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合成多肽與重組蛋白作為抗原的分別作用2023/04/03

重組蛋白質(zhì)抗原上往往帶有多個不同的抗原決定簇，其中有些是順序決定簇，有些為結(jié)構(gòu)決定簇。利用變性的抗原免疫動物獲得多克隆抗體是針對各個抗原決定簇的抗體的混合物，在一般應(yīng)用中能夠用于檢測天然結(jié)構(gòu)或變性的目標(biāo)蛋白。利用變性蛋白做為免疫原的一個附帶的好處是變性蛋白往往有更強的免疫原性，能夠刺激動物產(chǎn)生強的免疫應(yīng)答。用做抗原目的的蛋白質(zhì)一般選擇使用大腸桿菌表達體系，因為該體系時間與金錢成本最di。為了提高目標(biāo)蛋白質(zhì)表達的可能性與純化的方便性，人們有時只表達目標(biāo)蛋白的一個小的片段，如特定的結(jié)構(gòu)域。蛋白質(zhì)特定

蛋白質(zhì)的分離純化方法以及注意事項2023/04/03

蛋白質(zhì)的分離純化在生物化學(xué)研究應(yīng)用中使用廣泛，是一項重要的操作技術(shù)。一個典型的真核細(xì)胞可以包含數(shù)以千計的不同蛋白質(zhì)，一些含量十分豐富，一些僅含有幾個拷貝。為了研究某一個蛋白質(zhì)，必須首先將該蛋白質(zhì)從其他蛋白質(zhì)和非蛋白質(zhì)分子中純化出來。一、主要方法1.蛋白質(zhì)的選擇吸附分離（利用顆粒不同程度的顆粒吸附力來使分離的目的達到）。2.按照配體特性的分離-親和層析（利用蛋白質(zhì)分子與另一種稱為配體的分子能夠特異結(jié)合這一生物性質(zhì)）3.低溫有機溶劑沉淀法，使用如甲醇，乙醇等與水可混溶的有機溶劑，降低多數(shù)蛋白質(zhì)的溶解

關(guān)于原核生物的轉(zhuǎn)錄終止形式介紹2023/03/31

原核生物的轉(zhuǎn)錄終止有兩種形式，一種是依賴ρ(Rho)因子的終止，一種是不依賴ρ因子的終止。原核生物DNA沒有共有的終止序列，而是轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物序列指導(dǎo)終止過程。轉(zhuǎn)錄終止信號存在于RNA產(chǎn)物3’端而不是在DNA模板。1、依賴ρ因子的轉(zhuǎn)錄終止Rho因子是rho基因的產(chǎn)物，廣泛存在于原核和真核細(xì)胞中，由6個亞基組成，分子量300KD。Rho因子結(jié)合在新生的RNA鏈上，借助水解ATP獲得能量推動其沿著RNA鏈移動，但移動速度比RNA聚合酶慢，當(dāng)RNA聚合酶遇到終止子時便發(fā)生暫停，Rho因子得以趕上酶。Rho因

PCR技術(shù)中常用的耐熱DNA聚合酶介紹2023/03/31

耐熱DNA聚合酶多應(yīng)用在PCR技術(shù)中。各種耐熱DNA聚合酶均具有5'-3'聚合酶活性，但不一定具有3'-5'和5'-3'的外切酶活性。3'-5'外切酶活性可以消除錯配，切平末端；5'-3'外切酶活性可以消除合成障礙。由于上述這些不同，可以將耐熱DNA聚合酶分為三類，下面遠慕生物簡單介紹一下。一、普通耐熱DNA聚合酶TaqDNA聚合酶由一種水生棲熱菌yT1株分離提取出，是發(fā)現(xiàn)的耐熱DNA聚合酶中活性最高的一種，達200,000單位/mg。具有5'-3'外切酶活性，但不具有3'-5'外切酶活性，因而

細(xì)胞培養(yǎng)實驗中培養(yǎng)液渾濁原因分析2023/03/31

培養(yǎng)基變渾濁的原因可能有如下幾點：1、細(xì)胞存在污染，污染早期可以見到細(xì)胞生長；2、不排除傳代時細(xì)胞密度過大，或者操作不當(dāng)導(dǎo)致多數(shù)細(xì)胞不貼壁，大量細(xì)胞漂浮。3、細(xì)胞破碎。細(xì)胞培養(yǎng)中常見的生物污染類型有7種,分別是細(xì)菌污染、支原體污染、原蟲污染、黑膠蟲污染、真菌污染、病毒污染以及非細(xì)胞污染.他們在細(xì)胞培養(yǎng)中污染的特點如下：1、細(xì)菌：細(xì)菌在普通倒置顯微鏡下為黑色細(xì)沙狀,根據(jù)感染細(xì)菌的不同,可有不同的外形,培養(yǎng)液一般會渾濁變黃,對細(xì)胞生長影響明顯.2、支原體：黑色的,好象多為多形,培養(yǎng)液一般培養(yǎng)液一般會

