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樣品的采集檢測(cè)及培養(yǎng)基的滅菌方法2022/09/27: 樣品的采集及檢測(cè)一、保證采樣器具的無菌性1.玻璃器皿：采用干熱滅菌方式進(jìn)行滅菌，保證恒溫、時(shí)間足夠（但不可時(shí)間過長，導(dǎo)致玻璃器皿易裂紋而報(bào)廢）。2.取樣筐：使用前要用75%酒精進(jìn)行噴灑消毒3.取樣勺、濃奶取樣提子：要保證其清潔消毒，清潔后用75%酒精進(jìn)行擦拭消毒。4.取樣袋：可現(xiàn)用酒精進(jìn)行擦拭消毒，再在超凈臺(tái)用紫外燈照射消毒，（包裝車間要在傳遞窗用紫外燈照射消毒）。5.電子稱表面用75%酒精消毒。二、人員操作1.保證手部的清洗、消毒：取樣前及做樣前都要先洗手再消毒。2.取樣要具有代表性（隨機(jī)樣、

動(dòng)物血清的正確熱滅活方法2022/09/27: 動(dòng)物血清的熱滅活非常容易造成蛋白析出增多，若非必要，可以無需做此操作。若必須做動(dòng)物血清的熱滅活，請(qǐng)嚴(yán)格遵守以下步驟：1、保證血清*融化狀態(tài)，溫度接近常溫。2、保證水浴溫度56℃、30分鐘的原則，在水浴過程中每隔2-3分鐘搖晃瓶子，使血清內(nèi)部受熱均勻，直至滅活時(shí)間結(jié)束。注意事項(xiàng)：溫度過高、時(shí)間過久或搖晃不均勻，都會(huì)造成沉淀物的增多，甚至嚴(yán)重影響血清的品質(zhì)。在56℃水浴中，持續(xù)恒溫30分鐘。在此過程中每隔2-3分鐘搖晃瓶子，使其受熱均勻，減少蛋白的析出。為什么要熱滅活血清？加熱可以滅活補(bǔ)體系統(tǒng)。激活

血清污染和過濾的相關(guān)問題解答2022/09/27: 1、問：懷疑購買的Gibco胚胎干細(xì)胞專用胎牛血清（GibcoES專用胎牛血清）染菌，想用濾膜過濾一下，可否自己用0.22μm濾膜過濾？對(duì)血清性質(zhì)有多大影響？有做過的么？答：可以過濾的，血清當(dāng)出廠時(shí)都是0.22μm或0.1μm過濾除菌。想證明有沒有染菌不用過濾這么麻煩，只要放置于37℃過夜就可以了，如果有微生物污染會(huì)變渾濁的，如果還是澄清的就說明沒有問題的。實(shí)驗(yàn)室中血清很難直接過濾，一般要加到培養(yǎng)基中再過濾。我們實(shí)驗(yàn)室制備培養(yǎng)基時(shí)，都使用濾膜過濾，一般而言如果制備1-2瓶培養(yǎng)基，一個(gè)濾膜及一支3

關(guān)于血清分離膠你了解多少呢？2022/09/26: 血清分離膠是一種粘性流體，其結(jié)構(gòu)中含有大量氫鍵，由于氫鍵的締合作用形成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。在離心力的作用下，網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)被破壞，變成粘度低的流體。當(dāng)離心力消失之后又重新形成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)．恢復(fù)成粘度高的流體．這種性質(zhì)被稱為觸變性(thixotropy)．利用這一特性可制成一種血清分離膠。當(dāng)分離膠與凝固后的血液在同一試管中離心時(shí)，分離膠便在血清和血/塊之間形成膠狀的隔離層將血清和血/塊隔開。從而提高了血清的收得率，并在原狀態(tài)下保存血清，簡(jiǎn)化了臨床檢驗(yàn)過程，提高了工作效率?，F(xiàn)今醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)已步入全自動(dòng)化，微機(jī)管理的新時(shí)

