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重組蛋白真核表達系統(tǒng)與原核表達系統(tǒng)的區(qū)別2023/03/20

重組蛋白真核表達采用原核表達系統(tǒng)進行研究，主要方法是將已克隆到目的基因DNA的片段的載體轉化到細菌中，通過IPTG誘導和終純化獲得所需的目的蛋白。其優(yōu)點是可以在短時間內獲得基因表達產物，所需成本相對較低。目前的表達系統(tǒng)各有利弊，但一般理想的表達系統(tǒng)滿足以下幾點：一是特異性，不受其他內源性因素影響，只能通過外源性無毒物激活。二是不干擾，不干擾細胞通路。以及誘導劑的誘導性、生物利用度、可塑性和劑量依賴性。因此，在選擇表達系統(tǒng)時，必須充分考慮各種因素，如蛋白質性質、實驗條件、生產成本、表達水平和安全性

昆蟲細胞的保存培養(yǎng)實驗介紹2023/03/20

實驗材料昆蟲試劑、試劑盒胎牛血清臺盼藍乙醇儀器、耗材培養(yǎng)瓶培養(yǎng)箱細胞計數(shù)器攪拌臺轉子離心機實驗步驟1.將4ml含10%胎牛血清的wan全昆蟲細胞培養(yǎng)基加入一個25cm2培養(yǎng)瓶。取出一支凍存Sf9細胞的安瓿，迅速置于37℃水浴，用手前后劇烈搖動融化之，當安瓿的內容物幾乎wan全融化時，將安瓿浸入70%乙醇，消毒外壁。2.打碎安瓿頸部，將內容物轉移至25cm2培養(yǎng)瓶，用手輕輕搖動培養(yǎng)瓶，使細胞分散均勻，于27℃溫育2~3h直到細胞貼壁。3.除去舊培養(yǎng)液，換5ml含10%胎牛血清的新鮮wan全培養(yǎng)液。

蛋白質組分離技術之雙向電泳技術2023/03/17

蛋白質雙向電泳（2-DE）技術是經典的蛋白質分離技術，包含在蛋白質組學服務中。該項技術可以基于蛋白質的2種不同特性即帶電荷和分子質量來分離蛋白，廣泛用于生物學研究的各個方面。在新藥研發(fā)領域，利用雙向電泳技術可以篩選乳腺癌相關抗原及尋找藥物靶點和分析血清等研究。1、蛋白質雙向電泳技術分離蛋白質的原理蛋白質組分析的首要要求是要將來自全細胞、組織或生物體中所包含的多達幾十種混合蛋白質進行分離、檢測和分析。2-DE技術是大多數(shù)蛋白質組研究中分離復雜蛋白質混合物的shou選技術。蛋白質分離技術是蛋白質組學

免疫組化染色之抗原的高壓修復法2023/03/17

免疫組織化學染色是一項廣泛應用于腫瘤病理診斷和神經解剖學的技術，一些生物公司提供的免疫組化染色服務可以把免疫反應的特異性、組織化學的可見性巧妙地結合起來，借助顯微鏡的顯像和放大作用，在組織、細胞甚至亞細胞水平檢測各種抗原物質。免疫組化染色方法具有操作簡單、靈敏度高、特異性強等優(yōu)點，在病理診斷和病理研究領域都起著十分重要的作用。免疫組化染色質量受到多方面因素的影響，抗原修復是其影響因素之一，常見的抗原修復技術方法有高壓修復法和微波加熱修復法。在染色過程中，用甲醛固定后，在石蠟包埋過程中會使抗原性物

病原微生物的蛋白質組學研究的作用2023/03/17

病原微生物常會引起一些感染性疾病，為了解這些病原微生物的毒性因子、抗原以及進行疫苗制備，需要進行病原微生物的蛋白質組學研究，一些公司提供蛋白質組學服務。因為蛋白質是生命活動的執(zhí)行者，一切基因和轉錄層次的變化，最終都是要在蛋白質的層次發(fā)生變化才能表現(xiàn)出其生命意義，因此蛋白質組學備受生命科學研究者的關注。蛋白質是生物功能的最終執(zhí)行者，不僅開放閱讀框ORF和基因的最后確定需要蛋白質研究的參與，而且由于存在mRNA水平的加工和蛋白翻譯后修飾，基因拷貝數(shù)和蛋白質最終數(shù)量之間并沒有線性的對應關系。在后基因組

