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遠慕教您如何驗證高壓滅菌器滅菌效果！2021/11/16

微生物實驗室最少不了的實驗儀器之一就是滅菌器，一般實驗室常用的是高壓蒸汽滅菌器。GB4789.1-2016中要求：實驗設(shè)備應(yīng)定期進行檢查和/或檢定（加貼標志）、維護和保養(yǎng)，以確保工作性能和操作安全。但你的滅菌器有沒有類似的檢查呢？如果要做類似的驗證，又需要怎么做呢？今天就給大家匯總一下高壓蒸汽滅菌器滅菌效果驗證的相關(guān)內(nèi)容。高壓蒸汽滅菌器滅菌效果驗證一般有化學指示劑法、留點溫度計法、自制測溫管法和生物指示劑法，每種方法的原理都是相似的，主要是通過驗證滅菌時滅菌器里的溫度能否達到要求。我們可以根據(jù)自

實驗室環(huán)境和人體表面微生物的檢查2021/11/15

一、目的要求1．證明實驗室環(huán)境與體表存在微生物。2．比較來自不同場所與不同條件下細菌的數(shù)量和類型。3．體會無菌操作的重要性。二、基本原理平板培養(yǎng)基含有細菌生長所需要的營養(yǎng)成分，當取自不同來源的樣品接種于培養(yǎng)基上，在37℃溫度下培養(yǎng)，1-2天內(nèi)每一菌體即能通過很多次細胞分裂而進行繁殖，形成一個可見的細胞群體的集落，稱為菌落。每一種細菌所形成的菌落都有它自己的特點，例如菌落的大小，表面干燥或濕潤、隆起或扁平、粗糙或光滑，邊緣整齊或不整齊，菌落透明或半透明或不透明，顏色以及質(zhì)地疏松或緊密等。因此，可通

培養(yǎng)基及無菌水的制備，科研人必看！2021/11/15

一、基本原理培養(yǎng)基的種類很多，不同微生物所需要的培養(yǎng)基不同。培養(yǎng)基制成后的物理狀態(tài)可分為液體、固體、半固體三種類型。目前所用培養(yǎng)基均為已配制好的生物試劑和紙片。二、器材三角瓶、試管、燒杯、玻棒、天平、搪瓷杯、量筒、鋁箔紙、角匙、杜氏小管、硅膠塞、電爐三、培養(yǎng)基的種類營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基、乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)基、乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基、伊紅美蘭瓊脂培養(yǎng)基、馬鈴薯-葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（附加抗菌素）、平板計數(shù)瓊脂、月桂基硫酸鹽胰蛋白凍肉湯、煌綠乳糖膽鹽肉湯、EC肉湯、高鹽察氏瓊脂、三糖鐵瓊脂等四、方法步驟1、培養(yǎng)基的制備

微生物分離和純化的基本原理操作2021/11/15

一、目的要求掌握倒平板的方法和幾種常用的分離純化物的基本操作技術(shù)。二、基本原理1.從混雜的微生物群體中獲得只含有某一種或某一株微生物的過程稱為微生物的分離與純化。本實驗采用平板分離法：該方法操作簡便，普遍用于微生物的分離與純化，其包括兩個方面：（1）選擇適合于待分離微生物的生長條件等要求或者加入某種抑制劑造成只利于該微生物生長，而抑制其它微生物生長的環(huán)境，從而淘汰一些不需要的微生物；（2）微生物在固體培養(yǎng)基生長形成的單個菌落可以是一個細胞繁殖而成的集合體，因此可通過挑取單菌落而獲得一種純培養(yǎng)。獲

牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的特點及制作步驟2021/11/15

由于這種培養(yǎng)基多用于培養(yǎng)細菌，因此，要用稀酸或稀堿將其pH調(diào)至中性或微堿性，以利于細菌的生長繁殖。牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配方如下：牛肉膏3g蛋白胨10gNaCl5g瓊脂15—20克水1000mlpH7．4—7．6一、器材牛肉膏，蛋白胨，NaCl，瓊脂；1mol/LNaOH，1mol/LHCl；試管，三角燒瓶，燒杯，量筒，玻棒，培養(yǎng)基分裝器，扭力天平，牛角匙，高壓蒸汽滅菌鍋，pH試紙（pH5．5—9．0），棉花，牛皮紙，記號筆，麻繩，紗布等。二、牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的制作步驟1．稱量按培養(yǎng)基配方比例依

