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實(shí)驗(yàn)樣本的收集保存和運(yùn)輸要求2021/11/30: 1：病理標(biāo)本收集及保存：1）冰凍切片：取下適當(dāng)?shù)慕M織塊放于液氮保存；2）石蠟切片：取下適當(dāng)?shù)慕M織塊放于4%多聚甲醛保存；3）細(xì)胞爬片：細(xì)胞爬片4%多聚甲醛固定30min，換PBS浸沒4℃保存。2：分子生物學(xué)標(biāo)本收集及保存：1）新鮮組織：切割標(biāo)本后放于液氮或者-80℃冰箱保存；2）石蠟標(biāo)本：常溫保存；3）全血標(biāo)本：取適量全血加入EDTA或肝素抗凝采血管；4）體液標(biāo)本：高速離心取沉淀；5）細(xì)胞標(biāo)本：細(xì)胞加TRizol裂解后液氮或者-80℃冰箱保存。3：蛋白質(zhì)實(shí)驗(yàn)標(biāo)本收集及保存：1）新鮮組織：切割標(biāo)本

蛋白marker--Western Blot（WB)實(shí)驗(yàn)中的標(biāo)尺2021/11/30: 一、蛋白marker是什么？在WB實(shí)驗(yàn)中，蛋白marker的作用主要是用來指示蛋白條帶所對(duì)應(yīng)的分子量大小，只有標(biāo)準(zhǔn)量精確無誤了，實(shí)驗(yàn)結(jié)果才有說服力，除此之外，蛋白標(biāo)準(zhǔn)還有表示轉(zhuǎn)移成功或者蛋白在凝膠上的電泳程度等等的作用，所以選擇正確的蛋白Marker也是westernblot實(shí)驗(yàn)成功的必要條件之一。二、蛋白marker的分類總體來說，蛋白Marker可以分成未預(yù)染蛋白marker、預(yù)染marker二個(gè)級(jí)別。1.未染色（premixed）蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn)未預(yù)染蛋白marker即寬分子量蛋白標(biāo)準(zhǔn)、高分

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組和標(biāo)記編號(hào)方法2021/11/29: 一、分組1、分組原則實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組應(yīng)嚴(yán)格按照隨機(jī)分組的原則進(jìn)行，使每只動(dòng)物都有同等機(jī)會(huì)被分配到各個(gè)實(shí)驗(yàn)組中去，盡量避免人為因素對(duì)實(shí)驗(yàn)造成的影響。2、建立對(duì)照組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組時(shí)應(yīng)特別注意建立對(duì)照組。對(duì)照組可分自身對(duì)照組和平行對(duì)照組。2.1自身對(duì)照組自身對(duì)照是把實(shí)驗(yàn)動(dòng)物本身在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)前、后兩階段的各項(xiàng)相關(guān)數(shù)據(jù)，分別作為對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組的結(jié)果并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。2.2平行對(duì)照組平行對(duì)照組分正對(duì)照組和負(fù)對(duì)照組(空白對(duì)照組)兩種。正對(duì)照組是對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物實(shí)施與實(shí)驗(yàn)動(dòng)物相同但排除了所要觀察的目的因子(如治療手段或藥物)

反向PCR（inversePCR）了解一下2021/11/29: 反向PCR是一種多聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)應(yīng)用的方法，可使已知序列的核心區(qū)邊側(cè)的未知RMA成幾何級(jí)數(shù)擴(kuò)增。用適當(dāng)?shù)南拗菩詢?nèi)切裂解含核心區(qū)的RMA，以產(chǎn)生適合于PCR擴(kuò)增大小的片段，然后片段的末端再連接形成環(huán)狀分子。PCR的引物同源于環(huán)上核心區(qū)的末端序列，但其方向可使鏈的延長(zhǎng)經(jīng)過環(huán)上的未知區(qū)而不是分開引物的核心區(qū)。這種反向PCR方法可用于擴(kuò)增本來就在核心區(qū)旁邊的序列，還可應(yīng)用于制備未知序列探針或測(cè)定邊側(cè)區(qū)域本身的上、下游序列。用傳統(tǒng)的緩沖液和其他提供者推薦的條件裂解RMA。反向PCR所擴(kuò)增的片段的