蛋白分離純化方法之免疫親和層析法2023/03/17

親和層析法是重組蛋白純化的重要方法之一，被廣泛應用蛋白質的研究領域，是分離純化和分析生物大分子尤其是蛋白質的有力工具。免疫親和層析是親和層析方法的一種，該方法利用抗體與其相應抗原的作用具有高度的特異性和高度結合力的特點，用適當?shù)姆椒▽⒖乖蚩贵w結合到層析載體上，便可有效的分離和純化各自互補的免疫物質。目前在重組蛋白純化中已經使用單克隆抗體作為親和配體的親和層析方法，利用抗體-抗原模式，有可能得到每一種目標蛋白的單抗，然后以單抗為配基，通過親和層析技術分離純化重組蛋白。該種方法的純化配屬和活性回收

【細胞密度】影響細胞培養(yǎng)的關鍵點分析2023/03/16

細胞培養(yǎng)是生物學研究中，一類重要的實驗方法。細胞養(yǎng)不好，細胞生物學研究也就無從談起。影響細胞培養(yǎng)狀態(tài)的因素有很多，細胞的密度，就是其中重要的一項。通常，細胞密度是指每單位面積或體積的細胞數(shù)。細胞培養(yǎng)的適宜細胞密度取決于特定的細胞類型和培養(yǎng)目的。不同的細胞由于來源不同，特性也會有所不同，有的細胞比較依賴于高密度才能生長，所以在進行復蘇、傳代等操作時需要注意。生長速度慢的細胞，譬如內皮細胞，初始細胞密度略高一些，生長狀態(tài)會比較好；還有一些細胞生長速度比較快，如巨噬細胞或某些腫瘤細胞，初始細胞密度較低

【細胞培養(yǎng)】細胞培養(yǎng)板的選擇和使用2023/03/16

細胞培養(yǎng)板作為培養(yǎng)細胞的一種常用和重要的工具，形狀、規(guī)格、用途多樣。你是否也為如何選擇適合的培養(yǎng)板而迷茫？你是否正為如何方便、正確使用培養(yǎng)板而苦惱？你對如何處理培養(yǎng)板是否也有困惑？對不同的培養(yǎng)板各有什么妙用你又有何體會？遠慕一一為大家解惑。細胞培養(yǎng)板的選擇1）細胞培養(yǎng)板依底部形狀的不同可分為平底和圓底（U型和V型）；2）培養(yǎng)孔的孔數(shù)有6、12、24、48、96、384、1536孔等；3）根據(jù)材質的不同有Terasaki板和普通細胞培養(yǎng)板。具體選擇時根據(jù)培養(yǎng)細胞的類型、所需培養(yǎng)體積及不同的實驗目的

【蛋白酶K小知識】蛋白酶K生產過程中的挑戰(zhàn)2023/03/16

蛋白酶K(ProteinaseK)是一種廣譜絲氨酸蛋白酶,蛋白酶K于1974年在fungusEngyodontiumalbum的提取物中發(fā)現(xiàn)。能合成該種蛋白酶的微生物能在以角蛋白(Keratin)作為唯1碳源和氮源的環(huán)境中生長，說明該酶可以消化角蛋白，因此被稱為“蛋白酶K”。蛋白酶K由一條肽鏈組成，含有277個氨基酸，該蛋白的相對分子量~28.9kDa，蛋白酶K是一種穩(wěn)定且具有高活性的絲氨酸蛋白酶。晶體和分子結構研究證據(jù)表明該酶屬于枯草素家族，具有活性位點催化三聯(lián)體(Asp39-His69-Se

實驗室試劑儲存保管的原則和注意事項2023/03/16

試劑是我們實驗室工作者的工具也是安全隱患所在點，如何正確保存是關鍵~！下面跟著遠慕生物一起了解一下吧?；瘜W品的儲存保管1.所有化學藥品的容器都要貼上清晰永jiu標簽，標明內容及其潛在危險。2.所有化學藥品都應具備物品安全數(shù)據(jù)清單。3.熟悉所使用的化學藥品的特性和潛在危害。4.對于在儲存過程中不穩(wěn)定或易形成過氧化物的化學藥品需加注特別標記。5.化學藥品應儲存在合適的高度，通風櫥內不得儲存化學藥品。6.裝有腐蝕性液體容器的儲存位置應當盡可能低，并加墊收集盤，以防傾灑引起安全事故。7.將不穩(wěn)定的化學品

