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免疫組化抗原修復(fù)注意事項(xiàng)2021/12/07: 經(jīng)甲醛固定的部分組織細(xì)胞，因固定過程中可能會(huì)形成醛鍵或羧甲基而封閉部分抗原決定簇，使免疫組化標(biāo)記敏感性明顯降低，因此在染色前，有些抗原需進(jìn)行修復(fù)或暴露?？乖迯?fù)方法可分為化學(xué)方法和物理方法。化學(xué)方法是以酶消化方法，常用胰蛋白酶及胃蛋白酶，配制濃度與消化時(shí)間要適度。常用的物理方法有單純加熱、微波處理和高壓加熱。在選用這三種方法時(shí)，浸泡切片的緩沖液的離子強(qiáng)度和pH、加熱的溫度和時(shí)間均影響著抗原修復(fù)效果。1、pH的應(yīng)用范圍及選擇抗原修復(fù)液的pH非常重要，有效的抗原修復(fù)pH要比修復(fù)液的化學(xué)成分更重要，同

免疫組化實(shí)驗(yàn)常見問題處理2021/12/07: 當(dāng)免疫組化染色沒有出現(xiàn)預(yù)期結(jié)果時(shí)，應(yīng)系統(tǒng)地查找原因，而每一次只能排除一種可能的原因。對(duì)照/標(biāo)本無染色①確認(rèn)是否忽略了應(yīng)該加的某種試劑，包括一抗、二抗、三抗及底物等。②確認(rèn)所有的試劑是否按正確的順序加入，是否孵育了足夠的時(shí)間。③對(duì)照抗體的標(biāo)簽確認(rèn)是否使用了正確的抗體，以及所用的檢測(cè)系統(tǒng)是否和一抗匹配，這一點(diǎn)是非常重要的。比如，如果一抗是兔來源的抗體，二抗一定要用抗兔的二抗來匹配；或一抗是小鼠的IgM一抗，二抗必須是山羊/兔抗小鼠的IgM（不是IgG）二抗。④檢查抗體所使用的稀釋度及稀釋溶液。⑤檢查

質(zhì)控樣是啥意思？質(zhì)控樣/同標(biāo)樣又有何區(qū)別？2021/12/06: 質(zhì)控樣是什么意思?質(zhì)控樣，一般是實(shí)驗(yàn)室用來檢驗(yàn)曲線做的是否標(biāo)準(zhǔn)用的，他是一個(gè)已知濃度的樣品且濃度有正負(fù)誤差，比如砷質(zhì)控樣濃度為3.240±0.012毫克/升。你將他帶入你的曲線進(jìn)行分析，看得出的數(shù)據(jù)是否在質(zhì)控樣濃度誤差范圍內(nèi)，如果在范圍內(nèi)，則可以說明你的曲線沒有問題，相應(yīng)的其他數(shù)據(jù)也正確。質(zhì)控樣在檢測(cè)活動(dòng)中的重要性檢測(cè)過程中涉及到很多流程或者叫做步驟吧，或多多少會(huì)遇到一些不確定的因素，最終影響著我們的檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性，那么如何確保我們的檢測(cè)是在可控范圍內(nèi)，換句話說，如何保證我們的檢測(cè)結(jié)果的有效性

血清匯總：那些可以忽略卻重要的細(xì)節(jié)2021/12/06: 在我們?nèi)粘５募?xì)胞實(shí)驗(yàn)中，總會(huì)遇到各式各樣的問題，其中關(guān)于胎牛血清（FBS）的問題最多，今天為大家匯總了血清一些常見問題，滿滿的干貨！那些可以忽略的小卻重要的細(xì)節(jié)：1.血清的保存溫度？未拆封的血清應(yīng)保存在-15℃至-20℃，避免反復(fù)凍融。拆封后的血清應(yīng)無菌分裝成適當(dāng)?shù)挠昧坎⒋娣庞?15℃至-20℃，2~8℃溶解后建議一個(gè)月內(nèi)使用。2.血清的有效期是多久？大部分血清效期是5年，針對(duì)每個(gè)批次，請(qǐng)通過質(zhì)檢文件確定具體效期日期。3.血清應(yīng)如何融解？血清從冷凍箱取出后，置于2～8℃冰箱使之融解，不時(shí)規(guī)則地?fù)u

