上結(jié)合的位置決定了擴增片段的長短；耐熱的DNA聚合酶（Taq酶）在72℃將單核苷酸從引物的3’端開始摻入，以目的基因為模板從5’→3’方向延伸，合成DNA的新互補
諾華CAR- T療法今日獲美國FDA優(yōu)先審評資格2017/04/01
3月29日，諾華宣布美國FDA已為其CAR-T療法CTL019（tisagenlecleucel-T）的生物制劑許可申請頒發(fā)了優(yōu)先審評資格。這意味著諾華CAR-T生物制劑許可申請的審批流程有望得到進一步的縮減。CTL019zui初由賓夕法尼亞大學(xué)開發(fā)。2012年，諾華與賓夕法尼亞大學(xué)達成合作協(xié)議，共同研究、開發(fā)與商業(yè)化包括CTL019在內(nèi)的多項CAR-T療法，用以癌癥治療。目前，CTL019申請上市的適應(yīng)癥為兒童或年輕人中復(fù)發(fā)或難治性的急性B細(xì)胞型淋巴性白血病（B-cellacutelympho
細(xì)胞株和細(xì)胞系的區(qū)別2016/06/28
人教版（2002年審定通過的全一冊）高中生物教材中細(xì)胞株和細(xì)胞系的概念內(nèi)涵與浙科版的概念內(nèi)涵不同甚至*相反。人教版2004年審定通過的《現(xiàn)代生物技術(shù)專題》高中教材就沒有出現(xiàn)這二個概念。據(jù)資料記載是因為這二個概念一度混用，導(dǎo)致概念不清。人教版高中生物細(xì)胞株概念強調(diào)結(jié)束原代培養(yǎng)并可以進行傳代培養(yǎng)的細(xì)胞群，并不強調(diào)細(xì)胞群的純度；浙科版的細(xì)胞株概念強調(diào)細(xì)胞群的純度，認(rèn)為細(xì)胞株是克隆的結(jié)果。人教版高中生物細(xì)胞系概念強調(diào)這些細(xì)胞已發(fā)生部分遺傳物質(zhì)的改變，帶有癌變的可以傳代培養(yǎng)的細(xì)胞群；浙科版的細(xì)胞系概念強調(diào)
免疫熒光技術(shù)操作步驟2015/11/24
一.直接免疫熒光法測抗原基本原理將熒光素標(biāo)記在相應(yīng)的抗體上，直接與相應(yīng)抗原反應(yīng)。其優(yōu)點是方法簡便、特異性高，非特異性熒光染色少，相對使用標(biāo)記抗體用量偏大。試劑與儀器磷酸鹽緩沖鹽水（PBS）：0.01mol/L，pH7.4熒光標(biāo)記的抗體溶液：以0.01mol/L，pH7.4的PBS進行稀釋緩沖甘油：分析純無熒光的甘油9份+pH9.20.2M碳酸鹽緩沖液1份配制搪瓷桶三只（內(nèi)有0.01mol/L，pH7.4的PBS1500ml）有蓋搪瓷盒一只（內(nèi)鋪一層浸濕的紗布墊）熒光顯微鏡玻片架濾紙37℃溫箱等。
細(xì)胞傳代的一般方法2015/10/16
開始細(xì)胞傳代前，仔細(xì)檢查細(xì)胞傳代所需的儀器和試劑是否齊全：一般主要有：細(xì)胞(單層細(xì)胞，鏡檢適合)、培養(yǎng)液(MEM-0.2%LH培養(yǎng)液或MEM培養(yǎng)液或199等適合細(xì)胞有要求的培養(yǎng)液)、滅活小牛血清、慶大霉素溶液（1萬單位）、7.5％NaHC03溶液、0.25％胰蛋白酶、PBS洗液。用具：小方瓶(100m1)、克氏瓶、膠塞、吸管(10ml、1m1）、細(xì)胞吹打管（20ml）(以上用具需經(jīng)121℃至少15分鐘高壓滅菌)C02孵箱、超凈臺、倒置顯微鏡、4℃、—20℃冰箱操作步驟：鏡檢細(xì)胞，挑選生長狀態(tài)良好
影響細(xì)胞生長的幾點因素2015/09/15
