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醋酸緩沖液配制原理與步驟2023/11/30

醋酸鹽緩沖液（pH3.5）取醋酸銨25g，加水25ml溶解后，加7mol/L鹽酸溶液38ml，用2mol/L鹽酸溶液或5mol/L氨溶液準確調節(jié)PH值至3.5（電位滴定法），用水稀釋至100ml，即得。當往某些溶液中加入一定量的酸和堿，或加少量水稀釋時，溶液有阻礙溶液pH變化的作用，稱為緩沖作用，這樣的溶液叫做緩沖溶液。弱酸及其鹽的混合溶液（如HOAc與NaOAc），弱堿及其鹽的混合溶液（如NH3·H2O與NH4Cl）等都是緩沖溶液。配制原理：由弱酸HA及其鹽NaA所組成的緩沖溶液對酸的緩沖作用

使用容量瓶配制溶液的步驟2023/11/30

使用容量瓶配制溶液的方法是：(1)使用前檢查瓶塞處是否漏水。向容量瓶內加少量水，塞好瓶塞，用食指頂住瓶塞，用另一只手的五指托住瓶底，把瓶倒立過來，如不漏水，正立，把瓶塞旋轉180度后塞緊，再倒立若不漏水，方可使用。(2)把準確稱量好的固體溶質放在燒杯中，用少量溶劑溶解。然后把溶液沿玻璃棒轉移到容量瓶里。為保證溶質能全部轉移到容量瓶中，要用溶劑多次洗滌燒杯，并把洗滌溶液全部轉移到容量瓶里。(3)向容量瓶內加入的液體液面離標線1~2厘米左右時，應改用滴管小心滴加，最后使液體的彎月面（凹液面）與刻度線

使用流式檢測細胞凋亡過程介紹2023/11/29

細胞凋亡通常稱為細胞程序性死亡，是由基因控制的主動性細胞死亡過程。越來越多數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn)，細胞凋亡與多種疾病密切相關，如癌細胞具有連續(xù)增殖、抵抗細胞凋亡能力，利用流式細胞儀分析細胞凋亡可為腫瘤診斷，療效評價和預后預測提供了重要的參考指標。然而很多實驗的同學們，常會碰到上機檢測時細胞死亡太多卻檢測不出凋亡，多次重復結果不一致等現(xiàn)象，接下來就一起看看如何把細胞凋亡的數(shù)據(jù)變的更加漂亮，準確！首先，明確一下細胞凋亡和壞死的區(qū)別細胞凋亡(apoptosis)是一件主動性細胞死亡事件，它涉及一系列基因的激活、表達

DNA提取試劑盒的工作原理及操作步驟2023/11/29

一、RNA和DNA提?。毫呀猓毫呀夤娇赡芤蚰崛NA還是RNA而異，但共同點是含有高濃度離液鹽的裂解緩沖液。Chaotropes（離液劑）的作用：Chaotrope會破壞氫鍵及疏水間的相互作用。離液鹽包括鹽酸胍、硫氰酸胍、尿素和高氯酸鋰。洗滌劑：除了離液劑外，裂解緩沖液中通常還有一些去污劑，以幫助蛋白質溶解和裂解。溶菌酶和蛋白酶K:根據(jù)樣品類型，也可以使用酶進行裂解。蛋白酶K就是其中之一，實際上在這些變性緩沖液中效果較好；當?shù)鞍踪|變性增多，蛋白酶K的作用也會相應增強。然而，溶菌酶在變性中不

遠慕分享：酶標記抗體的方法步驟2023/11/28

1、HRP標記抗體的方法酶與抗體交聯(lián)的方法有許多種,根據(jù)酶的結構不同可采用不同的方法。對于制備HRP結合物，可用戊二醛二步法和過碘酸鈉法。尤以簡易過碘酸鈉法更為常用。戊二醛二步法原理戊二醛為一種雙功能試劑，通過其醛基分別與酶和免疫球蛋白上的氨基共價結合，形成酶-戊二醛-免疫球蛋白結合物。2、標記步驟(1)稱取HRP25mg溶于1.25%戊二醛溶液中，于室溫靜置過夜。(2)反應后的酶溶液經(jīng)SephadexG-25層析柱，用生理鹽水洗脫。流速控制在1ml/1分鐘，收集棕色流出液。如體積大于5ml，則