免疫熒光技術(shù)中標(biāo)本制作與注意事項(xiàng)2021/11/29: 一、免疫熒光技術(shù)中標(biāo)本制作的基本程序近似于酶免疫組化，不同點(diǎn)如下：1、免疫熒光不需要使用雙氧水處理，封閉和一抗孵育與其相同。2、免疫熒光的二抗使用不同熒光標(biāo)記的二抗孵育，孵育時(shí)間根據(jù)抗體的工作濃度確定。3、二抗孵育之后充分洗片后即可貼片、封片和觀察。4、免疫熒光在封片時(shí)常使用封片劑或甘油：0.01MPBS（1：1）。條件許可，建議購買抗淬滅的封片液，使標(biāo)本可以保存更久。5、熒光抗體的孵育以及后續(xù)處理需要避光。6、熒光抗體染色假陽性可能會(huì)多，需要分別設(shè)定陽性和陰性對(duì)照。二、注意事項(xiàng)1、熒光染色后一

酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)實(shí)驗(yàn)原理介紹2021/11/29: ELISA，即酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)，其基本原理是將一定濃度的抗原或者抗體通過物理吸附的方法固定于聚苯乙烯微孔板表面，加入待檢標(biāo)本，通過酶標(biāo)物顯色的深淺間接反映被檢抗原或者抗體的存在與否或者量的多少。ELISA技術(shù)作為免疫標(biāo)記技術(shù)（包含免疫熒光技術(shù)，免疫放射技術(shù)，免疫酶技術(shù)和免疫膠體金技術(shù)）中的一種，已廣泛應(yīng)用于科研和臨床實(shí)驗(yàn)中，具有快速、定性或者定量甚至定位的特點(diǎn)。ELISA可用于測(cè)定抗原，也可以測(cè)定抗體。在這種測(cè)定方法中有3種必要的試劑：①固相的抗原或抗體；②酶標(biāo)記的抗原或抗體；③酶作用的底物。根

京尼平標(biāo)準(zhǔn)品,CAS:6902-77-8實(shí)驗(yàn)分析2021/11/26: 中文名稱:京尼平英文名稱:GenipinCAS:6902-77-8分子式:C11H14O5分子量:226.23EINECS號(hào):636-196-5化學(xué)性質(zhì)：白色結(jié)晶粉末，可溶于甲醇、乙醇、DMSO等有機(jī)溶劑，來源于梔子果實(shí)。用途：京尼平對(duì)胃機(jī)能呈抗膽堿性的抑制作用，抗癌，保肝。用途：一種天然的交聯(lián)劑，從梔子果實(shí)中提取?？梢苑乐怪|(zhì)過氧化和一氧化氮的產(chǎn)生。有抗炎和抗血管生成的作用。參與藥物輸送系統(tǒng)。制備方法：京尼平的制備方法一般采用從梔子中提取京尼平苷，再用β－葡萄糖苷酶水解，然后用乙mi萃取、真空

流式檢測(cè)細(xì)胞樣本，樣本少時(shí)這么做2021/11/26: 當(dāng)樣本細(xì)胞數(shù)少的時(shí)候，你應(yīng)該如何進(jìn)行樣本處理？這個(gè)問題，曾經(jīng)很多做實(shí)驗(yàn)的都碰到過，尤其是做小動(dòng)物的，例如做小鼠的胰腺組織，往往只能分離出不多的細(xì)胞，處理中又很容易丟掉，導(dǎo)致最后上機(jī)獲取到的細(xì)胞寥寥wu幾，給結(jié)果解讀帶來很大困難。因此，重要的是，如何盡量避免丟失，保障有足夠的細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)?zāi)?。在Cyt-Geist中，匯總了以下建議，相信對(duì)遇到相同困境的FLOWER會(huì)有較大幫助：1、建議從野生型或其他相同細(xì)胞來源獲取細(xì)胞摻入進(jìn)去。如果感興趣的細(xì)胞標(biāo)記了熒光蛋白，那么可以使用沒有熒光蛋白標(biāo)記的野生型細(xì)胞

