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無血清培養(yǎng)基的組成和作用介紹2023/06/20: 在細(xì)胞培養(yǎng)中大多數(shù)動(dòng)物細(xì)胞體外培養(yǎng)時(shí)都需要加入血清提供營養(yǎng)，但由于血清存在很多潛在風(fēng)險(xiǎn)，促使科學(xué)家們進(jìn)行無血清馴化細(xì)胞的研究。所以，在1976年Hayashi等人提出了無血清培養(yǎng)基的概念，此后，大量生物醫(yī)藥學(xué)家開始對無血清培養(yǎng)基進(jìn)行研制。80年代后，無血清培養(yǎng)基的研究與制備廣泛發(fā)展，到90年代已有一些商業(yè)化無血清培養(yǎng)基。與傳統(tǒng)的培養(yǎng)基相比較，無血清培養(yǎng)基是不含動(dòng)物血清，但仍可以維持細(xì)胞在體外較長時(shí)間生長、增殖的一種培養(yǎng)基。無血清培養(yǎng)基由于其組成成分相對清楚，制備過程簡單，在現(xiàn)代生物技術(shù)學(xué)領(lǐng)域得到

成纖維細(xì)胞的培養(yǎng)方法分享2023/06/12: 分離培養(yǎng)成纖維細(xì)胞的分離培養(yǎng)一開始并不涉及成骨作用，而主要是用于研究細(xì)胞的老化、各種外來因子對細(xì)胞的損傷、細(xì)胞在體外條件下的惡性轉(zhuǎn)化、以及某些先天性代謝異常、酶缺陷等。由于皮膚成纖維細(xì)胞易于獲取，又易于在體外生長，皮膚成纖維細(xì)胞培養(yǎng)已在基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)和臨床醫(yī)學(xué)研究中得到較廣泛的運(yùn)用，其分離培養(yǎng)技術(shù)已相對成熟，對其體外生長規(guī)律也有了較全面的認(rèn)識。原代培養(yǎng)成纖維細(xì)胞的原代培養(yǎng)可用酶消化法或組織塊法，其中組織塊法又因其操作簡便、條件易于控制而應(yīng)用更為普遍。通常，以酶消化法獲得的成纖維細(xì)胞懸液在接種后5～10

幾種原代細(xì)胞傳代方法2023/06/05: 原代細(xì)胞是指從機(jī)體的組織（如人組織、小鼠組織、大鼠組織和兔組織等）經(jīng)蛋白酶或其它的方法獲得單個(gè)細(xì)胞并在體外進(jìn)行模擬機(jī)體培養(yǎng)的細(xì)胞，稱為原代細(xì)胞。一股認(rèn)為，培養(yǎng)的原代的第1代細(xì)胞和傳代到第10代以內(nèi)的細(xì)胞統(tǒng)稱為原代細(xì)抱培養(yǎng)。在人工條件下使其原代細(xì)胞生存、生長、繁殖和傳代，進(jìn)行細(xì)胞生命過程、細(xì)胞瘍變、細(xì)胞工程等問題的研究。那么關(guān)于原代細(xì)胞的傳代培養(yǎng)，我們應(yīng)該怎么做呢?一股有以下兩種方法：一、貼壁細(xì)胞的消化法傳代1、吸除或倒掉瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液。2、加入1ml左右消化液（胰蛋白鱷或與EDTA混合液）輕輕接動(dòng)

如何保證血清活性？2023/05/29: 常規(guī)儲存首先，剛到貨的血清，趁著它還凍手，趕緊放進(jìn)-20℃冰箱中，避免反復(fù)凍融。當(dāng)然，如果你的課題組不差錢，-80℃冰箱空間充足，把血清儲存進(jìn)去也是沒有問題的。如何解凍放4℃過夜直接在4℃冰箱里過夜融化的方法，雖然很多人在這么用，但還是有一些潛在的風(fēng)險(xiǎn)的。我們都知道，在血清這種混合物中，融化速度：蛋白質(zhì)等干物質(zhì)水這類溶劑，所以蛋白質(zhì)會先溶解析出，而水還是結(jié)成冰的狀態(tài)，導(dǎo)致瓶子中間會出現(xiàn)一根透明的冰柱，而周圍則會呈現(xiàn)上黃下紅的分層渾濁液的狀態(tài)，在使用過程中很容易引起沉淀、混合不均勻、局部濃度過高等