標準品名詞解釋你不得不知道的那些知識2023/03/15

1.標準物質/標準樣品referencematerial（RM）具有一種或多種足夠均勻且穩(wěn)定規(guī)定特性的材料，已被確定其符合測量過程的預期用途。注1：RM是一個通用術語。注2：特性可以是定量的或定性的（例如：物質或物種的屬性）。注3：用途可包括測量系統(tǒng)的校準、測量程序的評估、給其他材料賦值和質量控制。2.有證標準物質/標準樣品certifiedreferencematerial（CRM）采用計量學上有效程序對一種或多種規(guī)定特性進行定值的標準物質/標準樣品，并附有標準物質/標準樣品證書提供規(guī)定特性的

指示劑分類、原理用量以及配制介紹2023/03/15

指示劑是化學試劑中的一類。在一定介質條件下，其顏色能發(fā)生變化、能產生渾濁或沉淀，以及有熒光現(xiàn)象等。常用它檢驗溶液的酸堿性；滴定分析中用來指示滴定終點；環(huán)境檢測中檢驗有害物。一般分為酸堿指示劑、氧化還原指示劑、金屬指示劑、吸附指示劑等。指示劑分類1、酸堿指示劑指示溶液中H+濃度的變化，是一種有機弱酸或有機弱堿，其酸性和堿性具有不同的顏色。指示劑酸HIn在溶液中的離解常數(shù)Ka=[H+][In-]/[HIn]，即溶液的顏色決定于[In-]/[HIn]，而[In-]/[HIn]又決定于[H+]。以甲基橙

【化學試劑分類】實驗人不可不知的化學試劑知識！2023/03/15

早期的化學試劑只是指“化學分析和化學試驗中為測定物質的組分或組成而使用的純粹化學藥品”。后來又被擴展為“為實現(xiàn)化學反應而使用的化學藥品”，而今的“化學試劑”所指的化學藥品早已超出了這一范疇。有人認為“在科學實驗中使用的化學藥品”都可稱為“化學試劑”。對化學試劑更全面的定義可以是：在化學試驗、化學分析、化學研究及其它試驗中使用的各種純度等級的化合物或單質。1、HPLC級高純液相色譜溶劑HPLC試劑具有以下優(yōu)點：①低紫外吸收；②非揮發(fā)性物質、游離酸、游離堿和水份含量低；③可用于熒光檢測。用途：用于液

核酸檢測的原理原來是這樣的！2023/03/14

你知道核酸檢測是怎么發(fā)現(xiàn)病毒的嗎？這種黑科技是怎么讓看不見的病毒“顯形”的？核酸是什么？從生物誕生開始，核酸就承擔著記錄和傳遞遺傳信息的功能。我們熟悉的DNA就是核酸的一種，全稱“脫氧核糖核酸”，呈雙螺旋結構，是人類遺傳物質的載體。另一種核酸大家可能比較陌生，它叫RNA，又被稱作“核糖核酸”，新型guan狀病毒遺傳物質的載體便是單鏈RNA。從本質上說，核酸是病毒最基礎的結構。病毒由DNA或RNA其中一種組成，就像DNA會賦予每個人獨1無2的外表，病毒長成什么樣子，有怎么樣的作用效應，在人體對應出

你是怎么分辨各種RNA酶的？2023/03/14

RNA酶RNA酶，是一種將RNA水解成小分子核苷酸的核糖核酸酶。不同的RNase其專一性不同，因此作用的底物及切割位點也不一樣。今天遠慕生物就給大家扒一扒各種特色RNA酶的作用及應用場景。RNaseRRNaseR是一種Mg2+依賴性的3’→5’核糖核酸外切酶，基本能消化所有線性RNA，但不消化套索或環(huán)狀RNA，或者短于7個核苷酸的具有3’突出端的雙鏈RNA。即是除了tRNAs，5SRNA和內含子套索外，大多數(shù)細胞RNAs都將被RNaseR完quan消化。應用：circRNA富集、cDNA文庫的內