一、溫度：一般哺乳類及禽類細(xì)胞體外培養(yǎng)的適宜溫度是37~38℃.溫度過高或過低都會影響到細(xì)胞的生長.細(xì)胞耐受低溫的能力比抗熱的能力強,在低溫下,細(xì)胞的代謝活力及核分裂降低.溫度低于0℃時,雖影響細(xì)胞代謝,但并無傷害作用.把細(xì)胞置于23~25℃時,細(xì)胞仍能生存和生長,但速度減緩,不過,魚類細(xì)胞的適宜培養(yǎng)溫度為23~25℃.若溫度過低,在降到冰點以下時,細(xì)胞因胞外水和胞質(zhì)結(jié)冰而受損死亡,但若向培養(yǎng)基中加入甘油或二甲基亞砜（DMSO）等保護劑,封入安瓿中后,置于液氮或低溫冰箱（-70℃）中,可起保護作
警惕化學(xué)藥物篩選中的假陽性藥物2015/05/14
新藥開發(fā)領(lǐng)域炙手可熱，大量研究人員蜂擁涌入。但是，當(dāng)中很多人缺乏應(yīng)有的引導(dǎo)，科研也做成了一團漿糊。每當(dāng)生物學(xué)家們發(fā)現(xiàn)一個與疾病相關(guān)的靶點蛋白，他們就會想方設(shè)法尋找能夠與這個蛋白質(zhì)分子結(jié)合并影響其活性的化合物，這些有苗頭的化合物常被稱為“活性化合物”。一次典型的藥物篩選流程能夠找到數(shù)千種活性化合物，它們可以作為疾病機理研究的工具，也是尋找新藥的基礎(chǔ)。但是，在篩選試驗中，很多化合物展現(xiàn)出來的“活性”僅僅是一種假陽性結(jié)果——它們的“活性”并不是基于化合物分子與蛋白質(zhì)之間特異性的作用。真正的藥物能夠作用
免疫細(xì)胞去向的一種全新機制2014/06/24
中科院上海生物化學(xué)與細(xì)胞生物學(xué)研究所陳劍峰研究組在的一項研究中，揭示了決定免疫細(xì)胞去向的一種全新機制。6月19日，相關(guān)研究成果在線發(fā)表于《發(fā)育細(xì)胞》。免疫系統(tǒng)是人體內(nèi)的一套奇妙的保護系統(tǒng)。它不但負(fù)責(zé)抵御外界細(xì)菌、微生物、病毒等的入侵，還負(fù)責(zé)清除體內(nèi)衰老、損傷、死亡以及發(fā)生癌變的自身細(xì)胞。確保免疫細(xì)胞在特定的時空遷移到人體內(nèi)的特定組織和器官是保證免疫系統(tǒng)發(fā)揮正常功能的關(guān)鍵步驟。否則，人體會出現(xiàn)自身免疫疾病甚至癌癥等嚴(yán)重疾病。但困擾科學(xué)家的是，免疫細(xì)胞是如何決定其在人體內(nèi)的去向的。在陳劍峰研究員的指
國內(nèi)*宮頸癌疫苗進入三期臨床試驗2014/05/28
國內(nèi)*個、第三個宮頸癌疫苗產(chǎn)業(yè)化項目將在廈門海滄問世，宮頸癌疫苗現(xiàn)已進入三期臨床試驗觀察階段。廈門萬泰滄海生物技術(shù)有限公司II期基地在位于海滄的廈門生物醫(yī)藥港奠基，宮頸癌疫苗產(chǎn)業(yè)化項目在此問世，并將于2018年前投產(chǎn)。該基地占地67834.644平方米，是對I期研發(fā)、生產(chǎn)基地的擴展延伸。據(jù)介紹，II期基地將立足戊肝疫苗、宮頸癌疫苗、醫(yī)療器械、抗體藥物等創(chuàng)新產(chǎn)品的研發(fā)和生產(chǎn)，產(chǎn)品起點高，技術(shù)設(shè)備*，國內(nèi)同行業(yè)水平。據(jù)悉，廈門萬泰滄海生物技術(shù)有限公司是福建省*一家疫苗生產(chǎn)企業(yè)，2005年成立，200
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