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IHC常用酶標(biāo)二抗原理及特點(diǎn)2022/07/25: 免疫組化（IHC）是利用抗原與抗體的特異性結(jié)合原理和特殊的標(biāo)記技術(shù)，通過(guò)化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體顯色，對(duì)組織細(xì)胞內(nèi)的特異性抗原進(jìn)行定位、定性、定量檢測(cè)的一門技術(shù)。本文主要總結(jié)二抗原理及其特點(diǎn)，以提供更好的選擇。IHC常用酶標(biāo)二抗原理圖1.SABC法原理：SABC法是利用鏈酶親和素(Streptavidin)與生物素(Biotin)*的高度親和力這一生物學(xué)性質(zhì)，先將生物素與辣根過(guò)氧化物酶(HRP)結(jié)合，形成生物素化HRP，然后與鏈酶親和素按一定比例混合，形成SABC復(fù)合物。用生物素化二抗與第一抗體結(jié)合，

詳解PCR反應(yīng)條件的選擇2022/07/18: PCR反應(yīng)條件為溫度、時(shí)間和循環(huán)次數(shù)。溫度與時(shí)間的設(shè)置：基于PCR原理三步驟而設(shè)置變性-退火-延伸三個(gè)溫度點(diǎn)。在標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)中采用三溫度點(diǎn)法，雙鏈DNA在90～95℃變性，再迅速冷卻至40～60℃，引物退火并結(jié)合到靶序列上，然后快速升溫至70～75℃，在TaqDNA聚合酶的作用下，使引物鏈沿模板延伸。對(duì)于較短靶基因（長(zhǎng)度為100～300bp時(shí)）可采用二溫度點(diǎn)法，除變性溫度外、退火與延伸溫度可合二為一，一般采用94℃變性，65℃左右退火與延伸（此溫度TaqDNA酶仍有較高的催化活性）。1、變性溫度與時(shí)

ELISA組織樣本處理方法2022/07/05: 用ELISA進(jìn)行檢測(cè)的樣本類型包括常見的血液（血清、血漿），組織勻漿、細(xì)胞裂解液、細(xì)胞培養(yǎng)上清以及不常見的皮膚組織、尿液、糞便、肺泡灌洗液、唾液、腦脊液、胸腹水、前列腺液、精液、陰道分泌物等，這些樣本收集的時(shí)間、處理方法和保存都會(huì)影響到ELISA實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。下面就常見ELISA組織樣本處理方法的整理，希望對(duì)您有所幫助。組織樣本一般是制成組織勻漿，處理方法如下:1、取適量組織塊，于預(yù)冷PBS（0.02mol/L,pH7.0-7.2）中清洗去除血液，稱重后備用（組織塊較大需先剪碎后再勻漿）；2、可同

論述PCR反應(yīng)條件的控制2022/06/28: PCR反應(yīng)條件為溫度、時(shí)間和循環(huán)次數(shù)。溫度與時(shí)間的設(shè)置：基于PCR原理三步驟而設(shè)置變性-退火-延伸三溫度點(diǎn)。在標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)中采用三溫度點(diǎn)法，雙鏈DNA在90～95℃變性，再迅速冷卻至40～60℃，引物退火并結(jié)合到靶序列上，然后快速升溫至70～75℃，在TaqDNA聚合酶的作用下，使引物鏈沿模板延伸。對(duì)于較短靶基因（長(zhǎng)度為100～300bp時(shí)）可采用二溫度點(diǎn)法，除變性溫度外、退火與延伸溫度可合二為一，一般采用94℃變性，65℃左右退火與延伸（此溫度TaqDNA酶仍有較高的催化活性）。PCR反應(yīng)條件的控

