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2024
11-22

病毒滴度的單位有哪些？
一、病毒滴度病毒的滴度：單位體積(通常為mL)液體中具有生物活性的病毒顆粒數(shù)。滴度是一個病毒自身復制的數(shù)量概念，可分為物理滴度和感染滴度。物理滴度是指包含病毒基因組的病毒顆粒的濃度，可以通過通過定量PCR對病毒顆粒的基因組拷貝數(shù)進行檢測，也可以通過測定病毒顆粒中的特定蛋白進行定量，但物理滴度未考慮到病毒活性和感染效率，因此是不準確的。感染滴度是指成功轉導細胞的病毒顆粒的濃度，須通過細胞感染實驗來測定，如利用定量PCR對細胞中的病毒基因拷貝數(shù)進行檢測，或通過攜帶熒光的病毒感染細胞，利用熒光細胞數(shù)計
2024
11-22

IHC染色不均勻分析
上次我們分享了IHC未染色或無信號的原因分析，這次讓我們來看看IHC染色不均勻是為什么吧。一、組織切片制備解釋：組織切片薄厚不均勻→建議：更換刀片二、組織固定1.解釋：酒精固定不足會產(chǎn)生偽影；→建議：延長固定時間；嘗試不同的固定液2.解釋：固定延遲導致抗原擴散；建議：立即固定組織；可以考慮使用交聯(lián)固定劑三、脫蠟解釋：脫蠟不wan全→建議：使用新鮮的二甲苯四、抗體兼容性解釋：一抗可能結合其他抗原上的表位→建議：從多抗切換至單抗；嘗試不同的單抗五、透化解釋：細胞膜被破壞，膜蛋白丟失→建議：使用低濃度
2024
11-21

IHC未染色或無信號原因分析
IHC未染色或無信號的原因：一、?抗體問題?：抗體與一抗或二抗不兼容、抗體濃度不合適、抗體失效或儲存不當?shù)榷紩е聼o染色。例如，使用抗一抗種屬來源的二抗，確認二抗是否識別一抗的亞型；使用更高濃度的抗體或延長孵育時間；設置陽性對照，確?？贵w仍然有效?。二、?抗原修復不足?：固定步驟可能會改變抗體識別的抗原表位，導致抗原修復不足。使用微波或壓力鍋進行抗原修復，確保使用新鮮配置的修復液?。三、?樣本處理不當?：樣本存放時間過長、切片制備不當（如脫蠟不ce底）、組織切片干片等都會影響染色效果。建議使用新
2024
11-21

蛋白芯片是什么？
一、蛋白芯片簡介?蛋白芯片?是一種高通量的蛋白質功能分析檢測技術，主要用于監(jiān)測蛋白質之間的相互作用。其基本原理是將各種蛋白質有序地固定于載體上，然后利用標記了特定熒光物質的抗體與芯片上的蛋白質結合，通過熒光強度分析蛋白質的表達數(shù)量和相互作用關系?。二、蛋白芯片的工作原理蛋白芯片通過將已知的蛋白質分子固定在固相載體上，然后捕獲與之特異性結合的待測蛋白質。這些待測蛋白質可能存在于血清、血漿、尿液等生物樣本中。通過洗滌和純化步驟后，利用熒光掃描儀或激光共聚掃描技術測定各點的熒光強度，從而分析蛋白質的表
2024
11-20

如何提取細胞核蛋白？
本文介紹一下用勻漿器研磨法提取貼壁細胞核蛋白的具體操作。一、前期準備1、臺盼藍染液：取臺盼藍粉劑，將其溶解在10mL的雙蒸水當中配制成質量體積比為4%（4%w/v）的臺盼藍母液。在使用時，利用PBS緩沖液將母液稀釋10倍，使其濃度達到0.4%，之后再與細胞懸液混合均勻。2、BufferA：包含10mmol/L的HEPES（在4℃下pH值為7.9）、1.5mmol/L的氯化鎂、10mmol/L的KCL、0.5mmol/L的二硫蘇糖醇（DTT）。若擔心漿蛋白降解會對核蛋白產(chǎn)生影響，可以添加1mmol
2024
11-19

