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2022
07-25

紫外交聯(lián)儀交聯(lián)過程中各種單位如何換算
威尼德生物科技（北京）有限公司，使用UVA(365nm)、UVB(302nm)、UVC(254nm)三種波長制造了四款紫外交聯(lián)儀，主要包括VL-1000A（365nm）、VL-1000B（302nm）、VL-1000C（254nm）、VL-3000（三種波長），每款設(shè)備實時顯示燈管功率，方便用戶采用時間模式更加精準(zhǔn)計算樣品得到的能量文獻(xiàn)中的設(shè)定值通常以mJ/cm2或J/m2單位進(jìn)行報告。在某些情況中，報告中會用功率單位描述通量（例如μW/cm2），在這種情況下，用戶應(yīng)使用公式1確定能量。公式1.
2022
07-25

威尼德分子雜交儀VH-2000：核酸分子雜交中常用雜交管規(guī)格以及應(yīng)用
在雜交管中進(jìn)行探針標(biāo)記以及預(yù)雜交和雜交，被許多分子生物學(xué)家認(rèn)為是與Southern,Northern,Dot,SlotorColonyBlots等實驗的*佳方法。雜交管瓶內(nèi)雜交意味著與傳統(tǒng)系統(tǒng)中進(jìn)行的實驗相比，使用探針體積會顯著減少，并且探針在膜表面的持續(xù)移動會導(dǎo)致非常有效的雜交反應(yīng)。在分子雜交儀中，溶液的溫度被精確控制和調(diào)節(jié)一般雜交管都采用進(jìn)口低溶出硼硅酸鹽玻璃制作，堅固耐用，熱穩(wěn)定性優(yōu)良，可用于大部分的標(biāo)準(zhǔn)分子雜交儀，比如威尼德生物科技（北京）有限公司，分子雜交儀VH-1000經(jīng)濟(jì)型、分子雜
2022
07-24

威尼德分子雜交儀：聚丙烯酰胺凝膠電泳操作小技巧
1、讓凝膠電泳變得更快,更漂亮方法改進(jìn):將電泳電壓進(jìn)行定時變化,例如可以在開始時將電泳電壓調(diào)節(jié)至100V,大約15min,使條帶的確可以因為自身片段大小不同而產(chǎn)生較大差別的泳動速度,從而將片段分離,然而現(xiàn)在的分離或許會間距較小,從而圖片很不漂亮,或者不易觀察.可以緊接著進(jìn)行120V-130V的電壓進(jìn)行較小差異電泳,但是由于電泳電壓較大,可以避免過大的片段殘存在膠孔不易泳動的情況.結(jié)果:這樣兩個電壓進(jìn)行配合電泳,便可以得到非常漂亮的電泳條帶,并且可以節(jié)省1/5-2/5左右的時間.2、RNA電泳如何
2022
07-24

威尼德分子雜交儀：基因克隆知識問答及FAQ
基因克隆是指在體外將含有目的基因或其它有意義的DNA片段同能夠自我復(fù)制的載體DNA連接，然后將其轉(zhuǎn)入宿主細(xì)胞或受體生物進(jìn)行表達(dá)或進(jìn)一步研究的分子操作的過程，因此基因克隆又稱DNA克隆、分子克隆、基因重組或重組DNA技術(shù)。基因克隆涉及一系列的分子生物學(xué)技術(shù)，如目的DNA片段的獲得、載體的選擇、各種工具酶的選用、體外重組、導(dǎo)入宿主細(xì)胞技術(shù)和重組子篩選技術(shù)等等。為了方便大家學(xué)習(xí)和交流，我以問答形式介紹基因克隆及其常見問題，希望對大家有所幫助。Q1：如何獲取一個已知基因的序列？A1：對已知序列的基因克隆
2022
07-24

威尼德分子雜交儀：核酸分子雜交中雜交信號低于預(yù)期的影響因素
1放射自顯影期間膜對膠片的曝光時間不足。2核酸轉(zhuǎn)移或結(jié)合在尼龍膜上的效率低3目標(biāo)序列以非常低的拷貝數(shù)存在。增加加載到凝膠上的樣品量。4沒有足夠數(shù)量的探針序列，增加探針的濃度或加入10%硫酸葡聚糖，這樣減少了溶劑體積，可以到到相同的效果。5沒有探針同源性。6雙鏈DNA探針未變性，或者，探針檢測儀性能下降。在使用RNA探針時發(fā)生可能更大。7探針的比活性太低?？紤]諸如標(biāo)記反應(yīng)中的探針濃度、放射性標(biāo)記的三磷酸鹽的半衰期等因素。8雜交和/或洗滌過程中試驗方法不佳：1）增加鹽的濃度。2）降低溫度。3）降低S
2022
07-23