如何選擇western-blot中分離膠的濃度2022/09/26: westernblot中分離膠濃度的選擇取決于目的蛋白分子量不同的分離膠濃度對(duì)不同的目的蛋白分子量的分辨率不一樣，比如15%的分離膠更適合45kDa的分目的蛋白，而10%的分離膠更適合70kDa的目的蛋白而因?yàn)閣esternblot的膜應(yīng)該是*覆蓋SDSPAGE的凝膠，所以不用太擔(dān)心條帶在凝膠上位置偏上活偏下所以westernblot中分離膠濃度的選擇取決于目的蛋白分子量如果以溴酚藍(lán)跑到膠的底部為準(zhǔn),26kD在10%的由下往上1/4的地方,而15%就在由下往上大約1/2（不太確定）的地方,對(duì)于分

脂類和類脂你還在傻傻分不清嗎2022/09/26: 脂類是油、脂肪、類脂的總稱.食物中的油脂主要是油和脂肪,一般把常溫下是液體的稱作油,而把常溫下是固體的稱作脂肪.脂肪是由甘油和脂肪酸組成的三酰甘油酯,其中甘油的分子比較簡(jiǎn)單,而脂肪酸的種類和長短卻不相同.因此脂肪的性質(zhì)和特點(diǎn)主要取決于脂肪酸,不同食物中的脂肪所含有的脂肪酸種類和含量不一樣.自然界有40多種脂肪酸,因此可形成多種脂肪酸甘油三酯.脂肪酸一般由4個(gè)到24個(gè)碳原子組成.脂肪酸分三大類：飽和脂肪酸、單不飽和脂肪酸、多不飽和脂肪酸.脂肪在多數(shù)有機(jī)溶劑中溶解,但不溶解于水.脂類的分類(1)脂肪

標(biāo)定標(biāo)準(zhǔn)溶液時(shí)平行測(cè)定的誤差2022/09/26: 標(biāo)定標(biāo)準(zhǔn)溶液時(shí)平行測(cè)定的誤差滴定誤差要求：以不確定度表示，≤±0.2%。滴定誤差分類：主要包括稱量誤差、量器誤差、方法誤差。（1）稱量誤差每次稱量誤差：±0.0001g，一份試樣稱量誤差±0.0002g。若相對(duì)誤差±0.1%，則每一份試樣的稱量至少為0.2g。（2）量器誤差滴定管讀數(shù)誤差：±0.01ml,一份試樣量取誤差±0.02ml。若相對(duì)誤差±0.1%，則每一份試樣體積量至少為±20ml（3）方法誤差主要是終點(diǎn)誤差。其原因有：指示劑不能準(zhǔn)確地在化學(xué)計(jì)量點(diǎn)時(shí)改變顏色；標(biāo)準(zhǔn)溶液的加入不可能恰好在

小小標(biāo)準(zhǔn)品，助力分子診斷更準(zhǔn)確喲！2022/09/23: 分子診斷是指通過分子生物學(xué)的檢測(cè)手段，檢測(cè)患者體內(nèi)基因結(jié)構(gòu)或表達(dá)水平的技術(shù)。由于其檢測(cè)速度快、靈敏度高和特異性強(qiáng)等特點(diǎn)，被廣泛應(yīng)用于血液篩查、遺傳性疾病、傳染性疾病、腫瘤伴隨診斷等領(lǐng)域。比如現(xiàn)今與我們息息相關(guān)的新冠核酸檢測(cè)，就屬于分子檢測(cè)的應(yīng)用實(shí)例。分子診斷的檢測(cè)往往需要標(biāo)準(zhǔn)品，作為對(duì)照，校正系統(tǒng)誤差，確保結(jié)果的準(zhǔn)確性。下面遠(yuǎn)慕生物就和大家分享分子診斷的背景知識(shí)和標(biāo)準(zhǔn)品的應(yīng)用意義吧！應(yīng)用于分子診斷中的檢測(cè)技術(shù)分子診斷主要檢測(cè)基因的序列結(jié)構(gòu)和表達(dá)水平，主要的檢測(cè)技術(shù)包括PCR、高通量測(cè)序、熒光原位