區(qū)分三種組成物質(zhì)化學(xué)成分不同細(xì)胞培養(yǎng)基2022/06/21: 細(xì)胞培養(yǎng)基是人工模擬細(xì)胞在體內(nèi)生長(zhǎng)的營(yíng)養(yǎng)環(huán)境，是提供細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)和促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)增殖的物質(zhì)基礎(chǔ)。培養(yǎng)液或培養(yǎng)基的含義幾乎相同，英文都是medium。當(dāng)它是粉劑時(shí)，傾向性地稱為培養(yǎng)基，而將粉劑配成液體后，多稱為培養(yǎng)液。培養(yǎng)液中常常補(bǔ)加血清、抗生素等成分。根據(jù)對(duì)培養(yǎng)基組成物質(zhì)的化學(xué)成分是否*了解來(lái)區(qū)分，可以將培養(yǎng)基分為：天然培養(yǎng)基、合成培養(yǎng)基和半合成培養(yǎng)基。1、天然培養(yǎng)基天然培養(yǎng)基是指利用各種動(dòng)、植物或微生物的原料，其成分難以確切知道。用作這種培養(yǎng)基的主要原料有：牛肉膏、麥芽汁、蛋白胨、酵母膏、玉米粉、麩

傳代培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)操作步驟2022/06/14: 實(shí)驗(yàn)原理:傳代培養(yǎng)是組織培養(yǎng)常規(guī)保種方法之一。也是幾乎所有細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)。當(dāng)細(xì)胞在培養(yǎng)瓶中長(zhǎng)滿后就需要將其稀釋分種成多瓶，細(xì)胞才能繼續(xù)生長(zhǎng)。這一過(guò)程就叫傳代。傳代培養(yǎng)可獲得大量細(xì)胞供實(shí)驗(yàn)所需。傳代要在嚴(yán)格的無(wú)菌條件下進(jìn)行，每一步都需要認(rèn)真仔細(xì)的無(wú)菌操作。傳代培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)操作步驟:1.入無(wú)菌室之前用肥皂洗手，用75%酒精擦拭消毒雙手。2.倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)，確定細(xì)胞是否需要傳代及細(xì)胞需要稀釋的倍數(shù)。將培養(yǎng)用液置37℃下預(yù)熱。3.超凈臺(tái)臺(tái)面應(yīng)整潔，用0.1%新潔爾滅溶液擦凈。4.打開超凈臺(tái)的

解讀微生物菌種活化方式2022/06/07: 菌種活化就是將保藏狀態(tài)的菌種放入適宜的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，逐級(jí)擴(kuò)大培養(yǎng)是為了得到純而壯的培養(yǎng)物，即獲得活力旺盛的、接種數(shù)量足夠的培養(yǎng)物。菌種發(fā)酵有一般需要2-3代的復(fù)壯過(guò)程，因?yàn)楸４鏁r(shí)的條件往往和培養(yǎng)時(shí)的條件不相同，所以要活化,讓菌種逐漸適應(yīng)培養(yǎng)環(huán)境。要明白菌種活化的情況就需要了解菌種保藏的方式和方法。目前國(guó)際國(guó)內(nèi)常用的菌種保存方法包括：定期移植法、液體石蠟法、沙土管法、真空冷凍干燥法、80℃冰箱凍結(jié)法、液氮超低溫凍結(jié)法。對(duì)于不同的保存方式活化的方式也不同：1、定期移植法的菌種復(fù)蘇較簡(jiǎn)單，直接轉(zhuǎn)接即可

解決PCR產(chǎn)物中出現(xiàn)假陰性或無(wú)擴(kuò)增產(chǎn)物2022/05/23: 解決PCR產(chǎn)物中出現(xiàn)假陰性或無(wú)擴(kuò)增產(chǎn)物（即陽(yáng)性對(duì)照中有條帶，而樣品則無(wú)條帶）方法：1、條帶放置時(shí)間過(guò)久,核酸被降解，最好在48h內(nèi)進(jìn)行電泳檢測(cè)。2、DNA模板純度低，如含有雜蛋白質(zhì)或Taq酶抑制劑，可對(duì)DNA進(jìn)行再次純化或重新用優(yōu)質(zhì)試劑盒提取DNA;DNA濃度太低時(shí)，可以加大模板量；對(duì)具有二級(jí)結(jié)構(gòu)DNA使用較好的聚合酶；提取DNA時(shí)，避免吸入酚類試劑。3、對(duì)設(shè)計(jì)不合理的引物進(jìn)行重新設(shè)計(jì)合成；引物應(yīng)高濃度小量分裝保存，防止多次凍融而降解失效；檢測(cè)引物OD值并進(jìn)行電泳檢測(cè)以確保兩條引物濃度一致。4、