細(xì)胞轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)中常見問題2023/05/15: 一、轉(zhuǎn)染效率低影響轉(zhuǎn)染效率因素很多，主要因素有細(xì)胞培養(yǎng)物、血清、載體構(gòu)建、DNA質(zhì)量以及轉(zhuǎn)染技術(shù)等。1.沒有使用優(yōu)化條件：優(yōu)化陽離子脂質(zhì)體試劑和DNA的量。2.DNA-陽離子脂質(zhì)體試劑復(fù)合物在存在血清條件下形成。3.存在抑制劑：不要在用于制備DNA-陽離子脂質(zhì)體復(fù)合物的培養(yǎng)基中使用抗生素，EDTA，檸檬酸鹽，磷酸鹽，RPMI，硫酸軟骨素。透明質(zhì)酸，硫酸葡聚糖或其他硫酸蛋白多糖。4.不恰當(dāng)?shù)募?xì)胞密度：轉(zhuǎn)染時(shí)融合度應(yīng)為70%-90%。5.陽離子脂質(zhì)體試劑凍結(jié)：不要使用凍結(jié)的或儲存溫度低于4℃的陽離子

血清的具體實(shí)驗(yàn)作用你了解多少？2023/05/08: ①有些情況下結(jié)合蛋白質(zhì)能與有毒金屬和熱原質(zhì)結(jié)合，起到解毒作用。②是細(xì)胞貼壁、鋪展在塑料培養(yǎng)基質(zhì)上所需因子來源。③提供結(jié)合蛋白，能識別維生素、脂類、金屬和其他激素等，能結(jié)合或調(diào)變它們所結(jié)合的物質(zhì)活力。④起酸堿度緩沖液作用。⑤提供蛋白酶抑制劑，使在細(xì)胞傳代時(shí)使剩余胰蛋白酶失活，保護(hù)細(xì)胞不受傷害。⑥提供對維持細(xì)胞指數(shù)生長的激素，基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒有或量很少的營養(yǎng)物，以及主要的低分子營養(yǎng)物。血清性狀、外觀：淺黃色澄清、無溶血、無異物稍粘稠液體。血清指血液凝固后，在血漿中除去纖維蛋白分離出的淡黃色透明液體或指

干細(xì)胞外泌體知多少？2023/04/24: 2013年諾貝爾獎(jiǎng)中，美國科學(xué)家詹姆斯·羅斯曼等三人發(fā)現(xiàn)了細(xì)胞的囊泡運(yùn)輸調(diào)控機(jī)制，外泌體是囊泡的其中一種。外泌體(exosomes)是一種能被機(jī)體內(nèi)大多數(shù)細(xì)胞分泌的微小膜泡，具有脂質(zhì)雙層膜結(jié)構(gòu)，直徑大約為30-150nm(頭發(fā)絲的1/1000)。外泌體廣泛存在并分布于各種體液中，攜帶和傳遞重要的信號分子，形成了一種全新的細(xì)胞-細(xì)胞間信息傳遞系統(tǒng)，影響細(xì)胞的生理狀態(tài)并與多種疾病的發(fā)生與進(jìn)程密切相關(guān)。其主要來源于細(xì)胞內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體，經(jīng)多囊泡體外膜與細(xì)胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中。干細(xì)胞

DMEM高糖、DMEM低糖、DMEM/F-12培養(yǎng)基到底啥差別？2023/04/18: DMEM高糖培養(yǎng)基DMEM高糖培養(yǎng)基是在MEM培養(yǎng)基基礎(chǔ)上改良而來，目前已廣泛應(yīng)用于各種細(xì)胞的培養(yǎng)。DMEM高糖培養(yǎng)基普遍應(yīng)用于生長快、粘附性低的細(xì)胞。可用于多種哺乳動(dòng)物原代細(xì)胞的培養(yǎng)，例如原代成纖維細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞、HUVEC、平滑肌細(xì)胞等，也可以用于一些細(xì)胞系的培養(yǎng)，例如Hela、293、Cos-7及PC-12等。DMEM低糖培養(yǎng)基DMEM低糖培養(yǎng)基是一種應(yīng)用十分廣泛的培養(yǎng)基，可用于許多哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)。DMEM低糖培養(yǎng)基適合代謝作用慢、依賴性貼壁細(xì)胞的培養(yǎng)。DMEM/F-12培

