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細(xì)胞復(fù)蘇實驗操作步驟，你了解嗎？2022/06/17

細(xì)胞復(fù)蘇的原則：慢凍速融，必須將凍存在-196℃液氮中的細(xì)胞快速融化至37℃，使細(xì)胞外凍存時的冰晶迅速融化，避免冰晶緩慢融化時進入細(xì)胞形成再結(jié)晶，對細(xì)胞造成損害。復(fù)蘇步驟一.實驗前準(zhǔn)備：將水浴鍋預(yù)熱至37℃。細(xì)胞實驗室進行常規(guī)消毒，用75％酒精擦拭并且使用紫外線照射40min的超凈工作臺臺面。在超凈工作臺中按次序擺放好消過毒的離心管、吸管、培養(yǎng)瓶等。二．取出凍存管：根據(jù)細(xì)胞凍存記錄按標(biāo)簽找到所需細(xì)胞的編號。從液氮罐中取出細(xì)胞盒，取出所需的細(xì)胞，同時核對管外的編號。三．迅速解凍：迅速將凍存管投入到

貼壁細(xì)胞總有部分圓形或者漂浮的是正常情況嗎？2022/06/16

大部分貼壁細(xì)胞培養(yǎng)時都會有一些圓形透亮的細(xì)胞存在，也會有一些圓形細(xì)胞脫落懸浮的情況存在，這種主要是一些新增殖的細(xì)胞或由于局部空間不足被擠出的細(xì)胞，只要細(xì)胞持續(xù)增殖，都會有一些圓形細(xì)胞或脫落漂浮細(xì)胞，不影響細(xì)胞整體增殖和實驗，保持正常換液、傳代周期即可。細(xì)胞具體情況也可以參考細(xì)胞庫不同細(xì)胞照片比對，大部分貼壁細(xì)胞都會有圓形細(xì)胞、脫落細(xì)胞、細(xì)胞內(nèi)顆粒等情況。如何消除組織培養(yǎng)的污染？當(dāng)重要的培養(yǎng)污染時，研究者可能試圖消除或控制污染。首先，確定污染物是細(xì)菌、真菌、支原體或酵母，把污染細(xì)胞與其它細(xì)胞系隔離

細(xì)胞長得慢是什么情況？2022/06/15

細(xì)胞生長緩慢的常見原因:(1)培養(yǎng)基可能缺乏細(xì)胞生長所需的某種因子。通常情況下，當(dāng)小伙伴購買細(xì)胞，并沒有按照ATCC或國內(nèi)細(xì)胞庫推薦的方法制備培養(yǎng)基，使用實驗室兄弟姐妹使用的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。解決方法一般是按照推薦的方法制備培養(yǎng)基，或直接購買培養(yǎng)細(xì)胞的培養(yǎng)基。(2)細(xì)菌、支原體、真菌等污染:雖然培養(yǎng)基中通常添加雙抗體(青霉素和鏈霉素)，但如果無菌操作觀念不強，仍有可能造成污染。處理方法:如果有冷凍細(xì)胞，可以丟棄污染細(xì)胞。當(dāng)然，丟棄并不是隨意的，扔進垃圾桶。應(yīng)按照實驗室生物安全規(guī)定進行。然后復(fù)蘇培

關(guān)于巨噬細(xì)胞你了解多少？2022/06/14

巨噬細(xì)胞是先天免疫系統(tǒng)的一種特殊的、長壽命的吞噬細(xì)胞。巨噬細(xì)胞是三種吞噬細(xì)胞類型之一，還有粒細(xì)胞（中性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞）和樹突狀細(xì)胞（DCs）。大多數(shù)病原體通過呼吸道、腸粘膜、皮膚病變或泌尿生殖道進入宿，NOI個遇到的就是在粘膜下組織中的巨噬細(xì)胞，它們通常是NOI個遇到病原體的防御細(xì)胞。一旦微生物進入宿主并開始復(fù)制，它就被其中一種吞噬細(xì)胞所識別，并被吞噬形成吞噬溶酶體，然后再經(jīng)過酸化和酶處理，產(chǎn)生高活性一氧化氮和超氧自由基來殺死病原體，這一過程稱為吞噬作用。一般來說，巨噬細(xì)胞可