細胞間消毒方式你知道嗎2021/11/12

細胞培養(yǎng)對無菌環(huán)境的要求較為嚴格。微生物污染通常是造成細胞培養(yǎng)失敗的主要原因，細胞間的殺菌主要涉及空氣的殺菌，其常見方法如下。紫外線消毒:紫外線是一種低能量的電磁輻射，可殺死多種微生物。革蘭陰性菌最為敏感，其次是陽性菌，再次為芽孢，真菌孢子的抵抗力*。紫外線的直接作用是通過破壞微生物的核酸及蛋白質(zhì)等而使其滅活，間接作用是通過紫外線照射產(chǎn)生的臭氧殺死微生物。直接照射培養(yǎng)室消毒，用法簡單，效果好。紫外燈的消毒效果同紫外燈的輻射強度和照射劑量呈正相關(guān)，輻射強度隨燈距離增加而降低，照射劑量和照射時間呈正

做實驗選擇原代細胞還是細胞株？2021/11/12

各種已被命名和經(jīng)過細胞生物學鑒定的細胞系或細胞株，都是一些形態(tài)比較均一、生長增殖比較穩(wěn)定的和生物性狀清楚的細胞群。因此凡符合上述情況的細胞群也可給以相應(yīng)的名稱，即文獻中常稱之為已鑒定的細胞（CertifiedCells）。已鑒定的細胞可用于各種實驗研究和生產(chǎn)生物制品，當前世界上已建的各種細胞系（株）已難勝數(shù)。體外培養(yǎng)細胞的種類和命名體外培養(yǎng)細胞的名稱，隨培養(yǎng)細胞技術(shù)的發(fā)展和細胞種類的增多而演變。最早采用的名稱為細胞株（Cellstrain），以后又出現(xiàn)細胞系（CellLine）一詞，兩者曾一度混

遠慕生物：質(zhì)粒純化方案中的關(guān)鍵步驟2021/11/12

如今質(zhì)粒純化不再是什么難題，那么做了這么次質(zhì)粒抽提的你了解質(zhì)粒純化的原理嗎？你知道哪些步驟對質(zhì)粒純化的成功起著關(guān)鍵作用嗎？QIAGEN質(zhì)粒抽提簡單原理：在堿性條件下裂解細菌之后，將裂解液以zhi定的鹽濃度加入QIAGEN-tip當中。質(zhì)粒DNA將發(fā)生選擇性的結(jié)合而從RNA、蛋白質(zhì)及其他細胞污染物中被分離出來。1、制備細胞裂解產(chǎn)物細胞產(chǎn)率很大程度上依賴于細胞裂解質(zhì)量。因此制備澄清的細胞裂解產(chǎn)物是QIAGEN純化方案中的重要一環(huán)，QIAGEN已經(jīng)仔細針對*的裂解條件進行了相關(guān)的專業(yè)設(shè)計。對培養(yǎng)物進行

質(zhì)粒的作用機制、條件及特點了解下2021/11/12

質(zhì)粒(plasmid)廣泛存在于生物界，從細菌、放線菌、絲狀真菌、大型真菌、酵母到植物，甚至人類機體中都含有。從分子組成看，有DNA質(zhì)粒，也有RNA質(zhì)粒;從分子構(gòu)型看，有線型質(zhì)粒、也有環(huán)狀質(zhì)粒:其表型也多種多樣。細菌質(zhì)粒是基因工程中最chang用的載體。通常，科學家利用質(zhì)粒在靶細胞中進行基因的過表達。質(zhì)粒的靈活性、兼容性、安全性、經(jīng)濟性等特性促進了分子生物學家將其應(yīng)用于各種用途。一些常用的質(zhì)粒類型包括：克隆質(zhì)粒、表達質(zhì)粒、基因下調(diào)質(zhì)粒、基因敲除質(zhì)粒、報告質(zhì)粒、病毒質(zhì)粒等?？寺≠|(zhì)粒：旨在擴增目的D

單細胞核測序和單細胞測序選擇困難咋辦？2021/11/11

單細胞測序（scRNA-seq）對于制備的細胞懸液的細胞活性和細胞數(shù)目有著較高的要求，而且必須要求新鮮的樣本，但是那些已經(jīng)凍起來的樣本庫里面大量的珍貴樣本，比如腦組織，心臟組織，腫瘤組織等都無法進行scRNA-seq，單細胞核轉(zhuǎn)錄組測序的出現(xiàn)極大的解決了這個問題。單細胞核轉(zhuǎn)錄組測序（SingleNucleiRNASequencing，snRNA-seq）：通過提取樣本單細胞核，然后分離、標記細胞核，在單細胞水平研究核基因表達檢測的技術(shù)。為腦組織、心臟、腎臟等復雜組織或一些珍xi凍存樣品提供了單細