原代細(xì)胞與細(xì)胞系怎么選擇？2023/04/11: 原代細(xì)胞生長緩慢，一般認(rèn)為，原代細(xì)胞培養(yǎng)的第1代和傳代到第10代以內(nèi)統(tǒng)稱為原代培養(yǎng)。原代培養(yǎng)的細(xì)胞一般傳至10代左右就不容易傳下去了，細(xì)胞的生長會出現(xiàn)停滯，大部分細(xì)胞衰老死亡。但是有極少數(shù)的細(xì)胞能夠度過“危機(jī)”而繼續(xù)傳下去，這些存活的細(xì)胞一般能夠傳到40-50代，這種傳代細(xì)胞叫做細(xì)胞株。當(dāng)細(xì)胞傳至50代以后又會出現(xiàn)“危機(jī)”，這時(shí)有部分細(xì)胞的遺傳物質(zhì)發(fā)生了改變且?guī)в邪┳兊奶攸c(diǎn)，從而可能無限制地傳代下去，這種傳代細(xì)胞稱為細(xì)胞系。細(xì)胞系因其容易培養(yǎng)、種類多、產(chǎn)量可觀的優(yōu)點(diǎn)一直是細(xì)胞水平研究的Shou選

細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中培養(yǎng)液渾濁原因分析2023/04/04: 培養(yǎng)基變渾濁的原因可能有如下幾點(diǎn)：1、細(xì)胞存在污染，污染早期可以見到細(xì)胞生長；2、不排除傳代時(shí)細(xì)胞密度過大，或者操作不當(dāng)導(dǎo)致多數(shù)細(xì)胞不貼壁，大量細(xì)胞漂浮。3、細(xì)胞破碎。細(xì)胞培養(yǎng)中常見的生物污染類型有7種,分別是細(xì)菌污染、支原體污染、原蟲污染、黑膠蟲污染、真菌污染、病毒污染以及非細(xì)胞污染.他們在細(xì)胞培養(yǎng)中污染的特點(diǎn)如下：1、細(xì)菌：細(xì)菌在普通倒置顯微鏡下為黑色細(xì)沙狀,根據(jù)感染細(xì)菌的不同,可有不同的外形,培養(yǎng)液一般會渾濁變黃,對細(xì)胞生長影響明顯.2、支原體：黑色的,好象多為多形,培養(yǎng)液一般培養(yǎng)液一般會

在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中血清熱滅活的作用和意義2023/03/31: 一、血清滅活的目的是什么？1、血清熱滅活目的主要是為了去除血清中補(bǔ)體等對熱敏感的物質(zhì)，但是在胎牛血清中對補(bǔ)體的滅活則明顯沒有必要。2、實(shí)驗(yàn)員曾對商業(yè)胎牛血清中的補(bǔ)體成分進(jìn)行測定，他們發(fā)現(xiàn)胎牛血清中含有的C1、C6僅達(dá)成年動(dòng)物血清的1-3%，而其它補(bǔ)體成分僅有成年動(dòng)物的5-50%，至于補(bǔ)體的主要成分C3在胎牛血清中則幾乎不能檢出。通過補(bǔ)體固定實(shí)驗(yàn)，也未發(fā)現(xiàn)有明顯的溶血現(xiàn)象。多數(shù)實(shí)驗(yàn)室在培養(yǎng)前將培養(yǎng)液進(jìn)行預(yù)熱的過程，也對熱敏的補(bǔ)體有滅活的作用。3、熱滅活另一個(gè)目的是為了使支原體失活。二、血清使用前是

常規(guī)培養(yǎng)基的配制流程介紹2023/03/28: 1、計(jì)算稱量根據(jù)待檢樣品屬性計(jì)算出所需的不同培養(yǎng)基的體積，根據(jù)說明書進(jìn)行準(zhǔn)確稱量；電子天平需開機(jī)預(yù)熱30min后使用，稱量過程中手要穩(wěn)，避免將培養(yǎng)基灑落在天平稱量盤中，若灑落，應(yīng)立即停止稱量，使用潔凈布擦干粉末，重新調(diào)“0”后稱量。2、溶化對于可溶性淀粉,先用少量冷水調(diào)成糊狀,再放入沸水中；不易溶解的培養(yǎng)基，先加入少量純化水振搖溶解后，二次加水配制；需分裝的培養(yǎng)基，需溶解，含瓊脂的培養(yǎng)基需加熱融化，溶解后，分裝至不同容器中進(jìn)行滅菌。3、分裝如果要制作斜面培養(yǎng)基，須將培養(yǎng)基分裝于試管中。如果要制作