這六種菌種保存方法快收藏起來！2021/12/06: 一、傳代保存法：有些微生物當(dāng)遇到冷凍或干燥等處理時(shí)，會(huì)很快死亡，因此在這種情況下，只能求助于傳代培養(yǎng)保存法。傳代培養(yǎng)就是要定期地進(jìn)行菌種轉(zhuǎn)接、培養(yǎng)后再保存，它是最基本的微生物保存法，例如酸奶等常用生產(chǎn)菌種的保存。傳代保存時(shí)，培養(yǎng)基的濃度不宜過高，營養(yǎng)成分不宜過于豐富，尤其是碳水化合物的濃度應(yīng)在可能的范圍內(nèi)盡量降低。培養(yǎng)溫度通常以稍低于最適生長溫度為好。若為產(chǎn)酸菌種，則應(yīng)在培養(yǎng)基中添加少量碳酸鈣。一般地，大多數(shù)菌種的保藏溫度以5℃為好，像厭氧菌、霍亂弧菌及部分病原真菌等微生物菌種則可以使用37℃進(jìn)

細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)生長緩慢？遠(yuǎn)慕幫您解決！2021/12/06: 細(xì)胞生長緩慢的常見原因:(1)培養(yǎng)基可能缺乏細(xì)胞生長所需的某種因子。通常情況下，當(dāng)小伙伴購買細(xì)胞，并沒有按照ATCC或國內(nèi)細(xì)胞庫推薦的方法制備培養(yǎng)基，使用實(shí)驗(yàn)室兄弟姐妹使用的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。解決方法一般是按照推薦的方法制備培養(yǎng)基，或直接購買培養(yǎng)細(xì)胞的培養(yǎng)基。(B)細(xì)菌、支原體、真菌等污染:雖然培養(yǎng)基中通常添加雙抗體(青霉素和鏈霉素)，但如果無菌操作觀念不強(qiáng)，仍有可能造成污染。處理方法:如果有冷凍細(xì)胞，可以丟棄污染細(xì)胞。當(dāng)然，丟棄并不是隨意的，扔進(jìn)垃圾桶。應(yīng)按照實(shí)驗(yàn)室生物安全規(guī)定進(jìn)行。然后復(fù)蘇培

KO細(xì)胞中目的蛋白殘留問題及解決方案2021/12/03: 在我們鑒定基因敲除（KO）細(xì)胞是否建立成功時(shí)，除了基因水平的測(cè)序、PCR等方法外，蛋白水平的WesternBlot驗(yàn)證也是一個(gè)重要的方法。特別是對(duì)于文章發(fā)表中結(jié)果的呈現(xiàn)，WesternBlot圖尤為重要。但在實(shí)際實(shí)驗(yàn)的過程中，偶爾也會(huì)出現(xiàn)測(cè)序鑒定為KO純合子但WB實(shí)驗(yàn)卻有條帶的情況，即蛋白殘留。那么基因敲除細(xì)胞時(shí)蛋白殘留是如何產(chǎn)生的呢？1由于目的基因的多轉(zhuǎn)錄本引起的蛋白殘留基因一般含有多個(gè)不同的轉(zhuǎn)錄本，在選擇敲除位點(diǎn)時(shí)，有時(shí)會(huì)很難保證覆蓋所有的轉(zhuǎn)錄本，而未被影響到的轉(zhuǎn)錄本就有可能正常轉(zhuǎn)錄翻譯從而

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中的安全防護(hù)，實(shí)驗(yàn)人注意！2021/12/03: 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中的安全防護(hù)主要指在實(shí)驗(yàn)過程中可能對(duì)實(shí)驗(yàn)人員造成的危害和對(duì)公共環(huán)境造成的污染各種不安全因素進(jìn)行的防護(hù)。這些不安全因素主要來自化學(xué)、物理和生物等方向。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中的安全防護(hù)包括防火、防毒、防爆、防觸電、防輻射、防外傷等，還包括防動(dòng)物咬傷、防動(dòng)物傳染，特別要防來自動(dòng)物的氣溶膠吸入感染。為保護(hù)工作人員、實(shí)驗(yàn)者及其周圍的人群安全，可采取八點(diǎn)有效措施：（1）建立強(qiáng)有力的安全防護(hù)組織（2）制定嚴(yán)密的安全制度（3）抓好深入的安全教育（4）進(jìn)行認(rèn)真的醫(yī)學(xué)檢測(cè)（5）推廣安全的操作技術(shù)（6）提供良好的防護(hù)設(shè)備