PCR擴增反應中的嵌合體是什么？
PCR實驗中產(chǎn)生的嵌合體你知道是什么呢？它怎么產(chǎn)生的呢？那又如何預防和處理呢？這篇文章讓我們一起了解一下吧！一、PCR嵌合體是什么PCR嵌合體(ChimericProducts)：PCR擴增反應中的嵌合體是指一個PCR產(chǎn)物來自兩個或多個模板分子，通常是由于延伸未完quan導致的?。這種現(xiàn)象通常發(fā)生在PCR反應中，特別是當使用多重PCR或復雜模板時。嵌合體會導致擴增產(chǎn)物中含有非預期的片段，有可能會影響實驗結果的準確性，甚至導致錯誤的解釋。二、形成原理在PCR反應中，DNA模板在高溫下解旋成單鏈，然
2024
11-19

細胞凋亡的檢測
一、光學顯微鏡觀察凋亡細胞的主要特征為核染色質致密深染，形成致密質塊，有時可碎裂。檢測方法：細胞涂片或組織石蠟切片作HE染色或Giemsa染色，在高倍物鏡下觀察凋亡細胞的形態(tài)改變，結合顯微測量工具可作凋亡細胞計數(shù)。二、視頻時差顯微技術細胞培養(yǎng)中常用，通過相差顯微鏡可動態(tài)觀察細胞凋亡的變化過程，尤其是觀察細胞表和外形的變化。檢測方法：收集2×10^5細胞/ml培養(yǎng)的細胞，置于多孔培養(yǎng)板，加入凋亡誘導劑，在帶有自動攝像裝置的相差顯微鏡下觀察凋亡細胞的動態(tài)改變，每隔1分鐘作序列攝影，連續(xù)24小時。如同
2024
11-18

流式細胞儀怎么分選T細胞?
上文介紹了流式細胞術的原理及應用，今天讓我們學習一下怎么用流式細胞儀分選T細胞吧~一、樣本制備1.取樣:取100μL抗凝血。2.標記：根據(jù)抗體說明書標記實驗管?；靹蚝?，室溫避光孵育15分鐘。3.溶血：將10×裂紅液用水稀釋10倍，每管加入1mL，振蕩器混勻后室溫避光靜置10分鐘，300g，4°C離心5分鐘。4.洗滌：棄去上清，加入1mL1×PBS洗液，300g離心洗滌5分鐘，洗2-3次。5.上機檢測：棄去上清后加入500μL1×PBS，混勻懸浮后過濾，避光等待上機檢測。二、儀器操作1.打開流式細
2024
11-15

流式細胞術原理及應用
流式細胞儀在手，卻不知道原理？快來看看這篇文章吧！一、流式細胞術實驗原理流式細胞術（FlowCytometry,FCM）是一種單細胞定量分析技術，該技術通過測定庫爾特電阻、熒光、光散射和光吸收等參數(shù)，可以定量分析細胞的結構特征（如DNA含量、蛋白、細胞膜、胞漿或胞核抗原表達量）和功能特征（如細胞內酶活性、鈣流變化等）等多種重要參數(shù)，進行細胞特征分析與分選。它的核心功能是將混合物中的不同細胞分離并計數(shù)，將感興趣的細胞分選出來，提供分類比例并進行進一步分析。二、流式細胞技術應用1.其測定細胞內DNA
2024
11-14

引物探針的使用方法有哪些？
一、引物探針的使用步驟?引物探針使用步驟一：?設計引物和探針?：首先需要根據(jù)目標DNA序列設計特異性引物和探針。引物的長度一般為20-25個核苷酸，探針的長度一般為15-25個核苷酸。設計時要注意避免非特異性擴增，確保引物的特異性和探針的Tm值比引物Tm值高8-10°C?。引物探針使用步驟二：?提取模板DNA?：從待測樣本中提取DNA，作為PCR反應的模板。確保模板DNA的質量和濃度，以獲得可靠的實驗結果?。引物探針使用步驟三：?配制PCR反應體系?：根據(jù)實驗需求，配制含有引物、探針、dNTPs
2024
11-13

