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科研實驗用品的種類和作用2022/01/12

1.實驗用品種類︰1.1.細胞培養(yǎng)實驗用品均為無菌，除了玻璃容器與pasteurpipet外，其它均為塑料無菌制品。1.2.TC級培養(yǎng)盤表面均有coating高分子物質以讓細胞吸附，培養(yǎng)容器種類有Tflask，plates,dishes,rollerbottle等，依實驗需要使用。1.3.plasticsterilepipet:1ml,2ml,5ml,10ml,25ml1.4.塑料離心管:15ml,50ml，均有2種不同材質，其中polypropylene(PP)為不透明材質，polystyre

如何進行細胞凍存與復蘇？2022/01/11

為什么要進行細胞凍存？細胞凍存是細胞保存的主要方法之一。利用凍存技術將細胞置于-196℃液氮中低溫保存，可以使細胞暫時脫離生長狀態(tài)而將其細胞特性保存起來，這樣在需要的時候再復蘇細胞用于實驗。而且適度地保存一定量的細胞，可以防止因正在培養(yǎng)的細胞被污染或其他意外事件而使細胞丟種，起到了細胞保種的作用。除此之外，還可以利用細胞凍存的形式來購買、寄贈、交換和運送某些細胞。細胞凍存時向培養(yǎng)基中加入保護劑--終濃度5%.15%的甘油或二甲基亞砜(DMSO)，可使溶液冰點降低，加之在緩慢凍結條件下，細胞內水分

細胞解凍過程中，存活率低怎么辦？2022/01/10

出現低存活率的可能原因及推薦解決方案如下：1.解凍過程中細胞裂解推薦的解決方案：可預期到一定量的細胞死亡，因此細胞的濃度應足夠高，考慮到這一損失。起始濃度為106至107細胞/毫升。2.解凍過程中的問題推薦的解決方案：在-70℃至-80℃下保存冷凍的培養(yǎng)物，保存時間為1-5天，但這不是保存的優(yōu)先方法。在37℃充分解凍后應立即開始培養(yǎng)。3.對冷凍液過敏推薦的解決方案：A.*或部分更換培養(yǎng)基，減少培養(yǎng)基中冷凍液的量。在24小時后更換培養(yǎng)液體可全部去除冷凍液。B.留出更多時間供培養(yǎng)物恢復。有時細胞需要

細胞凍存的注意事項2022/01/07

一、怎樣凍存動物細胞?細胞冷凍過程有四個要點：細胞的收獲、保護劑的使用、冷凍速率和儲存環(huán)境。(1)細胞的收獲用來凍存的細胞一般選擇在細胞約鋪滿90%的時候，這時細胞生長狀態(tài)好，細胞數量也多，并且在收獲細胞前24小時換一次培養(yǎng)液。收獲用來凍存的細胞開始時方法和平時一樣，用100xg離心5分鐘收集細胞再重懸，活細胞記數。稀釋或濃縮到細胞保存的最終細胞濃度的二倍(一般是400-1000萬細胞/ml)，加入已經配好的等體積的培養(yǎng)液保護劑混合溶液中輕輕混勻，分裝到凍存管，冷凍保存。(2)保護劑的使用細胞凍

培養(yǎng)基常見問題匯總2022/01/06

1.怎樣查到一個特定細胞株的相關知識和培養(yǎng)條件？ATCC（AmericanTypeCultureCollection）收集了絕大多數細胞的詳細資料。打開ATCC網頁的Cellsandhybridomas鏈接，輸入細胞名稱就可以搜索ATCC的細胞數據庫。數據庫中有每一種細胞的詳細描述，包括細胞的來源，培養(yǎng)和凍存條件，以及相關文獻等資料。2.如何選用特殊細胞系培養(yǎng)基？培養(yǎng)某類型細胞沒有固定的培養(yǎng)條件。MEM中培養(yǎng)的細胞，很可能在DMEM或M199中同樣容易生長?？傊?，優(yōu)先MEM、DMEM做貼壁細胞培