細(xì)胞培養(yǎng)液中幾種蛋白的提取方法介紹2023/03/31

蛋白質(zhì)濃縮技術(shù)是免疫學(xué)中常用的手段,現(xiàn)遠慕為科研小伙伴們介紹幾種常用的濃縮技術(shù)1、透析袋濃縮法利用透析袋濃縮蛋白質(zhì)溶液是應(yīng)用最guang的一種.將要濃縮的蛋白溶液放入透析袋（無透析袋可用玻璃紙代替）,結(jié)扎,把高分子（6000－12000）聚合物如聚乙二醇（碳蠟）、聚乙烯吡咯、烷酮等或蔗糖撒在透析袋外即可.也可將吸水劑配成30％－40％濃度的溶液,將裝有蛋白液的透析袋放入即可.吸水劑用過后,可放入溫箱中烘干或自然干燥后,仍可再用.2、冷凍干燥濃縮法這是濃縮蛋白質(zhì)的一種較好的辦法,它既使蛋白質(zhì)不易變

高氏1號培養(yǎng)基制備的操作步驟2023/03/30

高氏1號培養(yǎng)基制備的操作步驟1、稱量和溶化按配方先稱取可溶性淀粉，放入小燒杯中，并用少量冷水將淀粉調(diào)成糊狀，再加入少于所需水量的沸水中，繼續(xù)加熱，使可溶性淀粉wan全溶化。然后再稱取其他各成分，并依次溶化，對微量成分FeSO4．7H2O可先配成高濃度的貯備液，按比例換算后再加入。待所有試劑wan全溶解后，補充水分到所需的總體積。配制固體培養(yǎng)基時，將稱好的瓊脂放入已溶的試劑中，在加熱融化，最后補充所損失的水分。2、調(diào)pH用試紙測培養(yǎng)基的原始PH,如果偏酸，用滴管向培養(yǎng)基中加入1mol/LNaOH,

血液瓊脂培養(yǎng)基的制備實驗2023/03/30

實驗方法原理血液培養(yǎng)基是一種含有脫纖維動物血（一般用兔血或羊血）的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，因此除培養(yǎng)細(xì)菌所需要的各種營養(yǎng)外，還能提供輔酶（如V因子），血紅素（X因子)等特殊生長因子。因此血液培養(yǎng)基常用于培養(yǎng)，分離和保存對營養(yǎng)要求苛刻的某些病原微生物。此外，這種培養(yǎng)基還可用來測定細(xì)菌的溶血作用。實驗材料兔羊試劑、試劑盒牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基儀器、耗材三角瓶平皿注射器實驗步驟一、血液培養(yǎng)基配方二、器材1.培養(yǎng)基牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基。2.儀器或其他用具裝有5~10粒玻璃珠的無菌三角瓶，無菌注射器，無血平皿等。3

石蠟切片的酶免疫組化注意事項2023/03/30

一.石蠟切片在染色過程中出現(xiàn)脫片現(xiàn)象？一般來說，如果用多聚賴氨酸包被過的片子做正常免疫組織化學(xué)染色的話是不會掉片子的。但如果要做抗原修復(fù)的話，如果片子處理不好的話是有可能掉片子的。你可以試試一下的方法：1.一般用APES：丙酮=1:50的處理液來處理片子，處理5min左右，然后水洗，烘干既可用于貼片。如果把水滴再處理好的片子上，水比較聚的話說明片子處理的好。2.貼片子的時候，展片的時間要把握好，不要太長，否則不利于貼牢。3.烤片子也很重要，切好的片子最好先不要馬上收起來，而是水平至于烘片臺上37

大腸桿菌的生化特性簡介以及在生物技術(shù)中的應(yīng)用2023/03/30

大腸桿菌作為外源基因表達的宿主,遺傳背景清楚,技術(shù)操作簡單,培養(yǎng)條件簡單,大規(guī)模發(fā)酵經(jīng)濟,倍受遺傳工程專家的重視.目前大腸桿菌是應(yīng)用蕞廣泛,最成功的表達體系,常做高效表達的shou選體系。真核基因在大腸桿菌中表達,必須有合適的表達載體(Vector),常用載體:pBV220,pET系統(tǒng)目的基因在大腸桿菌中表達的情況:大腸桿菌更適合原核基因的表達,外源基因表達產(chǎn)量與單位體積產(chǎn)量是正相相關(guān)的,而單位體積產(chǎn)量與細(xì)胞濃度和每個細(xì)胞平均表達產(chǎn)量呈正相相關(guān).細(xì)胞濃度與生長速率,外源基因拷貝數(shù)和表達產(chǎn)物產(chǎn)量之

