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細胞常見的保存方法2017/07/04

原代細胞保存溫度越低，保存時限更長；溫度越低，對細胞傷害越大；低溫也不怕，我有防凍劑（e.g.甘油）。下面的表格就是五種常見保存細菌細胞的方法和大約時限。保存條件溫度°C大約時間瓊脂平板44-6周（AgarPlate）穿刺培養(yǎng)基43周-1年（stabculture）冰凍-201-3年超低溫冰凍-201-10年凍干≤415年+但是，具體到你用的那一種菌用什么方法保存能夠保存多長時間，就要視情況而定了，并沒有一個*答案，上表中所列出來的時限一般來說是適用大部分細菌樣本的。小編如果要保存一個細胞樣本，

細胞同步化實驗操作步驟2017/06/29

在腫瘤細胞培養(yǎng)過程中，細胞多處于不同的細胞周期時相中。不同時相的細胞對藥物干預存在不同的反應，會影響實驗的重復性，因此需要制備細胞周期一致的細胞。細胞同步化是解決該問題的好辦法。細胞同步化是利用藥物或其他方法使細胞停止在細胞周期的某個時相的技術，其基本原則是使細胞停留在細胞周期的特定時相上；停滯過程可以通過調節(jié)，恢復細胞周期；恢復后所有細胞以一致的步調在細胞周期中運行。細胞同步化實驗為特定細胞周期轉變、細胞動力學、細胞周期調控以及細胞在不同時相中對藥物的敏感性研究奠定了基礎?！緦嶒炗闷贰坎牧希篐

細胞懸液標本制備實驗步驟2017/06/27

細胞系懸液標本制備實驗步驟(1)取材：收集對數(shù)生長期細胞于離心管中，800～1000r／min離心10min，棄上清，彈指法混勻細胞。沿管壁加入2．0％～2．5％冷戊二醛，輕輕吹打，4℃固定30min。用小鋁片將細清。4℃PBS緩沖液沖洗1～2h或過夜，1000r／min離心5min，棄上清。(2)制備預包埋塊：管內加入2％～4％37℃瓊脂糖液0．1～0．5ml，兩手搓離心管，使細胞系與瓊脂糖混勻，室溫冷卻，形成細胞瓊脂凝膠預包埋塊。離心管內加適量PBs緩沖液或75％乙醇溶液，鋁片沿管輕輕地將細

原代細胞培養(yǎng)注意事項2017/06/22

原代細胞培養(yǎng)：1、實驗材料要新鮮，從活體分離材料后要低溫保存，并盡快進行細胞分離實驗。2、無菌操作。操作時用的培養(yǎng)液，可加平時細胞培養(yǎng)液5倍含量的青鏈霉素。3、用酶法分離細胞時，注意酶液的濃度和控制消化時間。貼塊法分離細胞時，注意動作要輕柔，不要傷到細胞組織，組織塊邊緣盡量平整有利于細胞游離。4、培養(yǎng)液的選擇。不同的細胞有對培養(yǎng)液中營養(yǎng)的要求不同，根據(jù)所分離細胞的特性選擇。人支氣管上皮細胞微小RNA英文名稱：HBEpiCmiRNA規(guī)格:1µg2µg5µg原代細胞人氣管上皮細胞微小RNA英文名稱：

腫瘤細胞凍存保護劑2017/06/20

腫瘤細胞很多化合物都可以作為凍存保護劑，它們既可以單獨使用也可以聯(lián)合使用，例如糖、血清和去污劑。雖然凍存沒有的準則，但是大家普遍認為二甲基亞砜（DMSO）和甘油是保護活細胞和組織使用zui廣泛且zui有效的凍存保護劑。其他凍存保護劑可根據(jù)情況使用，可單獨使用也可聯(lián)合使用，包括：聚乙烯乙二醇（polyethyleneglycol），丙烯乙二醇（propyleneglycol），甘油（glycerine），聚乙烯吡咯烷酮（polyvinylpyrolidone），山梨醇（sorbitol），右旋糖苷