HRP標記抗體-簡易過碘酸鈉法介紹2023/11/28

實驗概要本實驗用簡易過碘酸鈉法進行HRP標記抗體。本法是以NaIO4先將HRP表面的糖分子氧化成醛基，然后再與Ig上的氨基相結合，所獲酶標記抗體的產(chǎn)率高，將近70%的HRP和Ig結合，99%的Ig與酶結合，酶與Ig的活性無重大損失，是目前最chang用的方法。實驗原理經(jīng)典的過碘酸鈉法中需采用二硝基氟苯封閉HRP上殘留的α-和ε氨基基以避免酶分子之間的交聯(lián)。后來Wilson等改用在低PH下使NaIO4氧化HRP，從而省去了二硝基氟苯封閉HRP步驟。HRP經(jīng)NaIO4氧化后形成的醛化酶可與抗體分子的

單克隆抗體的制備原理說明2023/11/27

單克隆抗體是利用體外培養(yǎng)技術生產(chǎn)的抗體，它由于是由一個細胞分裂而來的，所有只含有一種抗體。單克隆抗體的優(yōu)點是：理化性狀高度均一、生物活性單一、與抗原結合的特異性強、便于人為處理和質量控制，并且來源容易。這些優(yōu)點使其廣泛應用于抗腫瘤等領域，缺點就是生成的抗體只針對1種抗原決定簇，比較單一?；具^程：1.抗原的處理2.在小鼠體內植入抗原（免疫）3.取免疫鼠的B淋巴細胞4.與鼠的骨髓瘤細胞用PEG細胞融合5.在多孔板上篩選。雜交瘤細胞就是上面的34兩步原理1：單克隆抗體（MAb）與抗血清（又稱多克隆抗

標準物質所需基礎條件2023/11/27

標準物質是以特性量值的均勻性、穩(wěn)定性和準確性等特性為主要特征的。為獲得這些基本特征，標準物質起碼應滿足以下基本條件的要求。材質均勻從理論上講，如果物質的一部分（單元）的特性值與另一部分（單元）的特性值沒有顯著差異，則該物質的該特性是均勻的。但是，wan全均勻的物質是不存在的，物質內部和單元之問或多或少會存在有不均勻性，在貯存過程中，也會發(fā)生層析、偏析、聚集等不均勻的傾向，因而，均勻是相對的，而不均勻是絕對的。如果物質的一部分(單元）的特性值與另一部分（單元）的特性值之間的差異不能被實驗檢測出來，

FITC熒光素標記抗體具體操作步驟2023/11/24

當FITC在堿性溶液中與抗體蛋白反應時，主要是蛋白質上賴氨酸的r氨基與熒光素的硫碳胺鍵（thiocarbmide）結合，形成FITC-蛋白質結合物，即熒光抗體或熒光結合物。一個IgG分子中有86個賴氨酸殘基，一般zui多能結合15～20個，一個IgG分子可結合2～8個分子的FITC，其反應式如下：FITC-N=C=S+N-H2-蛋白質→FITC-NS-C-N-H2-蛋白質常用Marsshall（1958）法標記熒光抗體，也可以根據(jù)條件采用Chadwick等標記法或Clark等（1963）的透析標

不同類型的標記抗體的介紹2023/11/24

熒光素標記熒光色素是最chang用于標記抗體的標記物之一。熒光素經(jīng)恰當?shù)募ぐl(fā)可發(fā)光，從而得知抗體的定位和待測抗原的分布情況，主要用于細胞分選或高分辨率免疫染色，是一種非常好的亞細胞水平精確定位的方法。酶標記酶標記抗體是將酶與特異性抗體經(jīng)適當方法連接而成，其應用范圍非常廣泛，結果即時可見、敏感性高，但較難應用于定量分析。生物素標記生物素標記反應簡單、溫和且很少抑制抗體活性，將生物素與抗體共價結合是一種非常簡便、直接的標記方法。