ECL化學(xué)化學(xué)發(fā)光底物（超敏）的操作步驟2023/03/22: ECL化學(xué)化學(xué)發(fā)光底物（超敏）可為使用辣根過氧化物酶（HRP）偶聯(lián)物的免疫印跡實(shí)驗(yàn)提供明亮的信號和低皮克級檢測靈敏度。該ECL底物能夠兼容各種膜、封閉液和寬范圍抗體稀釋液，以出色性能、通用性和高性價(jià)比，滿足用戶的免疫印跡應(yīng)用需求。操作步驟：1、執(zhí)行常規(guī)SDS-PAGE、轉(zhuǎn)模和WesternBlot步驟。注意用HRP標(biāo)記lgG或用一抗-鏈親和素-生物素-HRP夾法。2、WesternBlot最后一次洗模的同時(shí)配置發(fā)光工作液：分別取等體積的A液和B液，放入干凈容器中混合（注意吸取A液和B液的吸頭一定

什么是牛血清白蛋白？2023/03/20: 牛血清白蛋白（BSA）是牛血清中的一種球蛋白，包含607個(gè)氨基酸殘基，分子量為66.446KDa，等電點(diǎn)為4.7。應(yīng)用：牛血清白蛋白（BSA）在生化實(shí)驗(yàn)中有廣泛的應(yīng)用，例如在WB實(shí)驗(yàn)中加入BSA，通過提高溶液中蛋白質(zhì)的濃度，對酶起保護(hù)作用。防止酶的分解和非特異性吸附，能減輕有些酶的變性減輕不利環(huán)境因素，如加熱、表面張力及化學(xué)因素引起的變性。測定蛋白濃度按50：1配置BCA工作液。10ulC液（蛋白標(biāo)準(zhǔn)）+90ulPBS液稀釋成0.5mg/ml的蛋白標(biāo)準(zhǔn)液。再分別以0、1、2、4、8、12、16、

細(xì)胞培養(yǎng)基需要更換哪些指標(biāo)呢？2023/03/15: 無論是原代培養(yǎng)還是細(xì)胞系的傳代培養(yǎng)，一旦培養(yǎng)開始，就要定期更換或補(bǔ)充培養(yǎng)基。如果細(xì)胞持續(xù)增殖，隨后遲早要進(jìn)行傳代培養(yǎng)。對干不增殖的培養(yǎng)物，也需要定期更換培養(yǎng)基，因?yàn)榧?xì)胞仍會代謝，培養(yǎng)基的某些成分會耗盡或自然降解，產(chǎn)生的代謝廢物也需要通過換液去除。細(xì)胞傳代間隔在不同細(xì)胞系中因生長速率和新陳代謝的不同而不同?？焖偕L的轉(zhuǎn)化細(xì)胞系，如HeLa細(xì)胞系，通常每周傳代一次，四天后換液。生長緩慢的細(xì)胞系，特別是非轉(zhuǎn)化的細(xì)胞系，可能每兩周、三周甚至四周傳代一次，兩次傳代之間每周換液。有四個(gè)指標(biāo)表示需要更換培養(yǎng)基

動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)4大常用合成培養(yǎng)基2023/03/07: 體外培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞已經(jīng)有近百年的歷史，但該技術(shù)真正得以廣泛應(yīng)用及各種類型組織細(xì)胞大量體外培養(yǎng)成功是由于適合細(xì)胞體外生長需要的合成培養(yǎng)基的問世。合成培養(yǎng)基是對細(xì)胞體內(nèi)生存環(huán)境中各種已知物質(zhì)在體外人工條件下的模擬。這種模擬不是被動(dòng)的、不加選擇的，而是在體外反復(fù)實(shí)驗(yàn)和篩選，進(jìn)行強(qiáng)化和重新組合后形成的人工合成培養(yǎng)基。合成培養(yǎng)基種類很多，據(jù)報(bào)道已有數(shù)十種，每種合成培養(yǎng)基最初都是為培養(yǎng)某種細(xì)胞而設(shè)計(jì)的，但應(yīng)用后發(fā)現(xiàn)其他細(xì)胞也可以生長或經(jīng)改良也適合其他細(xì)胞的生長。01.199培養(yǎng)基199培養(yǎng)基是Morgan、M