你不得不知的RNA磷酸酶/外切酶/激酶知識2023/03/14

RNA核酸外切酶Terminator5'-Phosphate-DependentExonucleaseTerminatorExonuclease是一種5’→3’進行性核酸外切酶，可降解帶有5’單磷酸的RNA。它不會降解具有5’三磷酸、5’-帽結構(例如大多數(shù)真核mRNA帶有的5’-帽結構)或5’OH的RNA。它也消化帶有5’單磷酸的DNA。該酶不受蛋白形式的RNase抑制劑的抑制。應用：●鑒定RNA轉錄本的5’末端；●富集mRNA樣品，無需使用oligo(dT)、樹脂或磁珠去除rRNA；RNA磷

RNA聚合酶的種類和功能介紹2023/03/14

RNA聚合酶RNA聚合酶（RNApolymerase）是以一條DNA鏈或RNA為模板催化由核苷-5′-三磷酸合成RNA的酶。常見的RNA聚合酶是催化以DNA為模板、三磷酸核糖核苷為底物、通過磷酸二酯鍵而聚合的合成RNA的酶。另外，RNA復制也需要RNA聚合酶催化。因為在細胞內與基因DNA的遺傳信息轉錄為RNA有關，所以也稱轉錄酶。原核生物的RNA聚合酶組成和功能原核生物大腸桿菌RNA聚合酶的研究得比較透徹的，全酶由五種亞基組成，去掉δ亞基的部分稱為核心酶，核心酶本身就能催化苷酸間磷酸二酸鍵形成。

遠慕簡述抗體lgM,lgE,lgM,lgA,lgD2023/03/13

1、IgM抗體：一般為保護性抗體，具有免疫性。IgM是個體發(fā)育過程中最早合成和分泌的抗體，在胚胎發(fā)育晚期的胎兒即能產生IgM，故臍帶血lgM升高提示胎兒有宮內感染。IgM也是初次體液免疫應答中最早出現(xiàn)的抗體，是機體抗感染免疫的“先頭部隊”；血清中IgM升高，提示新近發(fā)生感染，可用于感染的早期診斷。2、IgE抗體：IgE是正常人血清中含量最少的抗體，主要由黏膜下淋巴組織中的漿細胞分泌。IgE抗體尾部與嗜堿細胞、肥大細胞的細胞膜結合。當抗體與抗原結合后，嗜堿細胞與肥大細胞釋放組織胺一類的物質促進炎癥

遠慕簡述特異性IgG抗體的四種技術2023/03/13

特異性IgG抗體技術都有什么？1.鹽析法多采用硫酸銨鹽析法或硫酸鈉鹽析法。2.凝膠過濾法蛋白質分子量不同，通過凝膠介質時的洗脫速度不同。血清蛋白的分級分離常用該法。按分子大小可分為3組：第1組：IgM和一些脂蛋白；第2組：IgG和較少量的IgA、IgD、IgE等；第3組：白蛋白、血清黏蛋白、轉鐵蛋白等。該法過濾條件溫和，不影響IgG活性。常結合鹽析法提取IgG。3.離子交換層析法常用的離子交換劑是DEAE纖維素。該法可獲得較純的IgG，且不影響抗體活性。4.親和層析法將純化抗原制成親和層析柱，抗

離子交換柱層析法（層析實驗簡介）概略2023/03/13

一、原理：有些高分子物質含有一些可以分離的基因，例如-SO3H，-COOH等，因此可以和溶液中的離子產生交換反應。如：R-SO3H＋M+————R-S3M＋H+或R-NH3OH＋CL－—————R-NH3CL＋OH－這類高分子物質通稱離子交換劑，其中使用最pu遍的是離子交換樹脂。由于一定的離子交換劑對不同離子的親和力不同，因此在洗提過程中，不同的離子在離子交換柱上的遷移速度也不同，最后得到分離。二、目的與要求：本實驗是采用Zerolit225型陽離子交換樹脂所裝的柱，選以特定的PH緩沖洗脫液來分