了解細(xì)胞系用途2022/05/18: 細(xì)胞系指原代細(xì)胞培養(yǎng)物經(jīng)首ci傳代成功后所繁殖的細(xì)胞群體，也指可長(zhǎng)期連續(xù)傳代的培養(yǎng)細(xì)胞?，F(xiàn)在細(xì)胞系廣泛的應(yīng)用于科學(xué)研究和藥物，用途包括：1、科學(xué)研究：藥物研究開發(fā)與基礎(chǔ)研究藥物研究與開發(fā)（1）新藥篩選：如化學(xué)合成藥物藥效研究、中藥有效成分篩選與鑒定等。（2）疫苗研究與開發(fā)：如病毒性疫苗的研究與開發(fā)（肝炎病毒疫苗、艾滋病疫苗等）、腫瘤疫苗(多肽疫苗)等。（3）基因工程藥物研究與開發(fā)：如干擾素研究與開發(fā)，細(xì)胞生長(zhǎng)因子研究與開發(fā)等。（4）細(xì)胞工程藥物研究與開發(fā)：生物活性多肽研究與開發(fā)，人參皂甙、紫杉醇

簡(jiǎn)述大鼠褪黑素ELISA試劑盒使用指南2022/05/09: 大鼠褪黑素ELISA試劑盒使用指南：1．試劑盒從冷藏箱里取出后放在常溫環(huán)境下15-30分鐘后再使用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。2．濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出，稀釋時(shí)可以放在水浴中加溫助溶，洗滌時(shí)不影響結(jié)果。3．每一步步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間*控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，推薦使用排槍加樣。4．請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線，*做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD值)，請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)

ELISA試劑盒使用技巧大集合2022/05/05: ELISA試劑盒使用技巧大集合：1.洗液不夠時(shí)，可用蒸餾水自行配制PH7.4，0.02M的磷酸緩沖液，加入0.1%的吐溫20作為洗液。加入1/1000的疊氮鈉后可長(zhǎng)期保存。2.吸取液體時(shí)，要用量程和需要量接近的槍去吸，減少誤差。3.要盡量做雙孔實(shí)驗(yàn)，這樣才既能保證數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性，又能反映出試劑盒的精密度。4.為防止樣品蒸發(fā)，試驗(yàn)時(shí)將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi)，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜。5.未使用完的酶標(biāo)板或者試劑，請(qǐng)于2-8℃保存。辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記抗人IgG工作液請(qǐng)依據(jù)所需的量配置使用。請(qǐng)勿重復(fù)使用

原代細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)步驟2022/04/24: 原代細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)步驟：1、取7-10d雄性SD大鼠，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min。2、在超凈工作臺(tái)中，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中，去除小腦和間腦。3、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動(dòng)以去除軟腦膜和腦膜大血管，再放在新的盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中。4、用細(xì)解剖鑷去除大腦白質(zhì)、殘余大血管和軟腦膜，保留大腦皮質(zhì)。5、大腦皮質(zhì)放于DMEM中(含慶大霉素和谷氨酰胺)，剪碎成約1mm3大小，放入50ml的離心管中，加入混合酶液I(0.05

活性蛋白試劑盒提取操作步驟2022/04/19: 本試劑盒用于從哺乳動(dòng)物組織和培養(yǎng)細(xì)胞中提取具有活性的全蛋白，用含有蛋白酶抑制劑及磷酸酶抑制劑的裂解緩沖液LysisBuffer勻漿裂解組織或細(xì)胞，作用溫和，提取過(guò)程簡(jiǎn)便。獲得的全蛋白可用于WesternBlot、免疫共沉淀和酶的活性的測(cè)定的等后續(xù)研究，但不能用于蛋白激酶及磷酸酶免疫共沉淀的研究，因本試劑盒中包括這兩種酶的抑制劑。應(yīng)用方面：可用于WesternBlot、免疫共沉淀和酶活性測(cè)定等后續(xù)研究。操作步驟Ⅰ、實(shí)體組織蛋白的提取1、在每mL冷LysisBuffer加入10μL磷酸酶抑制劑，1μ