間質干細胞的表面抗原和培養(yǎng)原理2022/01/05

間質干細胞的表面抗原通過流式細胞儀分析，間充質干細胞特異性表面抗原有：SH2、SH3、CD29、CD44、CD71、CD90、CD106、CD120a、CD124。BMSC：是骨髓中除HSC以外的非造血性干細胞，骨髓中絕大多數是HSC，BMSC只占骨髓有核細胞的0.001%～0.01%。因此鑒定BMSC的方法是在骨髓的干細胞中排除HSC——BMSC：CD45-、CD34-、CD29+、CD14+/HSC：CD34+。間質干細胞的培養(yǎng)原理概述間質干細胞（mesenchymalstemcell，MS

抗體的儲存條件2022/01/04

抗體由于性質和所使用的儲存條件不同，其存儲的“保質期”可能從幾周到幾年不等。盡管每個抗體存儲的最佳條件是*的，但我們還是能夠總結出一些關于抗體存儲建議和一般準則?？贵w的儲存時間取決于抗體固有的性質和儲存條件?？贵w（尤其是酶）必須存放在適當的溫度和pH值范圍。為了維持蛋白質的活性、防止其聚集，經常保存在一定濃度的甘油，蔗糖，或類似的物質里面。1、低溫儲存對于抗體的保存至關重要一般來說，抗體最好存放在≤4℃的清潔，滅菌的玻璃或塑料管。貯存在室溫下通常會由于微生物的生長導致抗體退化和/或失活。抗體儲存

細胞培養(yǎng)過程中添加劑起什么作用？2021/12/31

能量來源：谷氨酰胺L－谷氨酰胺是一種氨基酸，細胞的重要能量來源、參與蛋白質的合成和核酸代謝。同時L-谷氨酰胺不穩(wěn)定，在中性的水溶液中會自發(fā)降解；降解產物對細胞有毒性（對干細胞，原代細胞影響尤其大）。能影響細胞活性、蛋白表達水平及糖基化模式等。那如何解決呢？方案有二：選擇不含谷氨酰胺的培養(yǎng)基，自己添加選擇穩(wěn)定的谷氨酰胺替代物經過科學家不斷努力，終于找到了穩(wěn)定的谷氨酰胺替代物：glutaGRO。它有何方功能呢？原來，它是由L-丙氨酸和L-谷氨酰胺縮合形成的二肽，穩(wěn)定性高，可在室溫下保存，2年穩(wěn)定（谷

無血清培養(yǎng)基的知識與應用2021/12/30

1、基本介紹無血清培養(yǎng)基是在合成培養(yǎng)基的基礎上發(fā)展起來的，與傳統(tǒng)的培養(yǎng)基相比，既能滿足細胞在體外長時間培養(yǎng)的要求，又能避免動物血清所帶來的不利因素。無血清培養(yǎng)基的發(fā)展歷程一般分為無血清培養(yǎng)基（Serum-FreeMedium，SFM）、無動物源培養(yǎng)基（AnimalComponentFreeMedium，ACFM）、無蛋白培養(yǎng)基（Protein-FreeMedium，PFM）及化學成分限定培養(yǎng)基（ChemicallyDefinedMedium，CDM）等四類。這里所提到的主要指第一類無血清培養(yǎng)基。

如何預防干細胞老化？2021/12/29

干細胞老化的表現細胞胞漿內特別是在核區(qū)附近出現黑色顆粒，表示細胞開始出現老化；細胞胞漿內出現空泡，則表明該細胞已老化或者已經開始分化（在全部細胞中出現少數老化細胞是正常的）；細胞立體感逐漸消失，細胞間的間隔不清，部分細胞扁平狀，細胞的形狀趨向多樣；貼壁性減退，出現一些漂浮的細胞；部分分泌強的細胞分泌物增多，細胞表面會比較臟；細胞增殖速度明顯下降，分裂相的細胞明顯減少。干細胞老化的原因和預防1)接種密度的影響：部分干細胞具有一定的分泌性能，能夠分泌一些對細胞有支持能力的因子類物質；所以必須維持一定