遠(yuǎn)慕生物淺談：穩(wěn)轉(zhuǎn)株構(gòu)建及其單克隆化應(yīng)用要點(diǎn)2022/09/23: 穩(wěn)轉(zhuǎn)株是指通過基因工程手段獲得穩(wěn)定過表達(dá)或抑制特定基因的細(xì)胞株。一般將目的基因序列或抑制目的基因的shRNA序列裝載至重組載體中，再通過慢病毒系統(tǒng)或轉(zhuǎn)座子系統(tǒng)將目的序列整合至宿主細(xì)胞的染色體中，實(shí)現(xiàn)目的基因持續(xù)、穩(wěn)定的調(diào)控。通過慢病毒系統(tǒng)或轉(zhuǎn)座子系統(tǒng)轉(zhuǎn)染并經(jīng)過藥物篩選獲得的陽性細(xì)胞是一個(gè)混合細(xì)胞池，即多克隆細(xì)胞系。單克隆細(xì)胞系則是從多克隆細(xì)胞系中分選得到的，由單一細(xì)胞擴(kuò)增得到的細(xì)胞株。穩(wěn)轉(zhuǎn)株細(xì)胞系是科研工作者常用的基因調(diào)控細(xì)胞模型，常規(guī)的科研實(shí)驗(yàn)，多克隆細(xì)胞系是可以滿足需求的，但某些應(yīng)用場(chǎng)景需要

原始菌種、菌液的制備及保存的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程2022/09/23: 目的菌種保藏使微生物的代謝活動(dòng)處于最/低的狀態(tài)，但又不至于死亡，從而達(dá)到保藏的目的。規(guī)范菌種原始菌液的制備及長期保存。1.定義原始菌液--由凍干菌或冷凍菌直接傳代的孢子或生長菌的原始懸浮液。工作菌液--由原始菌液直接稀釋，或根據(jù)一般試驗(yàn)需要而等量稀釋的特定濃度的孢子或細(xì)菌的懸浮液。2.總則微生物室收到實(shí)驗(yàn)菌種后應(yīng)進(jìn)行活化及純化，并進(jìn)行傳代（芽孢桿菌除外）。每一新菌種在適宜的瓊脂平板上劃線分離，檢查是否純種，觀察菌落形態(tài)并用革蘭氏染色或芽孢染色法進(jìn)行鏡檢，如果是芽孢懸浮液，用常規(guī)方法測(cè)定其存活孢子

酵母菌菌株的保存培養(yǎng)與復(fù)蘇實(shí)驗(yàn)2022/09/22: 酵母菌菌株的保存與復(fù)蘇實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)材料酵母菌試劑、試劑盒甘油DMSO儀器、耗材凍存管實(shí)驗(yàn)步驟1.配制30%的甘油溶液，在每個(gè)15mm×45mm，4ml的帶蓋的凍存管中加入1ml甘油溶液，輕輕擰上螺蓋，高壓滅菌15min。2.為了在凍存管中配制凍存菌液，加入1ml對(duì)數(shù)后期或靜止早期的培養(yǎng)液，混勻后置干冰中一段時(shí)間，然后轉(zhuǎn)存到-70℃冰箱中。3.復(fù)蘇菌株時(shí)，可以從凍存管中刮下少量細(xì)胞劃在平板上，不要將整個(gè)凍存管中的貯存液融化。4.細(xì)胞也可以按菌懸液加入80μlDMOS的方式配制凍存菌株，貯存在-70℃。

錯(cuò)綜復(fù)雜搞不清？一網(wǎng)打盡實(shí)驗(yàn)室的各種染色法！2022/09/22: 細(xì)胞涂片染色在臨床檢驗(yàn)工作中起到舉足輕重的作用，細(xì)胞染色效果直接影響到細(xì)胞形態(tài)學(xué)的辨別以及疾病的診斷。不同染色方法的染色原理和用途也不盡相同，現(xiàn)對(duì)檢驗(yàn)工作中常見的幾種染色方法及其用途和優(yōu)缺點(diǎn)進(jìn)行總結(jié)：瑞氏染色（Wright'sstain）又稱美藍(lán)-伊紅Y染色，染液主要由堿性染料亞甲藍(lán)（美藍(lán)）和酸性染料伊紅溶于甲醇配置形成。該染色方法操作簡(jiǎn)單，染色時(shí)間短，對(duì)細(xì)胞質(zhì)成分及中性顆粒染色效果較好；但是染色效果較差，容易退色，對(duì)細(xì)胞核染色效果較姬姆薩染色法差，保存時(shí)間短。該染色方法在檢驗(yàn)工作中主要用于臨時(shí)