細(xì)胞培養(yǎng)基常見成分及作用功能介紹2022/06/10

能量來源每一個生長培養(yǎng)基都需要碳源，以供細(xì)胞新陳代謝。碳源通常是葡萄糖，但也可以是其他糖類，如半乳糖、己糖、果糖或其他碳源(如丙酮酸，谷氨酰胺)。葡萄糖通常以終濃度為5.5mM的含量添加，大約等于人體血液中的葡萄糖水平。然而，你可以購買葡萄糖濃度變化范圍很廣的培養(yǎng)基來滿足你的具體需求。你甚至可以購買不含葡萄糖的培養(yǎng)基，然后自己定制濃度，模擬高糖的糖尿病狀況，或者研究低糖應(yīng)激反應(yīng)。緩沖液細(xì)胞需要一種特殊的pH值從7.2到7.4，否則它們無法最好地發(fā)揮細(xì)胞功能，以供生長和存活。在二氧化碳含量較高的培

細(xì)胞培養(yǎng)時培養(yǎng)液出現(xiàn)渾濁的原因2022/06/09

可能原因：1細(xì)胞崩解了；2培養(yǎng)基可能污染了，取部分培養(yǎng)基進行檢菌試驗細(xì)胞培養(yǎng)中常見的生物污染類型有7種,分別是細(xì)菌污染、支原體污染、原蟲污染、黑膠蟲污染、真菌污染、病毒污染以及非細(xì)胞污染.他們在細(xì)胞培養(yǎng)中污染的特點如下：1、細(xì)菌：細(xì)菌在普通倒置顯微鏡下為黑色細(xì)沙狀,根據(jù)感染細(xì)菌的不同,可有不同的外形,培養(yǎng)液一般會渾濁變黃,對細(xì)胞生長影響明顯.2、支原體：黑色的,好象多為多形,培養(yǎng)液一般培養(yǎng)液一般會渾濁,原體感染,國內(nèi)血清很多都沒有做支原體陰性檢測,而支原體是牛血清中最常見的微生物之一.而且它不能

細(xì)胞培養(yǎng)中抗生素如何使用？2022/06/08

1.細(xì)胞庫之細(xì)胞培養(yǎng)基不加抗生素1.1.培養(yǎng)自ATCC引進之細(xì)胞株，培養(yǎng)基中不加抗生素1.2.培養(yǎng)自其它實驗室引進之細(xì)胞株，制作tokenfreeze前培養(yǎng)基須添加抗生素，待tokenfreeze通過污染測試后，大量培養(yǎng)時則不加抗生素。2.寄送活細(xì)胞時，須將培養(yǎng)液充滿整個flask時，則須添加抗生素(penicillin100units/ml+streptomycin100ug/ml)。3.若要檢測mycoplasma，則培養(yǎng)基內(nèi)不可添加gentamicin，因gentamicin會抑制myco

ELISA檢測血清的詳細(xì)事項2022/06/07

大部分elisa檢測均以血清為標(biāo)本。血清標(biāo)本可按慣例方法收集，應(yīng)留意防止溶血，紅細(xì)胞溶解時會釋放出具有過氧化物酶活性的物質(zhì)，以HRP為符號的ELISA測定中，溶血標(biāo)本可能會添加非特異性顯色。血清標(biāo)本宜在新鮮時檢測。如有細(xì)菌污染，菌體中可能含有內(nèi)源性HRP，也會發(fā)生假陽性反應(yīng)。一般說來，在5天內(nèi)測定的血清標(biāo)本可放置于4℃。超越一周測定的需-20℃保存。凍住血清融解后，蛋白質(zhì)局部濃縮，散布不均，應(yīng)充沛混勻并防止發(fā)生氣泡。混濁或有沉積的血清標(biāo)本應(yīng)先離心或過濾，弄清后再檢測。重復(fù)凍融會使抗體效價下跌，所