IHC出現(xiàn)假陽性、假陰性等問題該怎么辦?
?免疫組化（IHC）實驗中出現(xiàn)假陽性和假陰性了怎么辦呢？一、假陽性的處理1.?降低一抗?jié)舛?：通過降低一抗的濃度，可以減少非特異性結合，從而降低假陽性。通常，降低濃度至能看到陽性表達且能明顯區(qū)分陽性區(qū)域與周圍間質即可?。2.?調整封閉條件?：逐步提高封閉條件，從山羊血清到5%BSA+山羊血清，最終至5%脫脂奶。通常調整至5%BSA+山羊血清即可，不建議輕易使用5%脫脂奶?。3.?選擇合適的二抗?：對于動物標本，選擇抗鼠或抗兔的二抗，避免使用通用型二抗，以免種屬間抗原抗體反應引起假陽性?。二、假陰
2024
11-13

離心柱法提取DNA步驟
常見核酸提取純化方法苯酚氯仿抽提法、磁珠法核酸分離技術、離心柱純化法等，今天我們來看下離心柱法的實驗步驟和優(yōu)缺點吧~一、離心柱法提取DNA步驟離心柱法提取DNA步驟一將組織或細胞懸液加入裂解緩沖液，渦旋混勻。裂解緩沖液中含有變性劑（如胍異硫氰酸鹽），可以有效地裂解細胞和組織，破壞細胞膜和細胞核膜，同時使核酸與蛋白質分離。離心柱法提取DNA步驟二將裂解液轉移到DNASpinColumn中，離心收集流穿液。這個步驟涉及到將裂解液通過一個特殊的膜過濾，該膜具有特定的孔徑，允許小分子如RNA和蛋白質通過
2024
11-12

Alzet滲透泵濃度你會計算嗎？
藥物濃度的調配需根據(jù)每日用藥量和緩釋泵的輸送速率兩項參數(shù)來計算，每日用藥量可通過查閱專業(yè)文獻獲取。此外，每支緩釋泵的輸送速率信息會附在包裝盒上，應根據(jù)包裝上的速率進行配藥。濃度計算舉例：2001滲透泵，給藥：抗利尿激素(ADH)，1.查閱文獻發(fā)現(xiàn)，大鼠正常的ADH分泌量為30ng/天/只，或1.25ng/小時/只。然后，計算出完成1.25ng/小時所需輸注量所需的ADH濃度：ko=Q?Cd其中ko(µg/hr)是質量輸送速率，Cd(µg/µl)表示藥物溶液濃度，Q(µl/hr)表示泵的泵送速率。
2024
11-12

如何對pcr結果進行分析?
一、PCR結果分析的基本步驟：?1.基線設置?：實時PCR反應的基線是指在PCR的初始循環(huán)期間的信號水平，通常是3至15個循環(huán)之間，此時熒光信號幾乎沒有變化，可以認為是背景或反應的噪音。2.?閾值設定?：?qPCR的閾值代表的是明顯超出基線的擴增信號水平，用以區(qū)分明確的擴增信號和背景。通常qPCR儀器自帶軟件會自動將閾值設置為基線熒光值標準偏差的10倍。3.?CT值計算?：Ct是指熒光信號超過閾值時對應的循環(huán)數(shù)，Ct值與目的基因的起始量成反比，可用于計算DNA初始拷貝數(shù)。4.?擴增曲線分析?：擴
2024
11-12

DMEM培養(yǎng)基變色原因
DMEM(Dulbecco'sModifiedEagleMedium)培養(yǎng)基廣泛應用于細胞培養(yǎng)。一般情況下DMEM培養(yǎng)基呈鮮紅色，當細胞狀態(tài)、培養(yǎng)條件以及培養(yǎng)基成分發(fā)生變化，培養(yǎng)基的顏色也會發(fā)生變化。以下是DMEM培養(yǎng)基變色的常見原因：1.pH值變化DMEM培養(yǎng)基中含有酚紅，它是一種pH指示劑，能夠根據(jù)培養(yǎng)基的pH值變化而改變顏色。在pH值低于6.8時培養(yǎng)基呈黃色，pH在7.4時為紅色，pH高于8.2時則呈紫色。2.細胞代謝活動細胞在代謝過程中，會消耗培養(yǎng)基中的糖分并產(chǎn)生乳酸等代謝產(chǎn)物，可能使p
2024
11-11