血清出現沉淀如何處理？2021/12/28

血清沉淀是什么？血清中經常會出現肉眼可見的沉淀，其成分有多種類型，產生的原因有很多，主要有纖維蛋白、磷酸鈣還有一些其它成分。1.纖維蛋白（Fibrin）血清中肉眼可見的沉淀物大多屬于這一類型。由于在生產過程中，血清采集、過濾（3次0.1μm過濾）和灌裝處理都是在低溫條件下快速完成,此時血清中纖維蛋白原（Fibrinogen）處于溶解狀態(tài)。但在解凍之后,血清中纖維蛋白原往往會發(fā)生凝集，形成肉眼可見的沉淀。2.磷酸鈣（CalciumPhosphate）這是一種常見的沉淀成分，通常會造成血清出現云霧狀

細胞培養(yǎng)時如何適應無血清培養(yǎng)基？2021/12/27

許多細胞系容易適應無血清培養(yǎng)基和無蛋白培養(yǎng)基，而對環(huán)境要求過高的其它細胞卻難以適應變化，這就需要更為專業(yè)的方法來適應變化。而根據細胞系的特性，有兩種方法可使細胞適應無血清培養(yǎng)基。第一種方法是連續(xù)適應/循序隔絕法；另一種方法是直接適應。一、連續(xù)適應/循序隔絕法第一種方法是連續(xù)適應/循序隔絕法。通過一系列的血清還原步驟，使細胞適應無血清培養(yǎng)基。這是優(yōu)先選用的方法，且不對細胞培養(yǎng)環(huán)境形成太過惡劣的變化。連續(xù)適應/循序隔絕法——方法1使原培養(yǎng)基內的細胞連續(xù)地經過以下幾個階段：階段1：75%補加血清的培養(yǎng)

使用胰酶時，有哪些注意事項2021/12/24

胰酶的作用原理是什么呢？胰酶是一種蛋白酶，酶切位點是肽鏈的Lys或Arg兩個殘基的羧基端肽鏈，通過在特定位置上降解蛋白，使細胞膜上和培養(yǎng)皿結合處蛋白降解，從而使兩者分離。這時細胞在自身內部細胞骨架的張力以及培養(yǎng)液表面張力的作用下成為球形。使用胰酶時需注意哪些細節(jié)問題？在使用胰酶（Trypsins）細胞消化液的過程中要特別注意避免消化液被細菌污染。胰酶細胞消化液消化細胞時間不宜過長，否則細胞鋪板后生長狀況會較差，做流式時的CDMarker也可能會下降。胰酶進行分裝時盡量分裝成多瓶，并遵守3次左右用

細胞培養(yǎng)問題匯總答疑2021/12/23

復蘇細胞的正確打開方式？復蘇過程應快融，目的是防止小冰晶形成大冰晶，即冰晶的重結晶。凍存細胞從液氮中取出后，立即放入37℃水浴中，輕輕搖動冷凍管，使其在1分鐘內全部融化（不要超過3分鐘）。解凍后的細胞可以直接接種到含有*培養(yǎng)液的細胞培養(yǎng)瓶中直接進行培養(yǎng)，24小時后再用新鮮*培養(yǎng)液替換舊培養(yǎng)液，以去除DMSO。如果細胞對冷凍保護劑特別敏感，解凍后的細胞應先通過離心去除冷凍保護劑，然后再接種到含*生長培養(yǎng)液的培養(yǎng)瓶中。注：操作時戴好手套，防止凍傷；帶上防護眼鏡可以防止液氮罐里剛剛拿出來的管子液氮爆炸

細胞培養(yǎng)不好怎么辦？2021/12/22

培養(yǎng)細胞不貼壁可能原因1.胰蛋白酶消化過度；2.支原體污染；3.培養(yǎng)基pH值過堿（NaHCO3分解）；4.細胞老化；5.接種細胞起始濃度太低或太高。解決方法1.縮短胰蛋白酶消化時間或降低胰蛋白酶濃度；2.分離培養(yǎng)物，檢測支原體。清潔支架或培養(yǎng)箱。如發(fā)現支原體污染，丟棄培養(yǎng)物；3.使用無菌醋酸溶液調整pH值或充入無菌CO2；4.啟用新的保種細胞；5.調節(jié)最佳接種細胞濃度。懸浮細胞成簇可能原因1.培養(yǎng)液中含鈣,鎂離子；2.支原體污染；3.蛋白酶過度消化使得細胞裂解；4.DNA污染。解決方法1.用無鈣