培養(yǎng)間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)基你選對了嗎？2022/06/06

干細(xì)胞治療也被稱為再生醫(yī)學(xué)，是指利用干細(xì)胞及其衍生物來促進受損、病變或功能喪失的組織進行修復(fù)。如今，許多白血病等患者已經(jīng)受益于干細(xì)胞治療。未來，骨關(guān)節(jié)炎、腦癱、心臟衰竭、多發(fā)性硬化癥、甚至是聽力損失等都有望受益。干細(xì)胞治療處在生命科學(xué)的前沿，將會引起一場新的醫(yī)學(xué)革命?！?0至20年后，干細(xì)胞將會成為一種基本的治療技術(shù)，幫助人們解決現(xiàn)在無法克服的疾病”，很多患者認(rèn)為10年至20年太長，希望干細(xì)胞能夠早日幫助人類克服疾病帶來的痛苦。干細(xì)胞研究發(fā)展勢頭猛，間充質(zhì)干細(xì)胞成主流如今，全球干細(xì)胞治療市場已經(jīng)

PBS清洗的注意事項2022/06/02

（1）單獨沖洗，防止交叉反應(yīng)造成污染。臨床上每天檢測的病例很多，所用的抗體種類及項目也多，如果在加入一抗孵育完后，將它們在一個缸內(nèi)洗，這樣就會造成交叉污染，影響最后的結(jié)果。正確的做法是單獨地進行沖洗，沖洗的PBS為一次性，保證切片沒有相互交叉污染的機會。（2）溫柔沖洗，防止切片的脫落。沖洗切片，取出切片，將PBS從上輕輕地沖洗，讓PBS自上而下流下來，不要拿起切片將PBS對準(zhǔn)切片沖洗，這樣由于沖出的PBS有一定的沖擊力，很容易使切片周邊引起松動，導(dǎo)致切片的脫落。（3）沖洗的時間要足夠，才能*洗去

細(xì)胞復(fù)蘇的小常識2022/03/28

必須將凍存在-196℃液氮中的細(xì)胞快速融化至37℃，使細(xì)胞外凍存時的冰晶迅速融化，避免冰晶緩慢融化時進入細(xì)胞形成再結(jié)晶，對細(xì)胞造成損害。細(xì)胞復(fù)蘇步驟一.實驗前準(zhǔn)備：將水浴鍋預(yù)熱至37℃。細(xì)胞實驗室進行常規(guī)消毒，用75％酒精擦拭并且使用紫外線照射40min的超凈工作臺臺面。在超凈工作臺中按次序擺放好消過毒的離心管、吸管、培養(yǎng)瓶等。二．取出凍存管：根據(jù)細(xì)胞凍存記錄按標(biāo)簽找到所需細(xì)胞的編號。從液氮罐中取出細(xì)胞盒，取出所需的細(xì)胞，同時核對管外的編號。三．迅速解凍：迅速將凍存管投入到已經(jīng)預(yù)熱的水浴鍋中解凍

牛血清白蛋白(BSA)在生化實驗中的用處！2022/03/25

牛血清白蛋白（BSA），是牛血清中的一種球蛋白，包含607個氨基酸殘基，分子量為66.446KDa，等電點為4.7。牛血清白蛋白在生化實驗中有廣泛的應(yīng)用。主要成分：1.蛋白質(zhì)——是牛血清中主要成份。除包括可攜帶金屬離子、脂肪酸和自身是激素類蛋白外主要還有白蛋白，球蛋白。2.多肽——血小板促生長因子能促細(xì)胞分裂，是多肽家庭的主要成員之一，是主要的促細(xì)胞增殖因子；成纖維細(xì)胞生長因子、表皮細(xì)胞生長因子、神經(jīng)細(xì)胞生長因子等，血清中含量雖很少，但對細(xì)胞生長也有一定作用。3.激素——胰島素：促進細(xì)胞攝取葡萄