pH緩沖液的使用方法和配制保存2023/03/02: pH緩沖液是確保pH測量值精確的重要因素。標(biāo)準(zhǔn)緩沖液用于校準(zhǔn)pH傳感器和檢查其性能。pH緩沖液的緩沖能力是其重要的屬性。即使將外部物質(zhì)加入緩沖液中，這一屬性仍可使pH緩沖液保持恒定的pH值。pH緩沖液使用方法：首先取少量校正液潤洗小量杯，然后加入適量校正液（液面高度沒過電極的感應(yīng)探頭即可）。按照電子pH測試筆使用說明書進(jìn)行校正。由于校正液是高精密的液體，是電子ph測試筆精確度的保障，因此用過的校正液不能再倒回瓶中，以免影響校正液精度，帶入細(xì)菌等，造成校正液無法繼續(xù)使用。pH緩沖液的配制及其保存：

酪蛋白的作用2023/02/27: 酪蛋白是哺乳動(dòng)物包括母牛，羊和人奶中的主要蛋白質(zhì)，又稱：干酪素、酪朊、乳酪素。α-酪蛋白是哺乳動(dòng)物的主要蛋白，人乳中沒有α-酪蛋白，以β-酪蛋白為主要酪蛋白形式。酪蛋白對幼兒既是氨基酸的來源，也是鈣和磷的來源，酪蛋白在胃中形成凝乳以便消化。作用：酸酪蛋白主要用作涂料的基料，木、紙和布的粘合劑，食品用添加劑等。作為涂料的基料約占總消費(fèi)的一半，具有優(yōu)良的耐水性，在顏料中能很好地分散，提高涂料的均勻性。此外，因流動(dòng)性好，易于涂裝施工，粗制凝乳酶蛋白主要用于制造塑料鈕扣。酪蛋白鈕扣與其他樹脂鈕扣相比，染

影響細(xì)胞培養(yǎng)的有哪些因素？2023/02/23: 環(huán)境因素1．無菌環(huán)境無毒和無菌是體外培養(yǎng)細(xì)胞的首要條件。細(xì)胞在活體內(nèi)，解毒系統(tǒng)和免疫系統(tǒng)可抵抗微生物或其他有害物質(zhì)的入侵，但細(xì)胞在體外培養(yǎng)的過程中，缺乏機(jī)體免疫系統(tǒng)的保護(hù)而喪失對微生物的防御能力和對有害物質(zhì)的解毒能力。為保證細(xì)胞能在體外環(huán)境中生長繁殖，必須要確保無菌工作區(qū)域、良好的個(gè)人衛(wèi)生、無菌試劑和培養(yǎng)基以及無菌操作。常見的微生物污染有支原體、細(xì)菌、真菌。支原體無致死毒性，可與細(xì)胞長期共存，對細(xì)胞有潛在影響，但體積小，不易鑒別，可借助于地衣紅或Hoechst33342染色來進(jìn)行檢測。細(xì)菌增殖快

細(xì)胞培養(yǎng)可以分哪幾類？2023/02/21: 細(xì)胞培養(yǎng)（cellculture）是指在體外模擬體內(nèi)環(huán)境（無菌、適宜溫度、酸堿度和一定營養(yǎng)條件等），使之生存、生長、繁殖并維持主要結(jié)構(gòu)和功能的一種方法。細(xì)胞培養(yǎng)也叫細(xì)胞克隆技術(shù)，在生物學(xué)中的正規(guī)名詞為細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)。不論對于整個(gè)生物工程技術(shù)，還是其中之一的生物克隆技術(shù)來說，細(xì)胞培養(yǎng)都是一個(gè)bi不可少的過程，細(xì)胞培養(yǎng)本身就是細(xì)胞的大規(guī)?？寺?。細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)可以由一個(gè)細(xì)胞經(jīng)過大量培養(yǎng)成為簡單的單細(xì)胞或極少分化的多細(xì)胞，這是克隆技術(shù)bi不可少的環(huán)節(jié)，而且細(xì)胞培養(yǎng)本身就是細(xì)胞的克隆。細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)是細(xì)胞生物學(xué)

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