支原體污染細(xì)胞常用清除方法2022/04/13: 支原體污染細(xì)胞后，有必要清除支原體，常用方法有：1、對(duì)于非重要的細(xì)胞，如培養(yǎng)中的細(xì)胞、WCB的細(xì)胞等，將培養(yǎng)物與用過(guò)的培養(yǎng)基滅活后丟棄即可。對(duì)于較為重要的細(xì)胞，如來(lái)源珍貴或?qū)嶒?yàn)室中細(xì)胞保藏量較小等可以采用以下（2）-（8）的方法。2、用MRA處理：用支原體清除劑（MycoplasmaRemovalAgent）處理細(xì)胞，作用濃度為25μg/ml，兩周可以清除支原體。3、用清洗純化法清除支原體污染的方法：細(xì)胞營(yíng)養(yǎng)馴化→優(yōu)質(zhì)細(xì)胞群的篩選→細(xì)胞清洗→反復(fù)離心洗滌，其原理是利用離心力、細(xì)胞、微生物質(zhì)量和懸

PCR產(chǎn)物跑不出來(lái)?xiàng)l帶原因參考2022/03/23: PCR是分子生物學(xué)的常規(guī)和常用手段，用途很多，但是都是通過(guò)擴(kuò)增目的基因片段來(lái)實(shí)現(xiàn)的。那么，首先需要搞明白的是，需要擴(kuò)增的基因片段大小是多大，因?yàn)椴煌笮〉幕蚱纹鋽U(kuò)增的難度是有差異的，尤其過(guò)長(zhǎng)的片段，需要使用不同的taq酶來(lái)進(jìn)行擴(kuò)增（比如LAtaq）。幾點(diǎn)容易發(fā)生問(wèn)題的地方供參考：1.引物，PCR是基于引物來(lái)實(shí)現(xiàn)的。引物是否是自己設(shè)計(jì)的？如果是，需要檢查一下引物設(shè)計(jì)的是否合理。如果是從文獻(xiàn)中選取的，一般出問(wèn)題的可能性不大，不放心的可以在數(shù)據(jù)庫(kù)比對(duì)一下，防止文獻(xiàn)出錯(cuò)。2.模板，一般來(lái)講通過(guò)試劑盒

細(xì)胞因子一般具有的特點(diǎn)2022/03/15: 細(xì)胞因子(cytokine，CK)是免疫原、絲裂原或其他刺激劑誘導(dǎo)多種細(xì)胞產(chǎn)生的低分子量可溶性蛋白質(zhì)，具有調(diào)節(jié)固有免疫和適應(yīng)性免疫、血細(xì)胞生成、細(xì)胞生長(zhǎng)、APSC多能細(xì)胞以及損傷組織修復(fù)等多種功能。細(xì)胞因子可被分為白細(xì)胞介素、干擾素、腫瘤壞死因子超家族、集落刺激因子、趨化因子、生長(zhǎng)因子等。眾多的細(xì)胞因子有以下共同的作用特點(diǎn)：1、絕大多數(shù)細(xì)胞因子為質(zhì)量小于25kDa的糖蛋白，質(zhì)量低者如IL-8僅8kDa。多數(shù)細(xì)胞因子以單體形式存在，少數(shù)細(xì)胞因子如IL-5、IL-12、M-CSF和TGF-β等以雙體

血清白蛋白主要有兩方面作用2022/03/07: 雞血清蛋白（ChickenSerumAlbumin）是雞血清中的一種球蛋白，也是血清的主要成分.血液中的白蛋白主要起維持滲透壓作用、PH緩沖作用、載體作用和營(yíng)養(yǎng)作用.在動(dòng)物細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)中，添加白蛋白可起到生理和機(jī)械保護(hù)作用和載體作用。無(wú)血清培養(yǎng)基(serumfreemedium,SFM)，是不需要添加血清就可以維持細(xì)胞在體外較長(zhǎng)時(shí)間生長(zhǎng)繁殖的合成培養(yǎng)基。但是它們可能包含個(gè)別蛋白或大量蛋白組分。雖然基礎(chǔ)培養(yǎng)基加少量血清所配制的*培養(yǎng)基可以滿足大部分細(xì)胞培養(yǎng)的要求，但對(duì)有些實(shí)驗(yàn)卻不適合，如觀察一種