微生物研究：這些菌株的區(qū)別你還沒搞懂？2021/12/03: 標(biāo)準(zhǔn)菌株亦稱模式菌株，在給某細(xì)菌定名，分類作記載和發(fā)表時(shí)，為了使定名準(zhǔn)確和作為分類概念的準(zhǔn)則，以純粹活菌（可繁殖）狀態(tài)所保存的菌種。相當(dāng)于動(dòng)植物分類中的模式標(biāo)本。在進(jìn)行細(xì)菌等的分類和鑒定時(shí)，生理學(xué)和生物化學(xué)特性十分重要，但若就這些性質(zhì)進(jìn)行試驗(yàn)，就必須應(yīng)用許多純分離的新細(xì)胞。因此，作為分類標(biāo)準(zhǔn)的菌種，也有必要進(jìn)行純粹分離，并以活菌（可以分裂）狀態(tài)保存。在標(biāo)準(zhǔn)菌種中，對(duì)于從作過原始記載的作者實(shí)際分離或應(yīng)用的菌株，通過營養(yǎng)繁殖獲得和保存的菌株，稱為正標(biāo)準(zhǔn)菌株。此外，當(dāng)原作者使用復(fù)數(shù)菌株，以后的研究者選

微生物染色方法介紹2021/12/03: 天然色素具有安全無毒性、無致癌性和可生物降解等特點(diǎn)，隨著各國對(duì)綠色環(huán)保產(chǎn)品的追求，天然色素在市場(chǎng)上的需求逐年增加，單單依靠動(dòng)植物中的提取已經(jīng)不能滿足人類的需求。而微生物的分布廣，種類繁多，因此，微生物染色在紡織領(lǐng)域具有廣闊的應(yīng)用前景。1、微生物色素微生物色素是微生物的一種次級(jí)代謝產(chǎn)物，色素顏色種類較多，有紅、橙、黃、綠、青、紫、黑、棕等各種顏色。微生物色素可以分為水溶性和非水溶性色素兩種。與其他天然染料相比，微生物色素的生產(chǎn)周期短，成本低廉，更易于工業(yè)化生產(chǎn)。微生物色素的產(chǎn)生方式主要有兩種，一種

蛋白、DNA、RNA的上樣緩沖液區(qū)別2021/12/02: 上樣緩沖液即loadingbuffer，是蛋白質(zhì)、核酸DNA與RNA的研究實(shí)驗(yàn)中溶解和添加樣品時(shí)所用的一類上樣緩沖液，蛋白質(zhì)、DNA、RNA是不同的樣品，其上樣緩沖液也有所區(qū)別。蛋白上樣緩沖液的組成其緩沖液主要采用Tris-HCl（三羥甲基氨基甲烷鹽酸）或Tris甘氨酸、與EDTA鹽（乙二胺四乙酸二鈉），還需添加SDS，DTT（二硫蘇糖醇），溴酚藍(lán)，甘油等。蛋白、DNA、RNA的上樣緩沖液區(qū)別SDS可與蛋白質(zhì)結(jié)合使蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物上帶有大量的負(fù)電荷，這時(shí)蛋白質(zhì)本身的電荷*被SDS掩蓋，消除了

常用指示劑的配制方法(超全)2021/12/02: 二苯胺磺酸鈉指示液取二苯胺磺酸鈉0.2g，加水100ml使溶解，即得。二苯偕肼指示液取二苯偕肼1g，加乙醇100ml使溶解，即得。雙硫腙指示液取雙硫腙50mg，加乙醇100ml使溶解，即得。石蕊指示液取石蕊粉末10g,加乙醇40ml，回流煮沸1小時(shí),靜置，傾去上層清液，再用同一方法處理二次，每次用乙醇30ml，殘?jiān)盟?0ml洗滌，傾去洗液，再加水50ml，煮沸，放冷，濾過，即得。變色范圍pH4.5~8.0(紅→藍(lán))。甲酚紅指示液取甲酚紅0.1g，加0.05mol/L氫氧化鈉溶液5.3ml使溶解