人類外周血淋巴細胞的培養(yǎng)方法2017/06/15

實驗原理染色體是在顯微鏡下可見細胞系有絲分裂過程中出現(xiàn)的結構。因此，必須獲得染色體標本才能進行檢查分析，通常情況下，都是利用外周血淋巴細胞進行核型分析。正常情況下，人體外周血淋巴細胞不再分裂，但植物血凝素（PHA）可刺激血中的淋巴細胞轉化成淋巴母細胞，使其恢復增殖能力。因此，可采取少量外周靜脈血，做短期培養(yǎng)，培養(yǎng)至72小時細胞進入增殖旺盛期，此時加入秋水仙素抑制細胞分裂，使細胞分裂停止在中期以獲得足夠量的分裂期細胞，經(jīng)低滲、固定、制片、染色后鏡下觀察進行核型分析。上述制備的染色體標本經(jīng)胰蛋白酶消

細胞長期保存的方法2017/06/13

細胞系長期低溫冰凍必然會導致部分細胞死亡，而且很多時候我們要把細胞樣本拿來重新接種做實驗，所以解凍再凍的過程也會導致細胞死亡。那么起始樣本的細胞濃度就要達到一定的高度，這樣在以后保存的過程中就算死亡一些細胞，我們也還有很多有效細胞可以用，一般來說這個起始細胞密度要達到10的七次方的樣子（單位：細胞/mL）。除了常見抗凍劑甘油外，我們也會添加多糖（polysaccharide）或者葡聚糖（dextran）或某些蛋白質用來吸附在細胞表面形成保護薄膜，防止在冷凍過程中對細胞的破壞。另外在解凍細胞樣本的

原代細胞培養(yǎng)過程可能出現(xiàn)的問題及解決辦法2017/06/08

原代細胞培養(yǎng)過程中會出現(xiàn)這樣或那樣的問題，客戶遇到的問題從細胞生長角度來說，針對細胞不貼壁、生長緩慢、生長不好，甚至死亡的原因，我們做以下分析并提出相對應的解決方法。一、培養(yǎng)細胞不貼壁可能原因：●胰蛋白酶消化過度●支原體污染●培養(yǎng)基pH值過堿（NaHCO3分解）●細胞老化●接種細胞起始濃度太低或太高解決方法：●縮短胰蛋白酶消化時間或降低胰蛋白酶濃度●分離培養(yǎng)物，檢測支原體。清潔支架或培養(yǎng)箱。如發(fā)現(xiàn)支原體污染，丟棄培養(yǎng)物?！袷褂脽o菌醋酸溶液調整pH值或充入無菌CO2●啟用新的保種細胞●調節(jié)*接種細

細胞株培養(yǎng)時消毒滅菌的方法2017/06/06

細胞株嚴格的消毒滅菌對保證細胞培養(yǎng)的成功是極為重要的，其方法分為物理法和化學法兩類。前者包括干熱、濕熱、濾過、紫外線及射線等，后者主要指使用化學消毒劑等。①熱滅菌：玻璃器皿，160~170℃，90~120min或180℃45~60min。②蒸氣滅菌：用于玻璃器皿、濾器橡膠塞、解剖用具、耐熱塑料器具、受熱不變性的溶液等，不同物品其有效滅菌壓力和時間不同，如培養(yǎng)用液、橡膠制品、塑料器皿等用68kPa(115℃)高壓滅菌10min;布類、玻璃制品、金屬器械等用103kPa(121.3℃)高壓滅菌15~

ATCC細胞株解凍和培養(yǎng)操作推薦2017/06/01

凍存的ATCC細胞株和雜交腐細胞株在運送過程中使用干冰保持低溫。收到細胞后，可以立即解凍復蘇，去除二甲基亞砜（DSMO0）后進行細胞培養(yǎng)。如果不立即復蘇培養(yǎng)細胞，必須將細胞凍存管放置于液氮罐氣相層儲存。請不要將細胞存儲在-130℃以上的溫度。如果溫度不夠低，達不到-130℃，細胞活力會立即下降。ATCC細胞株產(chǎn)品附帶一份產(chǎn)品資料單，其中包含細胞株的信息和詳細的操作指南。細胞株的所有詳細介紹可以在ATCC找到，產(chǎn)品資料單也可以在ATCC下載。此外產(chǎn)品還附帶細胞株具體批次的檢測報告，其中包含批次的特