六孔板總是鋪不均勻怎么辦呢？
細胞鋪板不均會影響后續(xù)的干預效果和實驗檢測一致性和可信度。而細胞鋪板不均勻又是大部分小伙伴們都會遇到的問題，那這個問題該怎么解決呢？下面就結合相關資料以及個人經(jīng)驗跟大家簡單分享一下孔板鋪板不均勻的可能原因以及可供參考的解決方法。六孔板鋪不均勻原因一：板子選擇問題板材質量不佳，導致鋪板不均勻。一些廉價的孔板可能存在制造本身上的不均勻，從而導致細胞分布不均。這是因為細胞傾向于在板孔內部的某些特定區(qū)域黏附，這些區(qū)域通常存在細微的結構或化學性質的不一致。解決方法：更換表面平整度高的高質量的板材。至于說怎
2024
11-11

細胞漂浮也有可能是你操作不當！
細胞如若在生長過程中遇到漂浮困境，你有沒有想過會是操作不當？！接下來，跟隨康康一起，探討這個非微生物原因導致的細胞培養(yǎng)問題，并找到讓它正常發(fā)展的解決方案。復蘇后細胞漂浮原因一：細胞本身貼壁能力較弱比如細胞轉染的明星細胞293T，它生長較快，但貼壁能力弱，容易出現(xiàn)明顯的成片脫落現(xiàn)象。293細胞∝解決辦法：提前使用明膠包被板子，增強吸附性。另外，還建議使用TC處理（tissueculturetreated）的培養(yǎng)瓶/皿促進細胞貼壁附著。復蘇后細胞漂浮原因二：培養(yǎng)基選擇錯誤比如293T細胞培養(yǎng)，推薦使
2024
11-08

簡石生物瓊脂糖凝膠DNA回收試劑盒TD407操作步驟
簡石瓊脂糖凝膠DNA回收試劑盒TD407代理——天津益元利康生物科技有限公司。一、產(chǎn)品優(yōu)點：1.從瓊脂糖凝膠中快速（15分鐘）高產(chǎn)量地回收超純的DNA；2.特制的微量柱設計使得DNA可以在高濃度下洗脫到最小體積（≥10µl）；3.洗脫的DNA非常適合用于DNA連接、測序、標記、PCR等應用。二、操作使用：（以下離心操作步驟的離心力均在10,000-16,000xg之間進行）簡石DNA回收試劑盒操作步驟一：使用刀片或手術刀把DNA片段從瓊脂糖凝膠上切除下來并且移置到1.5ml小型離心管內。注意:從
2024
11-07

Alzet滲透泵工作原理及優(yōu)點
一、Alzet滲透泵工作原理：滲透壓泵可被埋植在實驗動物的皮下或者腹腔，滲透層與泵體埋植組織之間高滲透壓導致組織內水分通過泵體外層的剛性半透膜進入滲透層，從而擠壓由柔韌的非滲透性膜組成的藥池，使藥池內的試劑以預定的速度釋放。滲透壓泵屬于控釋釋放型給藥系統(tǒng)，利用滲透壓原理制成，可以實現(xiàn)藥物的恒速釋放，受生理因素的影響較小，是目前應用最多的控釋制劑。二、Alzet滲透泵優(yōu)點：1.安全：無菌包裝、醫(yī)療級、創(chuàng)傷小、無異物排斥反應、可植入式2.多樣：動物：如小鼠、大鼠等，已驗證29種動物類型器官：如脊髓、
2024
11-07

單雙端測序有什么不同？
單端測序和雙端測序的主要區(qū)別在于測序方式、應用場景和測序質量上。?一、?單端測序和雙端測序的主要區(qū)別一：測序方式1.?單端測序（Single-Read）?：單端測序是從DNA片段的一端進行測序，只讀取一個方向的序列信息。在測序過程中，DNA樣本被片段化處理成200-500bp的片段，引物序列連接到DNA片段的一端，然后進行測序?。2.?雙端測序（Paired-End）?：雙端測序同時從DNA片段的兩端進行測序，讀取兩個方向的序列信息。在構建文庫時，兩端都加上測序引物結合位點，分別進行兩次測序，然

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