單細胞蛋白質(zhì)組學：從小樣本中獲得大見解2021/11/11

以往，大量細胞分析提供了蛋白質(zhì)、基因或代謝物的平均值。如今，單細胞分析正在揭示組織內(nèi)各個細胞之間的差異。這些信息將有助于人們從細胞和分子層面上了解因果關(guān)系，也有助于解釋復雜的疾病狀態(tài)是如何產(chǎn)生并持續(xù)存在的。大量細胞分析無法了解不同的細胞類型及其功能，它只能提供一個讀數(shù)，代表細胞的平均反應(yīng)。這種平均值，不僅包括感興趣的特征（比如細胞表面標志物或其他表型），還包括實驗假象和錯誤，因此混淆了特定細胞對這些事件的貢獻。對蛋白質(zhì)組學而言，單細胞分析的局限性在于樣本太?。▎蝹€細胞）以及它們所含的蛋白質(zhì)數(shù)量極

載體的一些基礎(chǔ)知識以及如何閱讀質(zhì)粒圖譜2021/11/11

載體主要有bin毒和非病毒兩大類,其中質(zhì)粒DNA是一種新的非病毒轉(zhuǎn)基因載體。這里主要介紹下一個合格質(zhì)粒的組成要素、載體的一些基本知識以及如何閱讀質(zhì)粒圖譜。一、一個合格質(zhì)粒的組成要素復制起始位點Ori即控制復制起始的位點。原核生物DNA分子中只有一個復制起始點。而真核生物DNA分子有多個復制起始位點?？股乜剐曰蚩梢员阌诩右詸z測，如Amp+,Kan+多克隆位點MCS克隆攜帶外源基因片段P/E啟動子/增強子Terms終止信號加poly(A)信號可以起到穩(wěn)定mRNA作用。二、如何閱讀質(zhì)粒圖譜第一步：

慢病毒包裝簡要步驟及注意事項，科研人注意！2021/11/11

慢病毒包裝簡要步驟以六孔板中的1孔為例，每個樣品需要1×106個293T細胞。1.取1.5ml滅菌EP管，加入1.5μg包裝混合質(zhì)粒和0.5μg表達質(zhì)粒以及250μl的無血清培養(yǎng)基。輕柔混勻，室溫孵育5min。2.取1.5ml滅菌EP管，取9μl脂質(zhì)體2000l溶于250μl無血清培養(yǎng)基中。輕柔混勻，室溫孵育5min。3.將DNA溶液和脂質(zhì)體溶液輕柔混勻。室溫孵育20min4.用胰酶消化并記數(shù)293T細胞。用含血清的培養(yǎng)基重懸細胞。5.在六孔板中每孔，加入1ml含血清的生長培養(yǎng)基，再加入DNA-

免疫ELISA測定錯誤結(jié)果的原因分析2021/11/10

ELISA即酶聯(lián)吸附試驗，是一種常用的固相酶免疫測定方法。Engvall和Perlmann于1971年最先應(yīng)用該法進行了IgG定量測定，并命名為"enzymelinkedimmunosorbentassay(ELISA)"。ELISA的基本原理是：①使抗原（或抗體）結(jié)合到某種固相載體表面，并保持其免疫活性；②使抗原（或抗體）與某種酶聯(lián)結(jié)成酶標抗原（或抗體），而且此酶標抗原（或抗體）既保留其免疫活性，又保留其酶活性；③測定時將受檢標本（抗體或抗原）和酶標抗原（或抗體）按不同步驟與固相載體表面的抗原

細胞凋亡的原理以及過程2021/11/10

細胞凋亡(apoptosis)具有多種生化特征，包括細胞皺縮、質(zhì)膜起泡、染色體濃縮（固縮）、細胞核碎裂（核碎裂）、形成DNA條帶以及細胞最終被吞噬體吞入。相較于細胞壞死，凋亡細胞不會引發(fā)炎癥反應(yīng)，并且體內(nèi)細胞凋亡僅作用于單個細胞。凋亡和壞死代表了細胞死亡的兩個ji端，此外還存在其他變異形式。例如，壞死性凋亡或自噬，它們具有與細胞壞死和細胞凋亡相通的一些特性。細胞死亡的途徑很多，因此研究人員需要認真觀察其形態(tài)學和生化特征，在謹慎選擇的時間節(jié)點檢測多個生化標記物，確定具體實驗體系內(nèi)的細胞死亡機制。1