威尼德核酸分子雜交試驗問題歸納與總結(jié)
常見問題Q1：標(biāo)記方法有哪幾種？A1：（1）切口平移法（2）隨機(jī)引物法（3）末端標(biāo)記法（4）單鏈DNA探針標(biāo)記（5）寡核苷酸探針標(biāo)記法Q2：探針標(biāo)記物的分類有幾種？A2：（1）探針標(biāo)記物有放射性核素與非放射性物質(zhì)兩種。放射性核素標(biāo)記敏感性高，可檢測pg水平的核酸，但因不易長期保存，且存在放射性污染等問題，現(xiàn)已較少應(yīng)用。（2）非放射性物質(zhì)常用的有生物素、地高X等，非放射性探針安全、穩(wěn)定、操作方便并且經(jīng)濟(jì)，但敏感性較低，近年來，由于雜交信號檢測方法的改進(jìn)，檢測的敏感性得到了很大提高。Q3：怎樣確定探
2022
07-23

威尼德分子雜交儀：Western 中NC膜、PVDF膜、尼龍膜的差別
硝酸纖維素膜(nitrocellulosefiltermembrane，簡稱NC膜)，NC膜在NorthernBlot、SouthernBlot、WesternBlot中都需要用到，雜交技術(shù)有固相雜交和液相雜交之分。固相雜交技術(shù)目前較為常用，先將待測核酸結(jié)合到一定的固相支持物上，再與液相中的標(biāo)記探針進(jìn)行雜交。固相支持物常用硝酸纖維素膜。PVDF膜即聚偏二氟乙烯膜（polyvinylidenefluoride）是蛋白質(zhì)印跡法中常用的一種固相支持物。PVDF膜是疏水性的，膜孔徑有大有小，隨著膜孔徑的
2022
07-23

威尼德分子雜交儀：Western試驗問題歸納與總結(jié)
Q1:PVDF膜和硝酸膜結(jié)合蛋白的原理是什么？A1:一般而言，硝酸纖維素膜是通過疏水作用來和蛋白質(zhì)相聯(lián)，若反復(fù)洗幾次后，蛋白容易掉下來，效果較差。尼龍膜主要通過它膜上的正電荷和蛋白接合（注：常用的PVDF膜即帶正電荷的尼龍膜），同時也有疏水作用，但相對較弱。這樣的話，PVDF膜和蛋白接合較牢，不易脫落，效果較好。Q2:做組織樣品的westernblot的時候，處理樣品有什么訣竅？A2:必須進(jìn)行研磨、勻漿、超聲處理，蛋白質(zhì)溶解度會更好，離心要充分，膜蛋白需用更劇烈的方法抽提，低豐度膜蛋白可能還要分
2022
07-23

威尼德分子雜交儀：Western blot 實驗原理及試驗步驟
經(jīng)典實驗步驟是將提取的蛋白電泳—轉(zhuǎn)膜---一抗孵育---二抗孵育---底物顯色---分析。我這幾天幾乎都在重復(fù)著這個過程，現(xiàn)在將自己試驗過程記錄下來，和大家一起分享，希望對新手有所幫助。1.蛋白提取傳統(tǒng)方法是(1)組織稱重(2)利用液氮、研缽粉碎組織塊(3)加入RIPA緩沖液，PMSF(4)勻漿（15,000轉(zhuǎn)/分*1分鐘）維持4℃(5)加入PMSF冰上孵育30分鐘，移入離心管4℃離心15分鐘(6)上清液為細(xì)胞裂解液可分裝-20℃保存。一部分進(jìn)行Bradford比色法測定蛋白質(zhì)濃度，取相同質(zhì)量的
2022
07-21

如何正確理解紫外交聯(lián)儀中三種波長 365,302、254
紫外線是指通過棱鏡將自然光分成赤、橙、黃、綠、青、藍(lán)、紫七色光,波長較紫色光更短的一類光線的總稱．它廣泛存在于自然界中,與人的生活密切相關(guān)。根據(jù)生物效應(yīng)的不同,將紫外線按照波長劃分為四個部分:A波段(UVA),又稱為黑斑效應(yīng)紫外線(400～315nm);B波段(UVB),又稱為紅斑效應(yīng)紫外線(315～280nm);C波段(UVC),又稱為滅菌紫外線(280～100nm);D波段(UVD),又稱為真空紫外線(VacuumeUV)(200～10nm)。很多年之前，紫外線就已被用于防止物體表面微生物的

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