細胞培養(yǎng)遇到支原體污染，應當怎么應對？2021/12/20

細胞培養(yǎng)物被支原體污染是極普遍的問題，面對支原體污染給細胞培養(yǎng)帶來的巨大難題，世界各國開始重視，并相繼建立了細胞庫，對細胞質量進展控制，支原體污染的問題得以限制。目前已知能污染細胞的支原體有20多種以上，其中95％以上的支原體污染是口腔支原體。目前已知的主要污染源是動物血清、胰酶和已污染培養(yǎng)物的氣溶膠，例如，豬鼻支原體通過胰酶，在消化細胞時進入細胞培養(yǎng)物，并造成污染。在原代細胞與傳代細胞的檢測中，原代細胞與傳代細胞分離出支原體的頻率是有明顯差異的，傳代次數越多的細胞，污染支原體的可能性就越大，這

碳吸附胎牛血清的特點和作用2021/12/17

碳吸附型血清是一款低水平類固醇類的血清產品，通過碳吸附可降低血清中許多激素及生長因子的濃度，如雌二醇、皮質醇、皮質酮、B類維生素、T3、T4、前列腺素等，該血清適用于上述一些分子可能干擾實驗結果的實驗中對于那些需要這些分子的細胞培養(yǎng)，可能降低細胞生長性能。【產品特性】1、內毒素含量低，三次納米級過濾2、嚴格控制批次差異3、來源可靠、可溯源4、每個批次提供相應檢驗檢疫報告5、適合各種常規(guī)細胞培養(yǎng)6、干冰運輸，建議存儲溫度為-20℃至-10℃血清是由血漿去除纖維蛋白原而形成的一種很復雜的混合物，其組

細胞生長緩慢有哪些影響因素？2021/12/16

細胞生長緩慢是實驗人員在培養(yǎng)細胞時常遇見的問題，那么究竟是哪些因素影響？又如何改善呢？一.個別人的培養(yǎng)體系出現問題1.檢查你所培養(yǎng)的細胞是否存在污染。（a）如果培養(yǎng)細胞未添加抗生素(必須添加!),細胞污染則是不可避免的。1）用肉眼和顯微鏡進行檢查2）如果細胞被污染則要棄掉。（b）由于支原體污染不容易覺察到，因此必須定期檢測（c）檢測可能污染的途徑和原因2.檢查你用于培養(yǎng)細胞的培養(yǎng)基和血清(例如:是否批次不同或廠商不同)。如果你常規(guī)使用的是粉劑或10X儲存液，而現在購買的培養(yǎng)基更換為1X液體，而隨

培養(yǎng)細胞的時候出現黑膠蟲污染怎么辦？2021/12/15

“黑膠蟲”可寄生于動物細胞，也可以生存于培養(yǎng)基中，依靠細胞和培養(yǎng)基中的營養(yǎng)為生，并隨細胞傳代而傳代。可見“黑膠蟲”是一種異養(yǎng)生物。我們在細胞培養(yǎng)中出現黑膠蟲后污染怎么辦？下面有幾個處理建議，我們一起來了解下吧！1．換好一點的血清，這樣可以有效減少“小黑點”的形成。一般的血清都不要去滅活處理，為什么呢？因為經過正確處理的熱滅活血清，對大多數的細胞而言是不需要的。經此處理過的血清對細胞的生長只有微小的促進，或*沒有任何作用，甚至通常因為高溫處理影響了血清的質量，而造成細胞生長速率的降低。而經過熱滅活

雙抗和胰酶的使用方法2021/12/14

雙抗一、什么是雙抗？青霉素加上鏈霉素，俗稱“雙抗”。二、培養(yǎng)液中需要加入雙抗嗎？加不加雙抗不是絕對的，視實際情況而定。如果你實驗室條件足夠好，如果你操作足夠規(guī)范，就盡量不要加雙抗了。相反，如果你實驗條件不夠，操作也沒有絕對把握，還是加的好。好的方法是做個實驗對照，看有沒有必要加雙抗。三、如何加雙抗？加在DMEM里，因為如果是直接在換液傳代滴加的話，那個雙抗的濃度實在不好控制，如果加多了話對細胞毒性太大，如果擔心時效，可以Z在培養(yǎng)液配好后分裝于100ml的小玻璃瓶中，在每啟用一瓶之前加，加了之后應