抗酸染色法的步驟和染色配制說明2022/09/22: 一、抗酸染色一般步驟1、初染用玻片夾夾持涂片標(biāo)本，滴加石炭/酸復(fù)紅2-3滴，在火焰高處徐徐加熱，切勿沸騰，出現(xiàn)蒸汽即暫時(shí)離開，若染液蒸發(fā)減少，應(yīng)再加染液，以免干涸，加熱3-5分鐘，待標(biāo)本冷卻后用水沖洗。2、脫色3%鹽酸酒精脫色30秒~1分鐘；用水沖洗。3、復(fù)染用堿性美蘭溶液復(fù)染1分鐘，水洗，用吸水紙吸干后用油鏡觀察。二、抗酸染色的染液配制1、石/炭酸復(fù)紅堿性復(fù)紅酒精飽和溶液10mL5%石炭/酸90mL2、3%鹽酸酒精濃鹽酸3mL95%酒精97mL3、呂氏美蘭液美蘭酒精飽和液30mL氫氧/化鉀（1

細(xì)胞凍存時(shí)，培養(yǎng)基、血清、DMSO按什么比例配制？2022/09/21: DMSO是目前最/常用的細(xì)胞凍存保護(hù)劑，一般使用時(shí)終濃度控制在5~10%，最佳濃度取決于細(xì)胞類型。一般來說，存活率比較高的細(xì)胞系，培養(yǎng)基、血清、DMSO按照7：2：1的比例新鮮配制使用。細(xì)胞計(jì)數(shù)后，用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞，至5×10^6~1×10^7cells/mL，然后1~1.5mL/管分裝凍存。對(duì)于存活率較低的細(xì)胞系，或者需要長時(shí)間保存的細(xì)胞系，可以增加凍存液中的血清濃度，血清和DMSO按9：1的比例配制。另外，還有商品化的無血清凍存液可以選擇，不需要預(yù)先配制。一般會(huì)含有多種保護(hù)劑成分

你知道核酸提取加蛋白酶K有什么好處嗎？2022/09/21: 隨著新/冠疫情的發(fā)展，新/冠病毒核酸的檢測(cè)工作已趨于常態(tài)化。而優(yōu)質(zhì)的核酸提取試劑是核酸檢測(cè)的基礎(chǔ)，正確提取核酸才能保證下游檢測(cè)結(jié)果的質(zhì)量。市場(chǎng)上核酸提取的試劑成分雖然各有差別，但蛋白酶K由于其獨(dú)/特的廣譜蛋白水解酶活性和穩(wěn)定性，目前已成為了多種提取試劑的重要原料。另外，在臨床實(shí)踐中，特別是我國目前正在推行20混1檢測(cè)的場(chǎng)景下，難免會(huì)遇到復(fù)雜樣本（例如含有“痰液”的樣本）；而蛋白酶K在處理特殊樣本時(shí)，更能突顯出作用。蛋白酶K廣泛應(yīng)用于核酸提取蛋白酶K來源于林伯氏白色念球菌，是一種絲氨/酸蛋白酶，具

細(xì)胞分裂時(shí)，里面的家當(dāng)怎么分？2022/09/21: 你知道自己多久換一套皮膚嗎？對(duì)，你沒聽錯(cuò)，不是王/者農(nóng)藥的皮膚，就是你身體表面如假包換的皮膚。答案是：一個(gè)月。不光如此，此時(shí)此刻你的胃，跟一星期前已經(jīng)不是一個(gè)胃了；你肺里的氣管，跟兩個(gè)月前也已經(jīng)不是同一套氣管了。事實(shí)上，人體內(nèi)大多數(shù)器官和組織，時(shí)刻都在發(fā)生細(xì)胞分裂，用新生細(xì)胞替代衰老細(xì)胞。據(jù)估計(jì)，人體內(nèi)有30萬億個(gè)細(xì)胞，每天會(huì)發(fā)生兩萬億次細(xì)胞分裂。也就是說，如果細(xì)胞分裂一次要收你一塊錢，一天就能收光4.5個(gè)馬云的身家資產(chǎn)。那么問題來了，細(xì)胞分裂時(shí)，里面的家當(dāng)怎么分？科學(xué)家發(fā)現(xiàn)，每一次細(xì)胞分裂，都