實驗人如何正確制備細(xì)胞周期實驗樣品2023/03/29

細(xì)胞周期分析是分子生物學(xué)常用的實驗方法，尤其在抗腫瘤藥物研究上使用普遍。但細(xì)節(jié)若是處理不好，做得再多也做不出正確的、好看的分布圖。今天遠慕生物來測下如何準(zhǔn)確制備細(xì)胞周期測試的樣品，科研實驗的小伙伴們一起來了解下！先簡單介紹下實驗原理碘化丙啶（PI）是一種核酸染料，可以與DNA和RNA結(jié)合，但其不能透過正常的細(xì)胞膜，所以對活細(xì)胞無染色作用?？赏ㄟ^冷乙醇或其他破膜劑的作用，使細(xì)胞膜通透性增加。PI進入細(xì)胞內(nèi)后，選擇性地與核酸結(jié)合，RNase裂解RNA后，細(xì)胞內(nèi)染料的熒光量與細(xì)胞核內(nèi)的DNA含量成正比

【核酸染料選擇】遠慕教您選擇符合實驗要求的核酸染料2023/03/29

核酸染料是一種靈敏、穩(wěn)定和相對安全的熒光核酸染色試劑，是生物實驗中不ke或缺的一分子，尤其是在核酸檢測相關(guān)試驗中，所以核酸染料對于分子生物學(xué)相關(guān)專業(yè)的學(xué)生來說并不陌生，該如何選擇適合自己使用的核酸染料呢？以下從幾個方面來說明：1、安全性：如果選擇EB替代染料，那么染料的安全性就是一個非常重要的指標(biāo)。安全性評估主要的檢測有Ames測試、細(xì)胞滲透性實驗、染色體畸變和正向突變分析、口服毒性分析等。在安全性方面，具有較多檢測項目和機構(gòu)出具檢測報告的核酸染料，安全性可能會更高；另外在一些報道或?qū)Ρ葦?shù)據(jù)中，

實時熒光定量PCR與普通PCR的差異2023/03/29

實時熒光定量PCR與普通PCR的區(qū)別你知道嗎？已知二者結(jié)果相同。都能說明生物體外的特殊DNA復(fù)制的整個過程的擴增效率和溶解溫度情況。實時熒光定量PCR與普通PCR的區(qū)別：1、二者系統(tǒng)組成不同熒光定量PCR儀比普通的PCR儀多了熒光信號采集系統(tǒng)和計算機分析處理系統(tǒng)。2、二者原理不同熒光定量PCR實時監(jiān)測與DNA結(jié)合的熒光染料激發(fā)的熒光，普通OCR通過檢測插入DNA中核算染料的量來測定PCR最終產(chǎn)物量。3、二者反應(yīng)要求不同熒光定量PCR對擴增片段有較高的要求，一般為100-300bp，普通PCR可以

實驗室PCR產(chǎn)物的電泳和純化分析2023/03/29

實驗室PCR產(chǎn)物的電泳及純化一、目的(1)了解PCR產(chǎn)物電泳與純化的原理。(2)熟悉和掌握PCR產(chǎn)物電泳與純化的操作。二、原理在PCR過程中，部分引物和dNTPs在Taq酶等因子的作用下以DNA模板為指導(dǎo)合成新的DNA分子，當(dāng)然還有一部分的引物和dNTPs沒有完成所期望的任務(wù),以小分子的形式存在于PCR產(chǎn)物混合液中,為了后續(xù)分子克隆的工作能夠順利進行,PCR產(chǎn)物就需要進行純化，以去除PCR產(chǎn)物混合液中殘留的Taq酶、BSA、Mgt+、引物dNTPs.buffer中的小分子以及非特異性擴增產(chǎn)物。通

遠慕教你正確提取胎牛血清白蛋白2023/03/28

胎牛血清白蛋白（BSA），又稱第五組分，是牛血清中的一種白蛋白，包含583個氨基酸殘基，分子量為66.430kDa，等電點為4.7。牛血清白蛋白在生化實驗中有廣泛的應(yīng)用，例如在westernblot中作為Blockingagent;在酶切反應(yīng)緩沖液中加入BSA，通過提高溶液中蛋白質(zhì)的濃度，對酶起保護作用。防止酶的分解和非特異性吸附，能減輕有些酶的變性，能減輕有些不利環(huán)境因素如加熱，表面張力及化學(xué)因素引起的變性。是胎牛血清中的一種球蛋白，一般獲取胎牛血清白蛋白，常常運用的方法是加熱法。下面跟著遠慕