關(guān)于實(shí)驗(yàn)室化學(xué)試劑使用說(shuō)明2022/03/07: 國(guó)內(nèi)實(shí)驗(yàn)室一般將化學(xué)試劑分為四個(gè)等級(jí)：一級(jí)試劑（優(yōu)級(jí)純?cè)噭┩ǔＳ肎.R表示。二級(jí)試劑（分析純?cè)噭┩ǔＳ肁.R表示。三級(jí)試劑（化學(xué)純）通常用C.P表示。四級(jí)試劑（實(shí)驗(yàn)或工業(yè)試劑）通常用L.R表示。此外，根據(jù)特殊的工作目的，還有一些特殊的純度標(biāo)準(zhǔn)。例如光譜純、螢光純、半導(dǎo)體純等。取用時(shí)應(yīng)按不同的實(shí)驗(yàn)要求選用不同規(guī)格的試劑。例如一般無(wú)機(jī)實(shí)驗(yàn)用三級(jí)或四級(jí)試劑即可，分析實(shí)驗(yàn)則需取用純度較高的二級(jí)甚至一級(jí)試劑。科研強(qiáng)則中國(guó)強(qiáng)！上海撫生生物秉承“做陽(yáng)光下的企業(yè)，做陽(yáng)光下的人”的核心價(jià)值觀和“誠(chéng)信、創(chuàng)新、奮

細(xì)胞進(jìn)行爬片流程及注意事項(xiàng)2022/03/01: 在做免疫熒光（IF），激光共聚焦(Confocal)，凋亡檢測(cè)（TUNEL）時(shí)，免不了要制備細(xì)胞爬片，爬片質(zhì)量*決定了最后拍照的質(zhì)量以及實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的精準(zhǔn)性?，F(xiàn)就如何制備好的細(xì)胞爬片介紹。細(xì)胞進(jìn)行爬片操作流程：1.胰酶消化細(xì)胞后計(jì)數(shù)重懸細(xì)胞于*培養(yǎng)基中（懸浮細(xì)胞直接離心）。2.加細(xì)胞時(shí)，根據(jù)玻片的大小，先在每個(gè)孔里準(zhǔn)備放爬片的位置滴少量培養(yǎng)基，目的是使玻片與培養(yǎng)皿靠培養(yǎng)基的張力粘合到一起，然后放玻片，防止加細(xì)胞懸液時(shí)玻片漂起，造成雙層細(xì)胞貼片。整個(gè)過(guò)程注意無(wú)菌操作。3.根據(jù)自己的需要選擇合適的細(xì)胞密

抗體形成的具體規(guī)律2022/02/22: 具體如下：1、初次反應(yīng)：抗原進(jìn)人機(jī)體后，須經(jīng)過(guò)一段潛伏期（誘導(dǎo)期）才產(chǎn)生抗體。潛伏期的長(zhǎng)短與抗原性質(zhì)、數(shù)量以及機(jī)體狀態(tài)等有關(guān)。接種滅活疫苗，一般經(jīng)5~7天血液中可出現(xiàn)抗體。出現(xiàn)最早的是IgM，但它消失也較快，在血液中只能維持?jǐn)?shù)周或數(shù)月。所以在傳染病的早期，測(cè)定特異性IgM有診斷價(jià)值。稍后出現(xiàn)IgG，當(dāng)IgM接近消失時(shí)，正是IgG達(dá)到高峰的時(shí)期。它在血液中維持的時(shí)間較長(zhǎng)可達(dá)數(shù)年以上。IgA出現(xiàn)最晚，常在IgM和IgG出現(xiàn)后2周~2個(gè)月才能從血液中測(cè)出，含量最少，但維持時(shí)間較長(zhǎng)。2、再次反應(yīng)：再次受

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