你的實(shí)驗(yàn)室做常規(guī)支原體檢測(cè)了嗎2021/12/02: 全球平均有約15~35%細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室發(fā)生支原體污染（65~80%嚴(yán)重污染），超過一半實(shí)驗(yàn)室有兩種支原體污染；而全球各地的細(xì)胞庫中，也有發(fā)現(xiàn)5~35%不等的支原體感染率，日本甚至高達(dá)60%。但！全球目前有在做常規(guī)支原體監(jiān)控的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室卻不到50%！支原體為細(xì)菌的一類，最早在1898年由法國E.Nocard及E.R.Roux從肺疫牛只中分離出來，1956年才正式命名為支原體(Mycoplasma)；支原體大小介于細(xì)菌與病毒之間(直徑介于0.15-0.3?m)，為目前發(fā)現(xiàn)最小最jian單的原核微生物，唯

實(shí)驗(yàn)室各種化學(xué)試劑開瓶后的有效期介紹2021/12/02: 按照中華人民共和國GB15346-94化學(xué)試劑包裝標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定：第9.1.1.M規(guī)定：要求注明有效期的必須注明有效期;生產(chǎn)日期或生產(chǎn)批號(hào)。我國化學(xué)試劑的分類：優(yōu)級(jí)純(GR，綠標(biāo)簽)：主成分含量很高、純度很高，適用于精確分析和研究工作，有的可作為基準(zhǔn)物質(zhì)。分析純(AR，紅標(biāo)簽)：主成分含量很高、純度較高，干擾雜質(zhì)很低，適用于工業(yè)分析及化學(xué)實(shí)驗(yàn)?；瘜W(xué)純(CP，藍(lán)標(biāo)簽)：主成分含量高、純度較高，存在干擾雜質(zhì)，適用于化學(xué)實(shí)驗(yàn)和合成制備。實(shí)驗(yàn)純(LR，黃標(biāo)簽)：主成分含量高，純度較差，雜質(zhì)含量不做選擇，只適用

蛋白質(zhì)相互作用(protein interaction)實(shí)驗(yàn)方法2021/12/01: 免疫共沉淀和親和層析共分離：免疫共沉淀是證明蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用的直接經(jīng)典和有效的方法，如蛋白A能與B相互作用結(jié)合成異源二聚體，無論用抗A或抗B的抗體或與A或B的親和物偶聯(lián)的agarose小珠都能把A和B沉淀下來。因此廣泛用于蛋白質(zhì)相互作用研究。常用的小珠：GST-Agarose（不需要抗體）ProteinA-Agarose(用時(shí)需加抗體)基本方法：1.表達(dá)蛋白質(zhì)A2.蛋白質(zhì)A與親和小珠結(jié)合3.用結(jié)合有蛋白質(zhì)A的親和小珠調(diào)取細(xì)胞破碎液中蛋白質(zhì)B4.離心、洗滌親和小珠若干次5.處理親和小珠使蛋白

檢驗(yàn)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室常見的幾種風(fēng)險(xiǎn)，趕緊規(guī)避！2021/12/01: 超能力范圍檢驗(yàn)在實(shí)際工作過程中，個(gè)別檢驗(yàn)檢測(cè)機(jī)構(gòu)超能力范圍檢測(cè)情況時(shí)有發(fā)生。超范圍檢驗(yàn)主要有三種形式：1．故意超能力范圍檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室或?qū)嶒?yàn)室中個(gè)別人員為滿足客戶要求，為實(shí)驗(yàn)室爭(zhēng)取經(jīng)濟(jì)利益，對(duì)不在能力范圍內(nèi)的產(chǎn)品開展檢驗(yàn)工作，出具帶標(biāo)識(shí)的檢驗(yàn)報(bào)告；或?qū)嶒?yàn)室人員以為采用標(biāo)準(zhǔn)中的個(gè)別標(biāo)準(zhǔn)在能力范圍內(nèi)，誤將產(chǎn)品進(jìn)行檢驗(yàn)并出具帶標(biāo)識(shí)的檢驗(yàn)報(bào)告。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)將超能力范圍檢測(cè)的后果向每一位員工宣傳，不能為經(jīng)濟(jì)利益或所謂的為單位著想而故意超能力范圍檢測(cè)；同時(shí)實(shí)驗(yàn)室還應(yīng)認(rèn)真梳理實(shí)驗(yàn)室的能力范圍，對(duì)確實(shí)有設(shè)備、具備檢驗(yàn)?zāi)?