ELISA實(shí)驗(yàn)中時(shí)常出現(xiàn)復(fù)測(cè)原因分析2021/11/26: 在ELISA實(shí)驗(yàn)過程中時(shí)常會(huì)出現(xiàn)復(fù)測(cè)現(xiàn)象，即我們時(shí)常說的"花板"現(xiàn)象，這種現(xiàn)象影響檢驗(yàn)結(jié)果的正確判讀，對(duì)工作造成一定的不利影響，一旦出現(xiàn)“花板”，實(shí)驗(yàn)結(jié)果必須放棄，重新進(jìn)行，不僅浪費(fèi)物料和時(shí)間，而且還會(huì)出現(xiàn)樣本量缺少、交叉污染、報(bào)告延遲等一系列問題。出現(xiàn)這現(xiàn)象的影響因素分析如下1、標(biāo)本因素正確處理標(biāo)本，防止大規(guī)模溶血、血漿層異物、使用一次性加樣槍頭，防止交叉污染。血清和血漿均可以用于檢測(cè)，但血清的分離應(yīng)在抽血后等血液*凝固后再離心。2、試劑因素正確保存及使用有效試劑。使用過期試劑及底物接觸金屬容

慢病毒在使用過程中可能遇到的問題2021/11/26: 如何使用慢病毒感染細(xì)胞？使用慢病毒感染細(xì)胞的操作流程取決于細(xì)胞種類，因此首先要了解細(xì)胞的來源和背景。通常來講首先要根據(jù)MOI和需要感染細(xì)胞量計(jì)算所需要的病毒量，然后將所需病毒液加入培養(yǎng)體系后4小時(shí)左右即可換成*培養(yǎng)基正常培養(yǎng)。慢病毒染后為什么細(xì)胞中出現(xiàn)大量黑點(diǎn)，并影響細(xì)胞生長(zhǎng)？在排除細(xì)菌及真菌污染后，細(xì)胞中的黑點(diǎn)通常為細(xì)胞碎片，導(dǎo)致細(xì)胞破碎的原因有很多，但在慢病毒感染后，細(xì)胞破碎通常有兩個(gè)原因：a.慢病毒使用量過多，或細(xì)胞數(shù)量過少；b.支原體污染。由于輕度的支原體污染并不影響細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖，故

化學(xué)試劑變質(zhì)了怎么辦？遠(yuǎn)慕帶您預(yù)防！2021/11/25: 實(shí)驗(yàn)室化學(xué)試劑有沒有保質(zhì)期，怎么辦？實(shí)驗(yàn)室試劑為啥會(huì)變質(zhì)，搞不懂？怎么樣才能延長(zhǎng)它的保質(zhì)期，我不會(huì)？是不是一頭霧水，腫么辦？不要慌！小編帶你了解其中奧妙，保證你一看就懂！要做到合理保管，一要了解試劑結(jié)構(gòu)與性質(zhì)間關(guān)系，二要?jiǎng)?chuàng)造適應(yīng)試劑貯存的外部環(huán)境。一.化學(xué)試劑為啥會(huì)變質(zhì)環(huán)境主要是指貯存的溫度、光照和介質(zhì)。介質(zhì)一般是指空氣和混有的雜質(zhì)。貯存室里除空氣中含有的氧、二氧化碳和水蒸氣以外，還往往含有存放的各種揮發(fā)性試劑擴(kuò)散到空氣中的蒸氣，常見的有氯化氫、硝酸、硫化氫、二氧化硫、溴、碘、乙烯、甲醛等蒸氣；

維生素B1的前處理，精華都在這里了！2021/11/25: 在我們買的食品中都會(huì)看到一個(gè)營(yíng)養(yǎng)標(biāo)簽，有時(shí)會(huì)在標(biāo)簽中看到維生素B1的含量，接下來就讓我們了解一下維生素檢測(cè)前處理的步驟吧。試劑配制20g/l的鐵qin化鉀溶液：稱取1g鐵qin化鉀，先用少量的水溶解后再定容至50ml。100g/l的氫氧化鈉溶液：稱取10g氫氧化鈉，加水溶解后定容至100ml。堿性鐵qin化鉀：將上述的5ml鐵qin化鉀和100ml的氫氧化鈉混合均勻后備用（現(xiàn)用現(xiàn)配）。0.1mol/l的鹽酸溶液：準(zhǔn)確移取8.5ml濃鹽酸，加水稀釋至1000ml。2.0mol/l乙酸鈉溶液：稱取2