干細(xì)胞超全的科普，科研人快馬住！2022/09/21: 「1」什么是干細(xì)胞？干細(xì)胞存在于人體哪些地方？Whatarestemcells干細(xì)胞是具有自我復(fù)制、多向分化和歸巢潛能的原始細(xì)胞，是機(jī)體的起源細(xì)胞，是形成人體各種組織、器官的始祖細(xì)胞。如同一棵樹干，可以長出樹杈、樹葉、開花和結(jié)果一樣?，F(xiàn)如今科學(xué)家已經(jīng)成功從許多器官或組織中分離出了干細(xì)胞，其中包括視網(wǎng)膜干細(xì)胞、胰腺干細(xì)胞、成骨干細(xì)胞等。研究表明，干細(xì)胞不僅存在于胚胎，而且存在于成人體內(nèi)，可以從臍血、臍帶、胎盤、骨髓、脂肪、血液等組織中分離出相應(yīng)的干細(xì)胞。「2」干細(xì)胞從何而來？Stemcellsco

藥物分析中的雜質(zhì)到底哪里來的？2022/09/20: 為了保證APIs及制劑的質(zhì)量，必須在工藝開發(fā)、優(yōu)化和工藝轉(zhuǎn)化中必須仔細(xì)監(jiān)控雜質(zhì)。法規(guī)和國際指導(dǎo)原則更加關(guān)注原料藥中雜質(zhì)的分離、鑒定和控制。今天咱們就根據(jù)具體實(shí)例列舉了不同類型雜質(zhì)和不同來源雜質(zhì)的情況。1、雜質(zhì)的定義和來源不純物可定義為目標(biāo)成分與外來物的混合物或本身劣質(zhì)的物質(zhì)。往往是最終的制備工藝對(duì)原料藥的成本具有重大影響。產(chǎn)量、物理特性、化學(xué)純度是API生產(chǎn)、制劑處方、制劑生產(chǎn)中需要重點(diǎn)考慮的地方。作為新藥申請(qǐng)的一部分，申請(qǐng)人必須向FDA提交原料藥和制劑的生產(chǎn)和過程控制。如果生產(chǎn)批次不符合純度和

植物葉綠素作用及檢測(cè)方法2022/09/20: 讓植物呈現(xiàn)綠色的物質(zhì)稱之為葉綠素。這是一種在所有植物中都存在的天然色素，但作用卻遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過著色。植物葉綠素廣泛存在于綠色植物組織中，其含量與光合作用、營養(yǎng)狀況密切相關(guān)，是反應(yīng)植物生長狀況的重要指標(biāo)。葉綠素還吸收太陽能并轉(zhuǎn)換成植物生命需要的能量。正如血液是人體重要組成部分一樣，葉綠素也是植物不/可缺少的部分。植物沒有它就會(huì)死亡。葉綠素是鮮活綠色果蔬的代表色素。在植物細(xì)胞中，葉綠素與蛋白質(zhì)結(jié)合成葉綠蛋白存在，使之呈現(xiàn)綠色。當(dāng)細(xì)胞死亡后，葉綠素則從葉綠體中游離出來。在正常生長發(fā)育的果品中，葉綠素的合成作

配制標(biāo)準(zhǔn)溶液為什么要標(biāo)定？溶液的標(biāo)定與配制！2022/09/20: 配制標(biāo)準(zhǔn)溶液為什么要標(biāo)定溶液配制后要標(biāo)定的原因，配置出來的溶液是一個(gè)初步含量，濃度值還沒有達(dá)到真實(shí)值，為了讓滴定液的濃度更接近真實(shí)值所以需要用基準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行標(biāo)定。標(biāo)定，主要是指使用標(biāo)準(zhǔn)的計(jì)量儀器對(duì)所使用儀器的準(zhǔn)確度進(jìn)行檢測(cè)是否符合標(biāo)準(zhǔn)，一般大多用于精密度較高的儀器。標(biāo)定也可以認(rèn)為是校準(zhǔn)。直接標(biāo)定為準(zhǔn)確稱取一定量的基準(zhǔn)物，溶于水后用待標(biāo)定的溶液滴定，至反應(yīng)*。根據(jù)所消耗待標(biāo)定溶液的體積和基準(zhǔn)物的質(zhì)量，計(jì)算出待標(biāo)定溶液的準(zhǔn)確濃度。標(biāo)準(zhǔn)溶液就是已確定其主體物質(zhì)濃度或其他量值的溶液。不同的情況需使用不同的

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