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引起ELISA測(cè)定錯(cuò)誤結(jié)果的主要原因2023/01/29: 做elisa實(shí)驗(yàn)需要注意哪些問題?實(shí)驗(yàn)室需要做elisa實(shí)驗(yàn),在做的時(shí)候需要特別注意些什么問題呢?這是新手朋友都有疑惑的地方。Elisa實(shí)驗(yàn)中應(yīng)該注意的問題,包括樣品稀釋、試劑盒平衡、樣品和試劑的混勻、加樣、溫育等問題。elisa試劑盒有著準(zhǔn)確性高、靈敏度高、特異性強(qiáng)的諸多優(yōu)點(diǎn),深受廣大用戶朋友的喜愛.然而,在實(shí)驗(yàn)過程中,也需要注意很多問題.對(duì)此,你需要遵守一些規(guī)則,才能更好地進(jìn)行實(shí)驗(yàn),取得較好的實(shí)驗(yàn)成果。Elisa方法被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測(cè)定.在Elisa測(cè)定中影響因素較多,在檢測(cè)過程中

ELISA試劑盒的使用標(biāo)準(zhǔn)分享2023/01/16: ELISA中一般有兩次抗原抗體反應(yīng)，即加標(biāo)本和加酶結(jié)合物后。ELISA屬固相免疫測(cè)定，抗原、抗體的結(jié)合只在固相表面上發(fā)生。以抗體包被的夾心法為例，加入板孔中的標(biāo)本，其中的抗原并不是都有均等的和固相抗結(jié)合的機(jī)會(huì)，只有最貼近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸。這是一個(gè)逐步平衡的過程，因此需經(jīng)擴(kuò)散才能達(dá)到反應(yīng)的終點(diǎn)。在其后加入的酶標(biāo)記抗體與固相抗原的結(jié)合也同樣如此。這就是為什么ELISA試劑盒反應(yīng)總是需要一定時(shí)間的溫育。溫育常采用的溫度有43℃、37℃、室溫和4℃（冰箱溫度）等。37℃是實(shí)驗(yàn)室中常用

ELISA試劑盒溫度把控2023/01/09: 在ELISA試劑盒中一般有兩次抗原抗體反應(yīng)，即加標(biāo)本和加酶結(jié)合物后?？乖贵w反應(yīng)的完成需要有一定的溫度和時(shí)間，這一保溫過程稱為溫育，有人稱之為孵育，在ELISA試劑盒中似不恰當(dāng)。溫育常采用的溫度有43℃、37℃、室溫和4℃等。37℃是實(shí)驗(yàn)室中常用的保溫溫度，也是大多數(shù)抗原抗體結(jié)合的合適溫度。在建立ELISA方法作反應(yīng)動(dòng)力學(xué)研究時(shí)，實(shí)驗(yàn)表明，兩次抗原抗體反應(yīng)一般在37℃經(jīng)1～2小時(shí)，產(chǎn)物的生成可達(dá)ding峰。為加速反應(yīng)，可提高反應(yīng)的溫度，有些試驗(yàn)在43℃進(jìn)行，但不宜采用更高的溫度。抗原抗體反應(yīng)4℃

ELISA間接法和夾心法定性測(cè)定計(jì)算方法2023/01/05: 這類反應(yīng)的定性結(jié)果可以用肉眼判斷。目視標(biāo)本也無色或近于無色者判為陰性，顯色清晰者為陽性。但在ELSIA中，正常人血清反應(yīng)后常可出現(xiàn)呈色的本底，此本底的深淺因試劑的組成和實(shí)驗(yàn)的條件不同而異，因此實(shí)驗(yàn)中必須加測(cè)陰性對(duì)照。陰性對(duì)照的組成應(yīng)為不含受檢物的正常血清或類似物。在用肉眼判斷結(jié)果時(shí)，更宜用顯色深于陰性對(duì)照作為標(biāo)本陽性的指標(biāo)。目視法簡(jiǎn)捷明了，但頗具主觀性。在條件許可下，應(yīng)該用比色計(jì)測(cè)定吸光值，這樣可以得到客觀的數(shù)據(jù)。先讀出標(biāo)本（sample，S）、陽性對(duì)照（P）、和陰性對(duì)照（N）的吸光值，然后進(jìn)行