關于廢液的分類及對應的處理辦法2023/11/23

廢液的分類及對應的處理辦法一.含一般有機溶劑的廢液一般有機溶劑是指醇類、酯類、有機酸、酮及醚等由C、H、O元素構成的物質。對此類物質的廢液中的可燃性物質，用焚燒法處理。對難于燃燒的物質及可燃性物質的低濃度廢液，則用溶劑萃取法、吸附法及氧化分解法處理。再者，廢液中含有重金屬時，要保管好焚燒殘渣。但是，對其易被生物分解的物質（即通過微生物的作用而容易分解的物質），其稀溶液經(jīng)用水稀釋后，即可排放。二.含石油、動植物性油脂的廢液此類廢液包括：苯、已烷、二甲苯、甲苯、煤油、輕油、重油、潤滑油、切削油、機器

培養(yǎng)基的使用步驟2023/11/23

1.瓊脂培養(yǎng)基的融化將培養(yǎng)基放到沸水浴中或采用其他有相同效果的方法(如高壓鍋中的蒸汽)融化。經(jīng)過高壓滅菌的培養(yǎng)基盡量減少重新加熱的時間,避免過度加熱。培養(yǎng)基融化后立即移開,室溫靜置片刻(約2min），以免玻璃容器發(fā)生破裂。融化后的培養(yǎng)基放入47℃~50℃恒溫水浴鍋中保溫，冷卻到47℃~50℃所需的時間取決于培養(yǎng)基的類型、體積和在水鍋里的分裝量。融化后內培養(yǎng)基應盡快使用，放置時間一般不超過4h。剩余的培養(yǎng)基固后不得再次融化使用。特別是靈敏性培養(yǎng)基，應根據(jù)相關標準，縮短融化后放置的時間。將瓊脂培養(yǎng)基

菌株到手不會用？看這篇！2023/11/22

菌種說明書詳細說明了菌種本身特性、生長條件以及形態(tài)特征等，提供了完整的培養(yǎng)方法。菌株編號“株”是我們常用菌種具體化的最小單位，即編號是唯1的；與我們通常所說的“種”不同的是，“種”是指一類菌，例如大腸桿菌，有很多株編號，它們都具有各自的特性。拉丁名稱代表了菌種的種屬，通常是唯1的。即我們通常所說的菌種，用拉丁名稱來表示較為準確，如Escherichiacoli的中文名稱為大腸桿菌，也叫大腸埃希氏菌。中文名稱通常根據(jù)菌種本身特性或拉丁名稱翻譯而來，因此，部分菌種中文名稱通常存在多種叫法，如“大腸桿

流動相中緩沖鹽的正確使用方法2023/11/22

流動相中緩沖鹽的正確使用方法1、使用前的處理在使用緩沖鹽作流動相之前需要用不含緩沖鹽的流動相沖洗色譜柱，直至基線平穩(wěn)。原則上，用于沖洗的流動相與分析時所用的流動相含水的比例相同(或含水更多)，不同的只是用于沖洗用的流動相中不含緩沖鹽。理由：緩沖鹽通常易溶于水，難溶于有機溶劑。用含緩沖鹽的(特別是做流動相的水為飽和的緩沖鹽溶液時)流動相進行分析時，如果分析前色譜柱中用于保存色譜柱的流動相中含水的比例相對較小，不先沖洗掉，接下來做樣品的時候所用的流動相中如果有機溶劑含量大，而其比例中所含的水又不足以

配制培養(yǎng)基的詳細步驟2023/11/21

配制培養(yǎng)基的詳細步驟1、配制溶液向容器內加入所需水量的一部分，按照培養(yǎng)基的配方，稱取各種原料，依次加入使其溶bai解，最后補足所需水分。對蛋白胨、肉膏等物質，需加熱溶解，加熱過程所蒸發(fā)的水分，應在全部原料溶解后加水補足。配制固體培養(yǎng)基時，先將上述已配好的液體培養(yǎng)基煮沸，再將稱好的瓊脂加入，繼續(xù)加熱至wan全融化。并不斷攪拌，以免瓊脂糊底燒焦。2、調節(jié)pH值用pH試紙（或pH電位計、氫離子濃度比色計）測試培養(yǎng)基的pH值，如不符合需要，可用10%HCl或10%NaOH進行調節(jié)，直到調節(jié)到配方要求的p