實(shí)驗(yàn)室里需要注意的各種事項(xiàng)！2021/11/25: 安全事項(xiàng)1.進(jìn)實(shí)驗(yàn)室之前應(yīng)該穿實(shí)驗(yàn)服，戴手套和口罩，必要時(shí)應(yīng)該把普通口罩換成防毒面具。2.實(shí)驗(yàn)室平常要保證通風(fēng)良好。3.實(shí)驗(yàn)室要備有洗眼器和風(fēng)淋區(qū)。4.操作高溫儀器時(shí)需要佩戴防燙手套，自己辦公室最好常備一個(gè)小藥箱，放上燙燒膏，碘伏，棉簽紗布等，以備不時(shí)之需。5.禁止在實(shí)驗(yàn)室驅(qū)逐打鬧，飲食飲水等。6.實(shí)驗(yàn)室要配有溫濕度計(jì)。7.做實(shí)驗(yàn)時(shí)女生不能散發(fā)，防止酒精燈點(diǎn)燃頭發(fā)。操作事項(xiàng)1.配戴手套直接使用電子天平，使用之前要調(diào)平衡，計(jì)數(shù)時(shí)要關(guān)天平門，使用后應(yīng)該清掃天平及桌面，天平清零，關(guān)上天平門，以便下次使

微生物檢測(cè)實(shí)驗(yàn)倒平板技巧！2021/11/25: 實(shí)驗(yàn)中相信大家都經(jīng)常要倒平板吧？初學(xué)者往往都倒不好，導(dǎo)致后續(xù)實(shí)驗(yàn)出現(xiàn)問題。這里總結(jié)幾點(diǎn)小技巧供大家參考：培養(yǎng)基傾注溫度1、培養(yǎng)基的傾注時(shí)適宜溫度約45℃。培養(yǎng)基置手心感覺不燙，但是置手背感覺燙時(shí)，培養(yǎng)基溫度大約就是45℃。培養(yǎng)基傾注時(shí)溫度太高的話，凝固時(shí)間較長(zhǎng)，另外皿蓋上會(huì)有大量冷凝水，不利于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。溫度太低則容易出現(xiàn)倒板過程中瓶中培養(yǎng)基部分凝固的現(xiàn)象。2、有些培養(yǎng)基需要加入添加成分，這些添加成分在加入前應(yīng)先放置到室溫，避免冷的液體造成瓊脂凝結(jié)或形成片狀物。3、目前多數(shù)實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)基滅菌后會(huì)放置

溫度對(duì)微生物生長(zhǎng)的影響2021/11/24: 微生物與所處的環(huán)境之間具有復(fù)雜的相互影響和相互作用:一方面,各種各樣的環(huán)境因素對(duì)微生物的生長(zhǎng)和繁殖有影響,另一方面,微生物生長(zhǎng)繁殖也會(huì)影響和改變環(huán)境.研究環(huán)境因素與微生物之間的關(guān)系,可以通過控制環(huán)境條件來利用微生物有益的一面,同時(shí)防止它有害的一面。溫度是影響微生物生長(zhǎng)的最重要因素之一。溫度對(duì)微生物的影響具體表現(xiàn)在：影響酶活性，溫度變化影響酶促反應(yīng)速率，最終影響細(xì)胞合成。影響細(xì)胞膜的流動(dòng)性，溫度高，流動(dòng)性大，有利于物質(zhì)的運(yùn)輸，溫度低，流動(dòng)性降低，不利于物質(zhì)運(yùn)輸，因此，溫度變化影響營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收與代

免疫熒光染色小貼士，讓你的實(shí)驗(yàn)少走彎路！2021/11/24: 近年來隨著儀器和試劑的不斷發(fā)展，幾乎所有的免疫檢測(cè)應(yīng)用都可以獲得熒光讀數(shù)。不過，盡管免疫熒光技術(shù)能夠提供靈敏而準(zhǔn)確的結(jié)果，并適合多重檢測(cè)，但優(yōu)化還是bi不可少的。操作方案要優(yōu)化免疫熒光染色的操作方案通常包括：固定和透化、封閉、一抗孵育、洗滌、二抗孵育、再次洗滌以及測(cè)定讀數(shù)。大多數(shù)研究人員的染色方案都是一成不變的，因此建議在使用珍貴的樣本材料時(shí)，花點(diǎn)時(shí)間優(yōu)化操作方案的每一步。就一抗孵育而言，必須考慮抗體的建議稀釋度，以實(shí)現(xiàn)高的信背比。若抗體濃度過低，則熒光信號(hào)較弱，可能難以與背景區(qū)分開，但抗體濃度