分享菌種常用的兩種保存方法2022/12/13: 菌種用于發(fā)酵過程作為活細(xì)胞催化劑的微生物，包括細(xì)菌、放線菌、酵母菌和霉菌四大類。來源于自然界大量的微生物，從中經(jīng)分離并篩選出有用菌種，再加以改良，貯存待用于。使優(yōu)良菌種的性狀保持穩(wěn)定，人為地創(chuàng)造條件，使菌種的新陳代謝活動(dòng)處于不活潑狀態(tài)，即選取優(yōu)良菌種的休眠體(孢子或芽孢)或富有生命力的懸浮液在低溫或脫水狀態(tài)下保存。一、低溫存法：1.簡(jiǎn)單保存法，將瓊脂斜面孢子培養(yǎng)物、菌絲懸浮液以及由麩皮、大米、小米等谷物原料制成的孢子培養(yǎng)物置于4℃冰箱保存,保存時(shí)間不超過1~2個(gè)月，若將谷物原料制備的孢子瓶抽真空

盤點(diǎn)ELISA測(cè)定操作技術(shù)要求2022/11/25: ELISA即酶聯(lián)吸附試驗(yàn)，是一種常用的固相酶免疫測(cè)定方法。ELISA方法被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測(cè)定。但ELISA測(cè)定中影響因素較多，而且其操作中有一定的技術(shù)要求，下面盤點(diǎn)ELISA測(cè)定操作技術(shù)要求如下：1、嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行操作。2、檢測(cè)前應(yīng)將試劑放置室溫平衡半小時(shí)，洗滌液應(yīng)現(xiàn)用現(xiàn)配，同時(shí)觀察濃縮洗滌液中有無結(jié)晶，若有結(jié)晶應(yīng)放37℃水浴中融化后方可使用。加入底物TMB時(shí)應(yīng)注意有無顏色變化，若已顯色則可能過期或變質(zhì)，也不可使用。3、加樣后及時(shí)放入孵育箱。標(biāo)本較多時(shí)，要分批操作。按照說明書步

逆轉(zhuǎn)錄實(shí)驗(yàn)要素分析2022/11/14: 逆轉(zhuǎn)錄（reversetranscription）是以RNA為模板合成DNA的過程，即RNA指導(dǎo)下的DNA合成，逆轉(zhuǎn)錄實(shí)驗(yàn)包括3大要素，分別是引物、逆轉(zhuǎn)錄酶和RNA模板：逆轉(zhuǎn)錄過程1.引物：逆轉(zhuǎn)錄引物主要有3種，包括Oligo（dT）、RandomPrimers和基因特異性引物（GSP）。其中Oligo（dT）具有12-20個(gè)T堿基，并且與真核生物mRNA的3’PolyA尾配對(duì)，可合成全長(zhǎng)的cDNA，但僅擴(kuò)增有polyA尾的mRNA，對(duì)模板質(zhì)量要求高，較適合克隆實(shí)驗(yàn)。而RandomPrimers

影響抗原抗體反應(yīng)因素條件2022/11/07: 抗原抗體反應(yīng)原理：抗原與抗體能夠特異性結(jié)合是基于抗原決定簇（表位）和抗體超變區(qū)分子間的結(jié)構(gòu)互補(bǔ)性與親和性?？乖瓫Q定簇=表位。這種特性是由抗原、抗體分子空間構(gòu)型所決定的抗原表位和抗體超變區(qū)必須密切接觸?？乖贵w反應(yīng)的四大特點(diǎn)：特異性、可逆性、比例性、階段性。影響抗原抗體反應(yīng)因素條件:1、電解質(zhì)：抗原和抗體通常為蛋白質(zhì)分子，等電點(diǎn)分別為pH3～5和pH5～6，在中性或:弱堿性的環(huán)境中，表面均帶負(fù)電荷，適當(dāng)濃度的電解質(zhì)會(huì)使他們失去一部分負(fù)電荷而相互結(jié)合，出現(xiàn)肉眼可見的凝集或沉淀現(xiàn)象：在抗原抗體反應(yīng)中，