遠慕詳解：重組蛋白究竟是什么？2021/11/10

重組蛋白的產(chǎn)生是應(yīng)用了重組DNA或重組RNA的技術(shù)從而獲得的蛋白質(zhì)。體外重組蛋白的生產(chǎn)主要包括四大系統(tǒng):原核蛋白表達，哺乳動物細胞蛋白表達，酵母蛋白表達及昆蟲細胞蛋白表達。重組蛋白獲得途徑：重組蛋白需要使用表達系統(tǒng)來對其進行制備，其獲得途徑可以分為體外方法和體內(nèi)方法。兩種方法的前提都是應(yīng)用基因重組技術(shù)，獲得連接有可以翻譯成目的蛋白的基因片段的重組載體，之后將其轉(zhuǎn)入可以表達目的蛋白的宿主細胞從而表達特定的重組蛋白分子。體外重組蛋白的生產(chǎn)主要包括四大系統(tǒng)：原核蛋白表達（最chang用的大腸桿菌蛋白表

關(guān)于膠回收的一些心得體會2021/11/10

1、提高膠回收量的技巧1)增加電泳時的上樣量。2)電泳緩沖液用新鮮配制的。3)切膠時盡量只切有條帶的膠，減小切膠體積：含目的片斷很少的膠就不要要了，不然影響回收率。4)把切的兩塊或多塊膠融化后，無論多大的體積都用一個管子，轉(zhuǎn)移到同一個柱子上。5)溶膠時所加的溶液可多一點，這樣更有利于DNA與膜的結(jié)合，不過一般不要多余750ul。6)膠回收的關(guān)鍵是通過柱子的溶液的鹽濃度、酸堿性(電荷)和疏水性使DNA與柱子結(jié)合。因此，若電泳緩沖液的PH偏高，可在溶膠液中加入10ul(PH5.0，3mol/L的Na

遠慕淺談：細菌藥敏試驗的影響因素2021/11/09

近年來，細菌感染性疾病嚴重威脅著人類的健康，抗生素的合理使用是治療和控制此類疾病的有效手段。但是世界各國面臨著感染菌的耐藥性明顯增多的威脅。雖然新型抗菌藥物不斷出現(xiàn)，但是常見感染菌的耐藥性也在增強。有效而合理的抗生素治療依賴于準確的抗菌藥敏試驗。醫(yī)生越來越重視根據(jù)藥敏試驗的結(jié)果來選擇用藥，以避免用藥不當產(chǎn)生耐藥菌株?？股伢w外藥敏試驗結(jié)果的正確與否對抗生素的選擇至關(guān)重要。藥敏試驗的結(jié)果受到諸多因素的影響，如培養(yǎng)基、試紙片以及菌液的濃度等。1培養(yǎng)基細菌藥敏試驗所用的培養(yǎng)基種類較多，多數(shù)情況下，采用

常見7種細菌鑒定生化反應(yīng)了解一下2021/11/09

(1)、糖(醇)類發(fā)酵試驗不同的細菌含有發(fā)酵不同糖(醇)的酶,因而發(fā)酵糖(醇)的能力各不相同.其產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物亦不相同,如有的產(chǎn)酸產(chǎn)氣,有的產(chǎn)酸不產(chǎn)氣.酸的產(chǎn)生可利用指示劑來判定.在配制培養(yǎng)基時預先加入溟甲酚紫［PHS.2(黃色)一6.8(紫色)],當發(fā)酵產(chǎn)酸時,可使培養(yǎng)基由紫色變?yōu)辄S色.氣體產(chǎn)生可由發(fā)酵管中倒置的杜氏小管中有無氣泡來證明.例如：甘露醇發(fā)酵試驗。(2)、甲基紅(Methylred)試驗(該試驗簡稱MR試驗)很多細菌,如大腸桿菌等分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸,丙酮酸再被分解,產(chǎn)生甲酸、乙酸

菌種保藏中心如何進行細菌鑒定？2021/11/09

傳統(tǒng)方法常規(guī)宏觀菌落形態(tài)學觀察,主要觀察菌落在其適合的培養(yǎng)基上的生長狀況:細菌在固體培養(yǎng)基上的生長形態(tài)、大小、顏色是否均勻一致,菌落個體表面及邊緣的生長狀況；在液體培養(yǎng)基上的渾濁狀況、沉淀狀況、液面菌膜狀況；半固體上穿刺接種后,觀察細菌是否沿著接種線生長以及其生長狀態(tài)是呈毛刷樣生長還是均勻生長,上下生長是否一致.在鑒別培養(yǎng)基上培養(yǎng),觀察結(jié)果是否跟預期結(jié)果相同。細菌的個體形態(tài)學觀察,即通過顯微鏡觀察.觀察前細菌需要著色,要根據(jù)預先確定的觀察項目選擇與之相對應(yīng)的染色方法,目前常用的染色方法包括革蘭氏