原代細(xì)胞的提取方法詳細(xì)步驟2022/03/24

原代細(xì)胞是通過一定的方法如酶法或機械法或生長法使細(xì)胞從人體和動物的母體器官、組織或液體中分離出來，并在受控環(huán)境條件下分離的細(xì)胞在體外或其他人體和動物體內(nèi)生長。原代細(xì)胞的提取方法詳細(xì)步驟：1)整個操作要在潔凈通風(fēng)的超凈臺下進行，所有的器材要高壓消毒。2)根據(jù)BALB/c小鼠的體重，用10ml/kg3%濃度的戊ba比妥鈉麻醉；將小鼠置于盛有75%乙醇的燒杯內(nèi)，這一步不僅可以消毒，也可以讓小鼠體毛浸濕，后續(xù)剃去皮毛的時候不會沾到剪刀或組織上。3)用鑷子輕輕挑起小鼠的心臟，裝有PBS的注射器插入心尖，同

細(xì)胞不貼壁、生長緩慢甚至死亡分析與解決！2022/03/18

在細(xì)胞培養(yǎng)過程中會出現(xiàn)這樣或那樣的問題，這些問題從細(xì)胞生長角度來說，針對細(xì)胞不貼壁、生長緩慢、生長不好，甚至死亡的原因，我們做以下分析并提出相對應(yīng)的解決方法。一、培養(yǎng)細(xì)胞不貼壁可能原因：胰蛋白酶消化過度；支原體污染；培養(yǎng)基pH值過堿（NaHCO3分解）；細(xì)胞老化；接種細(xì)胞起始濃度太低或太高。解決方法：縮短胰蛋白酶消化時間或降低胰蛋白酶濃度；分離培養(yǎng)物，檢測支原體。清潔支架或培養(yǎng)箱。如發(fā)現(xiàn)支原體污染，丟棄培養(yǎng)物；使用無菌醋酸溶液調(diào)整pH值或充入無菌CO2；啟用新的保種細(xì)胞；調(diào)節(jié)最佳接種細(xì)胞濃度。二

細(xì)胞培養(yǎng)實驗為啥血清這么重要？2022/03/17

血清被廣泛應(yīng)用于細(xì)胞培養(yǎng)達幾十年之久。動物血清主要包括胎牛血清、小牛血清、成牛血清、馬血清、羊血清、雞血清、兔血清等，其中以胎牛血清的使用z為普遍。動物血清在細(xì)胞培養(yǎng)中提供細(xì)胞增殖所需的生長因子、激素、轉(zhuǎn)移蛋白、貼壁和鋪展在培養(yǎng)基質(zhì)上的因子、蛋白酶抑制劑和其他營養(yǎng)物質(zhì)。使用血清的優(yōu)點是血清含有促進細(xì)胞增殖和維持的大部分因子，它幾乎是通用的生長添加物，適用于動物、人和昆蟲細(xì)胞等的細(xì)胞培養(yǎng)。因而使用血清不需要為每一個細(xì)胞系優(yōu)化培養(yǎng)基，節(jié)省了大量時間和精力。牛血清是細(xì)胞培養(yǎng)中用量大的天然培養(yǎng)基，含有豐

凍存細(xì)胞時，有必要緩凍嗎？2022/03/11

一、我們先來說說何為緩凍：緩凍即為凍存細(xì)胞時，要程序降溫——4℃30min，-20℃1h，-80℃過夜，次日投入液氮內(nèi)。二、那為什么要進行緩凍呢？其實所謂的緩凍是一般使用傳統(tǒng)凍存液凍存過程中需要程序降溫。傳統(tǒng)的凍存液，一般由胎牛血清、DMSO及基礎(chǔ)培養(yǎng)基等組分組成。凍存保護的DMSO組分，在進入細(xì)胞后結(jié)合細(xì)胞內(nèi)部的水份，降低冰點，防止細(xì)胞在冷凍過程中形成冰晶對細(xì)胞造成損害。但是DMSO只能在細(xì)胞內(nèi)部保護細(xì)胞，細(xì)胞外部沒有保護，水結(jié)冰晶會在細(xì)胞膜外部受到損傷，為了防止冰晶過大，使用時必須采用程序降