原代細胞保存的主要方法之一細胞凍存2017/05/25

利用凍存技術將原代細胞置于-196℃液氮中低溫保存，可以使細胞暫時脫離生長狀態(tài)而將其細胞特性保存起來，這樣在需要的時候再復蘇細胞用于實驗。而且適度地保存一定量的細胞，可以防止因正在培養(yǎng)的細胞被污染或其他意外事件而使細胞丟種，起到了細胞保種的作用。除此之外，還可以利用細胞凍存的形式來購買、寄贈、交換和運送某些細胞。細胞凍存時向培養(yǎng)基中加入保護劑--終濃度5％．15％的甘油或二甲基亞砜(DMSO)，可使溶液冰點降低，加之在緩慢凍結條件下，細胞內水分透出，減少了冰晶形成，從而避免細胞損傷。采用"慢凍快

原代細胞培養(yǎng)基的保存方法分析2017/05/23

原代細胞培養(yǎng)基的保存方法分析1.干粉，買了后一定要保存在4度。有人保存在-20度我認為沒有必要。但4度是非常必要的。保證期是有提示的。2.配好的無血清培養(yǎng)基一定保存在4度，保存不要超過3個月。用時根據(jù)提示要加入谷胺酰胺。3.加入血清的培養(yǎng)基，保存在4度不要超過1個月，從時間太長，活性下降。當然稍微長點也不一定出問題。但是根據(jù)細胞而定;如果原代培養(yǎng)，新鮮，如果是原代細胞，或僅維持傳代就不太要緊。但是原則是越新越好。786-O[786-0],人腎透明腺癌細胞HumanHEC-1A,人子宮內膜癌細胞系

原代細胞如何消除組織培養(yǎng)的污染2017/05/18

原代細胞當重要的培養(yǎng)污染時，研究者可能試圖消除或控制污染。首先，確定污染物是細菌、真菌、支原體或酵母，把污染細胞與其它細胞系隔離開，用實驗室消毒劑消毒培養(yǎng)器皿和超凈臺，檢查HEPA過濾器。高濃度的抗生素和抗霉菌素可能對一些細胞系有毒性，因而，做劑量反應實驗確定抗生素和抗霉菌素產(chǎn)生毒性的劑量水平。這點在使用抗生素如兩性霉素B和抗霉菌素如泰樂菌素時尤其重要。下面是推薦的確定毒性水平和消除培養(yǎng)污染的實驗步驟。①在無抗生素的培養(yǎng)基中消化、計數(shù)和稀釋細胞，稀釋到常規(guī)原代細胞傳代的濃度。②分散細胞懸液到多孔

哪些方法可以使細胞適應無血清培養(yǎng)基2017/05/16

1．細胞株直接適應法式—將細胞直接從添加血清的培養(yǎng)基轉換到無血清培養(yǎng)基中。2．連續(xù)適應或循序隔絕法—分幾步將細胞從添加血清的培養(yǎng)基轉換到無血清培養(yǎng)基中。與直接適應法相比較，連續(xù)適應法對于細胞更溫和些。為了使細胞適應無血清培養(yǎng)基，關鍵是細胞培養(yǎng)應滿足以下條件：1．處于對數(shù)生長中期2．存活率大于90%3．在適應期間，以較高的初始細胞株接種量進行接種下面列出了常規(guī)適應步驟。初始細胞接種量、細胞產(chǎn)量和培養(yǎng)周期是連續(xù)優(yōu)化的良好開端。直接適應有些類型的細胞可以直接從含有血清培養(yǎng)基適應無血清培養(yǎng)基。對于直接適

干細胞過濾器的產(chǎn)品優(yōu)勢2017/05/09

干細胞過濾器是一種用于細胞過濾和分離的微流體器件。本產(chǎn)品由一個封閉的流體通道作為細胞過濾器腔體，1、在細胞過濾器腔體的兩端設有流體的輸入端口；2、和流體輸出端口；3、在流體的輸入端口和流體輸出端口之間設置細胞過濾裝置即細胞顆粒阻擋器；4、在細胞顆粒阻擋器旁為流體池；5、細胞阻擋結構可阻擋流體中較大的細胞，并使之聚集在流體池中，并被流體池中的相關抗體所捕獲。通過外加的物理或化學作用，使其破碎或滅活，達到細胞過濾的作用。干細胞產(chǎn)品說明：尼龍網(wǎng)格大小為40微米、70微米以及100微米，滿足過濾分離不同