標準物質的作用原理說明2023/11/21

⑴保存和傳遞特性量值，建立測量溯源性標準物質是特性量準確、均勻性和穩(wěn)定性良好的計量標準，具有在時間上保持特性量值，在空間上傳遞量值的功能。通過使用標準物質，可以使實際測量結果獲得量值溯源性。⑵保證測量結果的一致性、可比性通過校準測量儀器，評價測量過程，由標準物質將測量結果溯源到國家單位制(SI)，保證測量結果的一致性、可比性，從而達到量值統(tǒng)一。⑶研究與評價測量方法標準物質可作為特性量值已知的物質，用于研究和評價測量這些成分或特性的方法，從而判斷該方法的準確度和重復性，并通過驗證和改進測量方法的準

酸堿緩沖溶液的類型及選擇2023/11/20

酸堿緩沖溶液的選型一般應根據(jù)具體情況進行選擇。緩沖酸性可選用堿性緩沖液，緩沖酸性可采用堿性緩沖液。常用作緩沖溶液的酸類由弱酸及其共軛酸鹽組合成的溶液具有緩沖作用。生化實驗室常用的緩沖系主要有磷酸、檸檬酸、碳酸、醋酸、巴bi妥酸、Tris（三羥甲基氨基甲烷）等系統(tǒng)，生化實驗或研究工作中要慎重地選擇緩沖體系，因為有時影響實驗結果的因素并不是緩沖液的pH值，而是緩沖液中的某種離子。如硼酸鹽、檸檬酸鹽、磷酸鹽和三羥甲基甲烷等緩沖劑都可能產(chǎn)生不需要的化學反應。酸堿緩沖溶液由弱酸及其鹽、弱堿及其鹽組成的混合

ph值測定常用標準緩沖溶液介紹2023/11/20

ph值測定常用的標準緩沖溶液草酸鹽標準緩沖溶液酒石酸鹽標準緩沖溶液苯二甲酸氫鹽標準緩沖溶液磷酸鹽標準緩沖溶液硼酸鹽標準緩沖溶液氫氧化鈣標準緩沖溶液在一定程度上能抵抗外加少量酸、堿或稀釋，而保持溶液pH值基本不變的作用稱為緩沖作用。具有緩沖作用的溶液稱為緩沖溶液。緩沖溶液性質a.抗酸/堿,抗稀釋作用因為緩沖溶液中具有抗酸成分和抗堿成分，所以加入少量強酸或強堿，其pH值基本上是不變的。稀釋緩沖溶液時，酸和堿的濃度比值不改變，適當稀釋不影響其pH值。b.緩沖容量緩沖容量是衡量緩沖溶液緩沖能力大小的尺度

組織固定固定液的選擇標準2023/11/17

影響標本固定的因素很多，如組織與固定液的比例、固定時間、固定溫度等；除此之外，固定液本身也很重要，若所選固定液不當，細胞內蛋白質、脂類、核酸等成分將會有不同程度地損失。固定劑最好隨配隨用，并注意其濃度和酸堿度。因此根據(jù)實際工作的目的，選用合適的固定液非常重要。下面是一些常用固定液的配制方法及適用范圍。1．單純固定液(1)4％中性甲醛固定液：最chang用的固定液，能滿足常規(guī)HE及免疫組化、PCR等工作。一般無特殊要求的病理標本均適用。尤其值得注意的是，中性甲醛是以pH7．2～7．4的磷酸緩沖液為

血液保存液的主要成分與作用說明2023/11/17

血液保存液的主要成分與作用1.血液保存液常用種類配方可分為：ACD（A，枸櫞酸；C，枸櫞酸三鈉；D，葡萄糖）與CPD（C，枸櫞酸三鈉；P，磷酸鹽；D，葡萄糖及枸櫞酸）兩大類保存液。在CPD中加腺嘌呤即為CPDA-1。2.血液保存液主要成分（1）枸櫞酸鹽：是所有抗凝保存液中的基本抗凝物質。最chang用的是枸櫞酸三鈉，除抗凝作用外，它還能阻止溶血的發(fā)生。（2）枸櫞酸：避免保存液中的葡萄糖在消毒中焦化。（3）葡萄糖：是紅細胞代謝所必需的營養(yǎng)成分，可延長紅細胞保存時間，且防止溶血；并減慢細胞中有機磷的