敘述細(xì)胞培養(yǎng)中常見的污染源2022/11/01: 細(xì)胞培養(yǎng)是指將細(xì)胞從動(dòng)物或植物體內(nèi)取出，然后在適宜的人工環(huán)境中生長(zhǎng)的過程。細(xì)胞可以在培養(yǎng)前直接從組織中取出并通過酶或機(jī)械方法進(jìn)行解離，也可以來源于已建立的細(xì)胞系或細(xì)胞株。細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)是在細(xì)胞房中進(jìn)行，在超凈工作臺(tái)或生物安全柜中，把細(xì)胞處理好，根據(jù)需要加入細(xì)胞培養(yǎng)基，放入細(xì)胞培養(yǎng)瓶/皿或細(xì)胞培養(yǎng)板中，再放到帶有5%CO2的37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。細(xì)胞培養(yǎng)過程中如果操作不當(dāng)或者條件控制不合適容易受到化學(xué)或者生物因素的污染，常見的污染源有：1.細(xì)菌污染細(xì)菌污染是實(shí)驗(yàn)室細(xì)胞培養(yǎng)中常見的污染，即使在細(xì)胞培

引物的合成及純化方式2022/10/24: 目前引物合成基本采用固相亞磷酰胺y三酯法。該方法具有高效、快速的偶聯(lián)以及起始反應(yīng)物比較穩(wěn)定的特點(diǎn)。主要是將DNA固定在固相載體上完成DNA鏈的合成，由待合成引物的3'端向5'端合成延伸，相鄰的核苷酸通過3'→5'磷酸二酯鍵連接。固相亞磷酰胺三酯法合成引物的具體步驟如下：1)用三lv乙酸去除固相載體5'-羥基的保護(hù)基團(tuán)DMT，獲得游離的5'-羥基；2)將亞磷酰胺保護(hù)核苷酸單體與活化劑四氮唑混合，得到核苷亞磷酸活化中間體，與游離的5'-羥基發(fā)生縮合反應(yīng)；3)由于無法*的5'-羥基都參與縮合，可能有極

詳細(xì)解答逆轉(zhuǎn)錄操作過程中問題2022/10/17: 逆轉(zhuǎn)錄（reversetranscription）是以RNA為模板合成DNA的過程，即RNA指導(dǎo)下的DNA合成。在實(shí)際的操作過程中，還會(huì)有各種問題，現(xiàn)做詳細(xì)解答！1.如何提高RT-PCR反應(yīng)的靈敏度與特異性？①確定模板RNA完整性好，無DNA污染。②RNA模板中不應(yīng)含有擴(kuò)增反應(yīng)抑制劑。③使用適量的模板RNA，模板量太多會(huì)降低特異性，太少會(huì)導(dǎo)致擴(kuò)增不出條帶或條帶太弱。④若模板中有二級(jí)結(jié)構(gòu)，可通過提高逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)溫度來提高擴(kuò)增效果。2.RNA中含有逆轉(zhuǎn)錄抑制劑時(shí)，怎么處理？逆轉(zhuǎn)錄抑制劑包括：SDS、E

ELISA標(biāo)本的處理與注意事項(xiàng)2022/10/10: ELISA是酶聯(lián)接免疫吸附劑測(cè)定(Enzyme-LinkedImmunosorbnentAssay)的簡(jiǎn)稱。它是繼免疫熒光和放射免疫技術(shù)之后發(fā)展起來的一種免疫酶技術(shù)。ELISA的檢測(cè)目的是為了實(shí)驗(yàn)提供準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)依據(jù)，為了保證實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的可靠性，在實(shí)驗(yàn)過程中必須堅(jiān)持全面的質(zhì)量控制和全過程質(zhì)量控制，在收集標(biāo)本前都必須有一個(gè)完整的計(jì)劃。ELISA標(biāo)本的處理：1、血清：室溫血液私人凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。2.血漿：應(yīng)