不同細胞培養(yǎng)基的除菌方式及注意事項2017/05/04

細胞系培養(yǎng)基滅菌的方式分為高壓滅菌和膜過濾除菌，不同的培養(yǎng)基由于其營養(yǎng)成份不同，滅菌方式也可能不同。絕大多數(shù)細胞培養(yǎng)基不適宜高壓滅菌。因為高壓滅菌易破壞細胞培養(yǎng)基中的一些成份，如某些維生素等，因此，在通常的高壓滅菌型細胞培養(yǎng)基中，配方中的維生素種類與過濾型培養(yǎng)基相比較少，對于細胞系生長*的谷氨酰胺等，需待高壓后補充到培養(yǎng)基中。在高壓過程中，滅菌用器皿的選擇應注意避免蒸發(fā)或是污染。在大規(guī)模工業(yè)化中，可以采用短時超高溫處理的方法進行流水線式的滅菌，能夠提高自動化效率，降低成本。膜過濾除菌是當前較為常

人外周T細胞的分離與鑒定2017/04/27

材料：淋巴細胞株懸液、1%SRBC懸液、滅活之小牛血清、離心管、試管、吸管、載玻片、0.8%戊二醛、瑞氏染液。方法（1）取上述配好之淋巴細胞懸液0.1ml于潔凈小試管中，加入1%SRBC懸液0.1ml。再加入小牛血清0.1ml，混勻，置37℃水浴箱中5分鐘，500轉/分，離心5分鐘，放4℃冰箱2-24小時。（2）從冰箱中取出試管，留適量上清液，輕輕搖勻，加0.8%戊二醛2滴，輕搖后，置4℃冰箱15分鐘，取出，作成涂片，待自然干燥，以瑞氏染液染色。（3）計數(shù)：鏡下觀察，凡結合三個以上SRBC的T細

原代細胞培養(yǎng)實驗器具清洗步驟2017/04/25

原代細胞實驗器具清洗l玻璃類1、主要有：培養(yǎng)瓶，血清瓶，小青瓶，移液管，離心管，試管，培養(yǎng)皿等。2、清洗步驟：泡在含有洗潔凈的自來水中→撈出來用毛刷將實驗器具各個面刷洗至少25遍→自來水沖洗25遍→過一遍一蒸水→泡入鉻酸,過夜(24h左右)→從鉻酸中撈出器具，自來水沖洗25遍→過三遍一蒸水，三遍三蒸水→烘箱內烘干→收入柜子備用→用前高溫滅菌(121℃，25min)→烘干→使用。注意：新的玻璃器具先要泡鹽酸1天，然后清洗步驟與上面相同。l塑料類1塑料類器具主要包括：孔板，大槍頭，瓶蓋，濾器，采血管

影響哺乳動物細胞復蘇的因素2017/04/20

影響哺乳動物原代細胞復蘇的因素包括：（a）細胞類型，（b）生長階段，（c）細胞處于細胞周期的哪個階段，（d）終懸液中的細胞數(shù)量和濃度?？赏ㄟ^優(yōu)化以上因素來提高復蘇細胞活力，另外，還需考慮凍存保護劑的特性以及凍存過程的具體操作。哺乳動物細胞培養(yǎng)對其他細胞和微生物的污染特別敏感，例如Hela細胞。由于這種特性，初始細胞系可通過同工酶分析、染色體組型分析、免疫分析或基因組分析，檢測來源。凍存前后均應該進行如上檢測。特別需要注意的是，病毒和支原體污染。一套完整健全的哺乳動物細胞系鑒定程序應該包括，檢查是

神經(jīng)細胞分散培養(yǎng)2017/04/18

（一）細胞系選材常用胚胎動物或新生鼠神經(jīng)組織。雞胚常用胚齡6-8d，新生鼠或胎鼠（12-14d）或人胚胎。不過也有認為與組織相關。如大白鼠胚胎以19d為宜，小鼠以18d為宜，大鼠紋狀體以10d為宜；若紋狀體與黑質聯(lián)合培養(yǎng)的大鼠胚，則黑質以13d，紋狀體18-21d為宜；小腦以20-21d小鼠胚胎，所獲蒲氏細胞成活率高，顆粒細胞正在分化；脊髓與DRG聯(lián)合培養(yǎng)，常用4-7d雞胚或12-14d小鼠胚胎，取材易，神經(jīng)成活率高。（二）取材。腦則取出相應組織，在解剖液中先剪碎，以使胰酶消化。脊髓則固定于瓊脂