血清的用途與分類2022/03/10

1、透析血清分子量小于10,000的分子如氨基酸、葡萄糖、鹽離子和未結(jié)合的蛋白均被移除。透析血清主要用在進行營養(yǎng)成分優(yōu)化和標(biāo)定特定成分進行研究的實驗中。2、碳吸附血清使用活性和右旋糖苷去除血清中的親脂類(lipophilic)物質(zhì)，如某些激素、細(xì)胞因子、生長因子等，去除作用對分子量大小并無區(qū)分。碳吸附胎牛血清常用于體外培養(yǎng)研究驗證激素的作用效果。3、去外泌體血清適用于收集細(xì)胞分泌的外泌體時使用。4、低IgG血清用于研究抗體、病毒和病毒反應(yīng)、細(xì)胞表面抗原表位。5、四環(huán)素血清應(yīng)用于使用敏感四環(huán)素誘導(dǎo)

牛血清實驗中常見的問題解析！2022/03/09

胎牛血清通常在細(xì)胞培養(yǎng)中作為基礎(chǔ)生長培養(yǎng)基的添加劑，在細(xì)胞培養(yǎng)中，血清供應(yīng)了豐富的高分子蛋白，低分子量營養(yǎng)物，疏水載體蛋白和其他體外細(xì)胞生長必要的成分如激素和粘附因子。同時，胎牛血清可以增加培養(yǎng)基的緩沖能力或中和有毒成分，起到保護細(xì)胞的作用。在細(xì)胞培養(yǎng)過程中是否選擇添加血清，主要根據(jù)基礎(chǔ)培養(yǎng)基化學(xué)成分，培養(yǎng)細(xì)胞的類型和培養(yǎng)體系而定。血清實驗中常見的問題解析：一、如何儲存和解凍血清才不會使產(chǎn)品質(zhì)量受損？將血清從冷凍箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室溫下使之全融。但必須注意的是，融解過程

血清的這些常識你知道嗎？2022/03/08

牛血清是細(xì)胞培養(yǎng)中用量大的天然培養(yǎng)基，含有豐富的細(xì)胞生長必須的營養(yǎng)成份，常用于動物細(xì)胞的體外培養(yǎng)，具有極為重要的功能。一、血清的成分血清是由血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復(fù)雜的混合物，其組成成份雖大部分已知，但還有一部分尚不清楚，且血清組成及含量常隨供血動物的性別、年齡、生理條件和營養(yǎng)條件不同而異。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長因子、激素、無機物等，這些物質(zhì)對促進細(xì)胞生長或抑制生長活性是達到生理平衡的。二、血清的功能1.提供對維持細(xì)胞指數(shù)生長的激素，基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒有或量很少

細(xì)胞培養(yǎng)基的種類與基本成分2022/03/07

細(xì)胞培養(yǎng)基是人工模擬細(xì)胞在體內(nèi)生長的營養(yǎng)環(huán)境，是提供細(xì)胞營養(yǎng)和促進細(xì)胞生長增殖的物質(zhì)基礎(chǔ)。培養(yǎng)液或培養(yǎng)基的含義幾乎相同，英文都是medium。當(dāng)它是粉劑時，傾向性地稱為培養(yǎng)基，而將粉劑配成液體后，多稱為培養(yǎng)液。培養(yǎng)液中常常補加血清、抗生素等成分。由于各類微生物對營養(yǎng)的要求不同，培養(yǎng)目的和檢測需要不同，因而培養(yǎng)基的種類很多。我們可根據(jù)某種標(biāo)準(zhǔn)，將種類繁多的培養(yǎng)基劃分為若干類型。一、根據(jù)對培養(yǎng)基組成物質(zhì)的化學(xué)成分是否*了解來區(qū)分，可以將培養(yǎng)基分為：天然培養(yǎng)基、合成培養(yǎng)基和半合成培養(yǎng)基。1、天然培養(yǎng)基