詳述ELISA定性測(cè)定判斷方法2022/10/05: ELISA定性測(cè)定的結(jié)果判斷是對(duì)受檢標(biāo)本中是否含有待測(cè)抗原或抗體作出"有"或"無"的簡(jiǎn)單回答，分別用"陽性"、"陰性"表示。"陽性"表示該標(biāo)本在該測(cè)定系統(tǒng)中有反應(yīng)。"陰性"則為無反應(yīng)。用定性判斷法也可得到半定量結(jié)果，即用滴度來表示反應(yīng)的強(qiáng)度，其實(shí)質(zhì)仍是一個(gè)定性試驗(yàn)。在這種半定量測(cè)定中，將標(biāo)本作一系列稀釋后進(jìn)行試驗(yàn)，呈陽性反應(yīng)的稀釋度即為滴度。根據(jù)滴度的高低，可以判斷標(biāo)本反應(yīng)性的強(qiáng)弱，這比觀察不稀釋標(biāo)本呈色的深淺判斷為強(qiáng)陽性、弱陽性具定量意義。在間接法和夾心法ELSIA中，陽性孔呈色深于陰性孔。在

細(xì)胞衰老檢測(cè)方法與步驟2022/09/26: 細(xì)胞衰老是細(xì)胞在正常環(huán)境條件下發(fā)生的功能減退、逐漸趨向死亡的現(xiàn)象。衰老的細(xì)胞表現(xiàn)為細(xì)胞體積變大，呈扁平狀；細(xì)胞核變大，核膜內(nèi)陷，染色質(zhì)聚集、固縮、裂解；胞質(zhì)內(nèi)顆粒增加，有空泡形成；線粒體的數(shù)目及形狀發(fā)生改變；膜流動(dòng)性降低；溶酶體內(nèi)容物增多，導(dǎo)致溶酶體酶β-半乳糖苷酶活性升高。衰老細(xì)胞所具有的上述特征成為各種細(xì)胞衰老檢測(cè)手段的依據(jù)。細(xì)胞衰老檢測(cè)方法與步驟:（1）細(xì)胞接種前在6孔培養(yǎng)板中預(yù)先放置滅菌的細(xì)胞片，每孔加入1×10E5個(gè)細(xì)胞，37℃5%CO2條件下培養(yǎng)過夜，使細(xì)胞在細(xì)胞片上生長(zhǎng)。（2）在超

抗體的功能用途2022/09/19: 抗體（英語：antibody）：病原體侵入人體后，刺激了淋巴細(xì)胞，淋巴細(xì)胞就會(huì)產(chǎn)生一種抵抗該病原體的特殊蛋白質(zhì)，叫作抗體。（免疫球蛋白不僅僅只是抗體）是一種由漿細(xì)胞（效應(yīng)B細(xì)胞）分泌，被免疫系統(tǒng)用來鑒別與中和外來物質(zhì)如細(xì)菌、病毒等的大型Y形蛋白質(zhì)，僅被發(fā)現(xiàn)存在于脊椎動(dòng)物的血液等體液中，及其B細(xì)胞的細(xì)胞膜表面。抗體能識(shí)別特定外來物的一個(gè)du特特征，該外來目標(biāo)被稱為抗原。一、抗體的功能抗體的主要功能是與抗原（包括外來的和自身的）相結(jié)合，從而有效地清除侵入機(jī)體內(nèi)的微生物、寄生蟲等異物，抗體（antib

細(xì)胞遷移步驟實(shí)驗(yàn)方法2022/09/13: 細(xì)胞遷移即細(xì)胞劃痕法，是測(cè)定細(xì)胞遷移運(yùn)動(dòng)與修復(fù)能力的方法，類似體外傷口愈合模型。在體外培養(yǎng)皿或平板培養(yǎng)的單層貼壁細(xì)胞上，用微量槍頭或其他硬物在細(xì)胞生長(zhǎng)的中央?yún)^(qū)域劃線，去除中央部分的細(xì)胞，然后繼續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞至實(shí)驗(yàn)設(shè)定的時(shí)間，取出細(xì)胞培養(yǎng)板，觀察周邊細(xì)胞是否生長(zhǎng)至中央劃痕區(qū)，以此判斷細(xì)胞的生長(zhǎng)遷移能力，實(shí)驗(yàn)通常需設(shè)定正常對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組，實(shí)驗(yàn)組是加了某種處理因素或藥物、外源性基因等組別，通過不同分組之間的細(xì)胞對(duì)于劃痕區(qū)的修復(fù)能力，可以判斷各組細(xì)胞的遷移與修復(fù)能力。當(dāng)細(xì)胞長(zhǎng)到融合成單層狀態(tài)時(shí)，在融合的單層