胎牛血清與小牛血清有哪些不同？2023/03/28

在細(xì)胞培養(yǎng)之中最不ke或缺的便是細(xì)胞培養(yǎng)基，而現(xiàn)如今隨著科學(xué)技術(shù)的不斷進步，發(fā)現(xiàn)以胎牛血清和小牛血清為主的兩種細(xì)胞培養(yǎng)器效果最hao。相關(guān)的科研工作者在進行細(xì)胞培養(yǎng)時，首先需要購買相關(guān)的血清培養(yǎng)基，那么便會面臨胎牛血清和小牛血清之間的選擇，以下遠慕生物為大家介紹一下胎牛血清和小牛血清之間的區(qū)別都有哪些，來幫助各類科研工作者進行更快速的辨別與選擇。一：采集方式不同據(jù)調(diào)查得知，胎牛血清是在對懷孕八個月的母牛直接進行心臟穿刺取血得出的血清，而小牛血清是在小牛出生后一天之內(nèi)通過靜脈采血所得到的血清。這兩

怎么預(yù)防胎牛血清培養(yǎng)中出現(xiàn)小黑點？2023/03/28

為什么胎牛血清培養(yǎng)中出現(xiàn)黑點？經(jīng)過詳細(xì)分解，遠慕生物得出以下結(jié)論，為防止客戶由于操作方面而使黑點生成的辦法。對此一定要做好以下幾點。方可使細(xì)胞培養(yǎng)順利。（1）盡可能地減少血清凍融次數(shù)。（2）培養(yǎng)基無需37℃水浴。（3）培養(yǎng)基保持PH值7.0-7.2。（4）嚴(yán)格控制配制培養(yǎng)基的水質(zhì)，容器定期刷洗。（5）掌握細(xì)胞傳代的時機，細(xì)胞切勿生長過老。1、化凍將血清從-20度冰箱中取出，室溫（或浸于自來水中）化凍（約需要30分鐘至2小時，也可放于4度冰箱化凍過夜；化凍后若不馬上滅活，可以放入4度冰箱中暫時保存

遠慕教你怎么把菌種培養(yǎng)成菌液2023/03/28

把菌種培養(yǎng)成菌液的處理方法⒈光合菌群：EM菌液中的光合菌群（好氧性和厭氧性）屬于獨立營養(yǎng)微生物，它能利用土壤接受太陽熱能或以紫外線為能源，將土壤中的硫化氫和碳?xì)浠衔镏械臍浞蛛x出來，變有害物質(zhì)為無害物質(zhì)，并以植物根部的分泌物、有機物、有害氣體（硫化氫等）及二氧化碳、氮等為基質(zhì)，合成糖類、氨基酸、維生素類、氮素化合物和生理活性物質(zhì)等，是肥沃土壤和促進動植物生長的主力部隊。光合菌的代謝物質(zhì)或者被植物直接吸收，或者成為其它微生物繁殖的養(yǎng)分，光合細(xì)菌如果能夠增殖，其它的有益微生物也會增殖。⒉乳酸菌群：乳

【生化檢測】膠原蛋白提取與檢測方法2023/03/27

膠原蛋白是一種天然高分子化合物，具有一定的凝膠強度，乳化性、低黏度性、生物相容性、吸水和保濕性等，廣泛應(yīng)用于食品、醫(yī)藥保健品、化妝品等行業(yè)中。膠原蛋白主要存在于動物皮、骨、軟骨、牙齒、肌腱、韌和血管中。原料檢測及膠原蛋白提取方法：1、原料成分基礎(chǔ)檢測水分測定--直接干燥法灰分測定--550℃灰分法粗蛋白檢測--凱氏定氮法脂肪測定--索氏抽提法2、魚尾預(yù)處理，去除殘肉、硬骨、脂肪，等誰清洗，有機溶劑去除脂溶性色素，脫鈣、除蛋白后，冷凍備用。3、膠原蛋白提取4℃下膠原蛋白提取最佳工藝為鹽酸胍濃度3m

膠原纖維的膠原蛋白的染色簡介2023/03/27

膠原纖維在HE染色法被染成粉紅色，除此之外，它還可以用一些陰離子的染料來進行染色，如用淡綠可把它們?nèi)緸榫G色，用甲苯胺藍可將其染為藍色，在網(wǎng)狀纖維染色中，如不加以處理，它又可被染為棕黃色。常用的特殊染色法有VanGieson.Masson和Mallary等方法。在免疫細(xì)胞化學(xué)染色中，膠原纖維由于含的負(fù)電荷過多，常導(dǎo)致某些非特異性的染色，應(yīng)特別注意。（一）.VanGieson（V.G）染色法I.試劑的配制：weigert氏蘇木素A液：蘇木素1g（haematoxylin）*100mlB液：30%三氯