Caspase 3 活性檢測試劑盒/Caspase 3 Activity Assay Kit   BB-4106

使用方法：

• 裂解緩沖液和檢測緩沖液配制

根據(jù)待測樣品數(shù)準備裂解緩沖液和檢測緩沖液，每1ml緩沖液中加入10ul DTT。

• 樣品處理
• 細胞樣品

1. 收集2-5×10⁶個細胞，在4℃，500×g條件下離心2-3分鐘，小心吸取培養(yǎng)基，盡可能吸干，收集細胞。
2. 用冷PBS洗滌細胞兩次，每次洗滌后盡可能吸干上清。
3. 在細胞中加入100μl冷的裂解緩沖液，高速渦旋振蕩15秒。
4. 置冰上15分鐘，每隔5分鐘高速渦旋振蕩15秒。
5. 在4℃，500×g條件下離心5分鐘。
6. 快速將上清吸入另一預冷的干凈離心管，置于冰上或-80℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/span>

 組織樣品

1. 取適量組織樣本剪碎，按照50mg/100μl冷的裂解緩沖液，用組織勻漿器勻漿至無明顯肉眼可見固體（或用液氮研磨），冰上靜置15分鐘，小心將上清吸入另一預冷的干凈離心管。

1. 在4℃，500×g條件下離心5分鐘。
2. 快速將上清吸入另一預冷的干凈離心管，置于冰上或-80℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/span>

• 對上述處理過的上清用Bradford法進行蛋白定量。

• Caspase 3活性檢測
  1. 取10ul大約含20-50ug蛋白的裂解上清，加入90ul檢測緩沖液。
  2. 再加入10ul Ac-DEVD-pNA （使用前請混勻），在37℃下避光反應1-2小時，有黃色顏色產(chǎn)生即可進行檢測，如果顏色變化不明顯，時間可以延長，甚至孵育過一晚。部分樣品中激活的caspase-3水平較低，顏色變化不明顯，直接上機檢測，與對照組樣品產(chǎn)品變化即可。
  3. 測定A405nm或A400nm。

根據(jù)凋亡誘導的細胞的吸光值與空白對照細胞的吸光值的比值計算相對的Caspase 3活性程度。

Caspase 3 活性檢測試劑盒/Caspase 3 Activity Assay Kit   BB-4106

   BB-4106