檢驗(yàn)和檢測(cè)，有多少人還在混用?2021/12/01: CMA《檢驗(yàn)檢測(cè)機(jī)構(gòu)資質(zhì)認(rèn)定評(píng)審準(zhǔn)則》中所說的“檢驗(yàn)檢測(cè)機(jī)構(gòu)”是指一個(gè)機(jī)構(gòu)?還是指“檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)”和“檢測(cè)機(jī)構(gòu)”兩個(gè)機(jī)構(gòu)?我們來看“檢驗(yàn)檢測(cè)機(jī)構(gòu)”的定義：《檢驗(yàn)檢測(cè)機(jī)構(gòu)資質(zhì)認(rèn)定評(píng)審準(zhǔn)則》的條款3.2的定義是：依法成立，依據(jù)相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)或者技術(shù)規(guī)范，利用儀器設(shè)備、環(huán)境設(shè)施等技術(shù)條件和專業(yè)技能，對(duì)產(chǎn)品或者法律法規(guī)規(guī)定的特定對(duì)象進(jìn)行檢驗(yàn)檢測(cè)的專業(yè)技術(shù)組織。這個(gè)定義其實(shí)并沒有給出“檢驗(yàn)檢測(cè)機(jī)構(gòu)”中“檢驗(yàn)”和“檢測(cè)”的區(qū)別。我們?cè)倏戳硗庖环菸募J(rèn)監(jiān)委頒發(fā)的一份文件：《檢驗(yàn)檢測(cè)機(jī)構(gòu)資質(zhì)認(rèn)定評(píng)審準(zhǔn)則》及釋義在對(duì)條款3

電泳的基本原理及影響顆粒電泳速度的因素2021/12/01: 一、基本原理不同帶電顆粒，因其所帶電荷的性質(zhì)和多少、形狀和大小等差異，使其在同一電場(chǎng)強(qiáng)度、相同的支持介質(zhì)和緩沖液的條件下，各自的泳動(dòng)速度不同，從而使各種不同的帶電顆粒如蛋白質(zhì)、核酸等生物大分子得以分離。帶電顆粒在電場(chǎng)中泳動(dòng)速度以遷移率(mobility)表示。故遷移率可定義為帶電顆粒在單位電場(chǎng)強(qiáng)度下的泳動(dòng)速度，是指在1V／m的電場(chǎng)作用下，帶電顆粒每秒鐘移動(dòng)的距離(m)，其移動(dòng)速率為m／s，遷移率以m2／(V·s)表示。而在實(shí)際應(yīng)用中以cm2／(V·s)表示，因此通過測(cè)量d、l、V、t，便可計(jì)算遷

瓊脂糖珠PK磁珠，別在分不清啦2021/11/30: 免疫沉淀（immunoprecipitation，IP）是利用抗體特異性反應(yīng)純化富集目的蛋白的一種方法。它采用固定在微珠支持物上的特定抗體，從復(fù)雜的混合物中，純化單一抗原的實(shí)驗(yàn)。早期做科研的老師們，一般都會(huì)選用瓊脂糖珠(也稱瓊脂糖樹脂)作為免疫沉淀實(shí)驗(yàn)中的固相支持物的材料。隨著實(shí)驗(yàn)技術(shù)的更迭，磁珠已經(jīng)后lai居上，在免疫沉淀和其他微量親和純化方法中占據(jù)重要位置。那么，瓊脂糖珠和磁珠各有什么優(yōu)勢(shì)？具體實(shí)驗(yàn)中又該如何選擇呢？今天就帶大家探究一下吧！瓊脂糖珠瓊脂糖珠，結(jié)構(gòu)呈海綿狀，直徑50-150μm

血清產(chǎn)生沉淀該如何避免？2021/11/30: 怎么樣才能避免血清中產(chǎn)生沉淀呢？首先我們需要了解下什么是血清以及血清的主要作用指血液凝固后，在血漿中除去纖維蛋白原分離出的淡黃色透明液體或指纖維蛋原白已被除去的血漿。其主要作用是提供基本營養(yǎng)物質(zhì)、提供激素和各種生長因子、提供結(jié)合蛋白、提供促接觸和伸展因子使細(xì)胞貼壁免受機(jī)械損傷、對(duì)培養(yǎng)中的細(xì)胞的起到某些保護(hù)作用。主要作用1.提供基本營養(yǎng)物質(zhì)：氨基酸、維生素、無機(jī)物、脂類物質(zhì)、核酸衍生物等，是細(xì)胞生長必須的物質(zhì)。2.提供激素和各種生長因子：胰島素、腎上腺皮質(zhì)激素（地塞米松）、類固醇激素（雌二醇、睪酮

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