你的WB實(shí)驗(yàn)內(nèi)參是否選擇正確？2021/11/24: 要想底氣十足地秀出你的WB實(shí)驗(yàn)結(jié)果，單單內(nèi)參對(duì)照就是一門學(xué)問。在對(duì)靶蛋白進(jìn)行分析時(shí)，首先考慮是否等量上樣，其次考慮信號(hào)是否屬于檢測(cè)的線性范圍。那么，內(nèi)參蛋白就尤為重要！通常，第一感覺內(nèi)參蛋白就是β-actin或GAPDH等。實(shí)際上，可以選擇的內(nèi)參有很多，而選擇內(nèi)參有一定的標(biāo)準(zhǔn)。第一，實(shí)驗(yàn)條件不能改變內(nèi)參蛋白上樣量。第二，對(duì)照內(nèi)參的分子量必須與靶蛋白不同。第三，也是最重要的一點(diǎn)，檢測(cè)到的內(nèi)參蛋白和靶蛋白的信號(hào)必須在一個(gè)線性范圍內(nèi)，否則你會(huì)發(fā)現(xiàn)你的條帶無法進(jìn)行定量。然而，實(shí)際操作中，很多同學(xué)沒有意識(shí)

如何區(qū)分抗真菌、細(xì)菌化合物庫、抑制劑？2021/11/24: 首先明確一下，抗生素不是消炎藥。抗生素是一種抗感染的藥物，而消炎藥具有消炎止痛的作用。在講消炎藥和抗生素之前，讓我們先明確兩個(gè)概念，炎癥和感染，并看一下二者之間的關(guān)系?？股氐淖饔脵C(jī)制感染是由細(xì)菌、真菌、病毒、寄生蟲等病原體侵入人體所引起的局部組織和全身性炎癥反應(yīng)。感染可以引起炎癥反應(yīng)，如流感可以引起全身的發(fā)熱，頭痛，這就是因?yàn)榱鞲胁《靖腥驹隗w內(nèi)引起的炎癥反應(yīng)。確切的說，炎癥不是一種疾病，而是一種現(xiàn)象，通常表現(xiàn)為紅，腫，熱，痛等。除了感染可以引起炎癥之外，過敏、強(qiáng)酸腐蝕、外傷等也可以引起炎癥反應(yīng)

凍干粉知識(shí)科譜(純干貨)?。?/a>2021/11/23: 什么叫凍干粉？實(shí)際上凍干粉既并不是一類產(chǎn)品，也不是一種成份，只是一種存儲(chǔ)技術(shù)，便是用冷藏和干燥的方式，把東西從液態(tài)變?yōu)榉勰?。這類技術(shù)的益處是，一些成份在液體狀態(tài)不太平穩(wěn)，因此制成粉末狀來儲(chǔ)存相關(guān)成分的活力，增加產(chǎn)品的保存期。凍干粉簡(jiǎn)介：凍干粉是在無菌環(huán)境下將藥液冷凍成固態(tài)，抽真空將水分升華干燥而成的無菌粉劑。凍干粉是采用冷凍干燥機(jī)的真空冷凍干燥法預(yù)先將藥液里面的水分凍結(jié)，然后在真空無菌的環(huán)境下將藥液里面被凍結(jié)的水分升華，從而得到冷凍干燥而成。簡(jiǎn)而言之，在低溫環(huán)境下抽中藥液里面的水份,保留其原有

濃縮蛋白質(zhì)的儲(chǔ)存小技巧2021/11/23: 蛋白質(zhì)是非常敏感的，即使已經(jīng)提取濃縮，在儲(chǔ)存時(shí)仍然會(huì)發(fā)生降解、聚合和失活。如下分析幾種保存方法的優(yōu)缺點(diǎn)和一些小技巧，在儲(chǔ)存時(shí)應(yīng)根據(jù)自己的蛋白和實(shí)驗(yàn)需求選擇適合自己的方法，權(quán)衡利弊，以免造成實(shí)驗(yàn)的麻煩。下面跟隨遠(yuǎn)慕生物一起了解下吧！1.儲(chǔ)存在4°C溶液將濃縮蛋白質(zhì)儲(chǔ)存在單一溶液（如PBS），置于聚丙烯管或干凈的玻璃容器中，放在4°C冰箱保存。優(yōu)點(diǎn)：蛋白容易獲得，可以快速進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，且同一管樣品可重復(fù)取樣，這樣避免了因經(jīng)常解凍而加速蛋白的降解。缺點(diǎn)：在重復(fù)取樣時(shí)，溫度升高且暴露于環(huán)境中，可能會(huì)導(dǎo)致微生

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