ELISA實(shí)驗(yàn)加樣注意點(diǎn)2022/09/05: ELISA實(shí)驗(yàn)加樣注意點(diǎn)如下：1、標(biāo)本為血清：最好將血液先自然存放1-2小時(shí)后，再用3000rmp離心15分鐘;標(biāo)本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管，采血后必須立即顛倒采血管混合5-10次，放置一段時(shí)間后，3000rpm離心15分鐘;若在幾天內(nèi)檢測(cè)，可放在2-8℃冰箱中，若要貯存，則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。2、加樣后及時(shí)放入孵箱。3、加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。4、如果采用AT或其他全自動(dòng)加樣，最好選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。5、標(biāo)本較多時(shí)，請(qǐng)分批操作。6、血清樣

抗原的兩種特性分享2022/08/30: 抗原（antigen），是指能夠刺激機(jī)體產(chǎn)生（特異性）免疫應(yīng)答，并能與免疫應(yīng)答產(chǎn)物抗體和致敏淋巴細(xì)胞在體內(nèi)外結(jié)合，發(fā)生免疫效應(yīng)（特異性反應(yīng)）的物質(zhì)?？乖幕拘再|(zhì)具有異物性、大分子性和特異性。異物性是指進(jìn)入機(jī)體組織內(nèi)的抗原物質(zhì)，必須與該機(jī)體組織細(xì)胞的成分不相同?？乖奶匦裕焊鶕?jù)抗原的概念可以看出抗原有兩種特性1、免疫原性（immunogenicity）即抗原刺激機(jī)體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生免疫應(yīng)答的過程。該過程包括：抗原進(jìn)入機(jī)體后，刺激淋巴細(xì)胞活化、增殖、分化，產(chǎn)生抗體或致敏的效應(yīng)淋巴細(xì)胞。2、反應(yīng)原性（r

介紹選擇流式抗體技巧2022/08/22: 流式抗體本身也是抗體，所以選擇流式抗體一定要滿足抗體選擇最基本的條件：目標(biāo)蛋白特異性，反應(yīng)種屬以及應(yīng)用實(shí)驗(yàn)。流式抗體能夠在短時(shí)間內(nèi)檢測(cè)分析或分選大量細(xì)胞，在血液學(xué)、免疫學(xué)、腫瘤學(xué)、藥物學(xué)等領(lǐng)域中的應(yīng)用越來越廣泛。其純度、批次穩(wěn)定性、特異性，以及流式結(jié)果的可重復(fù)性備受重視。流式抗體熒光標(biāo)記的方式包括直接標(biāo)記和間接標(biāo)記兩種。在流式實(shí)驗(yàn)過程中，盡量減少實(shí)驗(yàn)工序和過程，以保證實(shí)驗(yàn)的真實(shí)和準(zhǔn)確性。因此在條件允許的范圍內(nèi)，建議盡量用直接標(biāo)記的抗體進(jìn)行實(shí)驗(yàn)而不去做間接標(biāo)記。隨著流式細(xì)胞術(shù)的日益發(fā)展，流式抗體及

移液器的使用方法及注意事項(xiàng)2022/08/15: 介紹下可調(diào)式自動(dòng)取液器的具體操作方法：用拇指和食指旋轉(zhuǎn)取液器上部的旋鈕，使數(shù)字窗口出現(xiàn)所需容量體積的數(shù)字，在取液器下端插上一個(gè)塑料吸頭，并旋緊以保證氣密，然后四指并攏握住取液器上部，用拇指按住柱塞桿頂端的按鈕，向下按到第一停點(diǎn)，將取液器的吸頭插入待取的溶液中，緩慢松開按鈕，吸上液體，并停留1～2秒鐘。移液器的使用方法：1.設(shè)定移液體積：從大量程調(diào)節(jié)至小量程為正常調(diào)節(jié)方法，逆時(shí)針旋轉(zhuǎn)刻度即可；從小量程調(diào)節(jié)至大量程時(shí)，應(yīng)先調(diào)至超過設(shè)定體積刻度，再回調(diào)至設(shè)定體積，這樣可以保證移液器的精確度。2.裝配移

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