細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞株 CTLL-2

細(xì)胞描述：   
該細(xì)胞是源自C57BL/6的細(xì)胞毒性的T淋巴細(xì)胞，生長依賴IL-2。

細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞株 CTLL-2增殖能力取決于細(xì)胞取材、培養(yǎng)技術(shù)、培養(yǎng)條件等綜合因素。請按照正確的培養(yǎng)方法來解凍、傳代，以此保證細(xì)胞具備良好的增殖能力，方便您的后繼研究順利進(jìn)行。    

質(zhì)量控制：   
本細(xì)胞經(jīng)過了檢測，不含有細(xì)菌、真菌、病毒（HIV、HBV、HCV）、支原體。 

培養(yǎng)條件：
37℃，5% CO2，pH值7.2~7.4，無菌恒溫培養(yǎng)。

生長特性：

懸浮生長　
用途：   
本產(chǎn)品只提供給進(jìn)一步的科研使用，不可應(yīng)用于治療等其他方面。

細(xì)胞相關(guān)操作：

細(xì)胞復(fù)蘇

1. 37°C水浴預(yù)熱培養(yǎng)基；
2.從液氮中取出細(xì)胞迅速放入37°C水浴快速解凍（解凍后不要繼續(xù)暖細(xì)胞）；
3.在超凈臺中加入5ml培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，1000rpm離心5min；
4.棄上清，加入5ml培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，用血小球計數(shù)板進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)，按細(xì)胞密度4-5×105/ml接種到25ml細(xì)胞培養(yǎng)瓶中；
5.置于37°C，5% CO2的培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。

細(xì)胞傳代

1.取細(xì)胞計數(shù)(詳見細(xì)胞凍存)，當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到1.0-3.0×106/ml時（不要超過3.0×106cells/ml），可傳代；

2.37°C水浴預(yù)熱培養(yǎng)基；

3.在超凈臺中，加適量預(yù)熱好的培養(yǎng)基到無菌搖瓶中，以細(xì)胞終密度為4-5×105/ml接種細(xì)胞（也可1000rpm，5min離心后棄上清，用預(yù)熱好的培養(yǎng)基重懸并調(diào)整細(xì)胞密度為5.0×105/ml），25ml細(xì)胞培養(yǎng)瓶中；
4.置于37°C，5% CO2的培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。

細(xì)胞凍存

1.細(xì)胞計數(shù)：

1)洗凈晾干血小板計數(shù)板和蓋玻片，將蓋玻片*覆蓋計數(shù)區(qū)；

2)充分混勻細(xì)胞，取少量(0.1-0.5ml)細(xì)胞懸液與等體積的染色液臺盼藍(lán)混合，移液器吹吸混合均勻，用移液器取20ul混合液從蓋玻片兩端(與中間凹槽平行的兩端)分別打入細(xì)胞，以細(xì)胞懸液剛好浸濕蓋玻片為佳；

3)顯微鏡下，數(shù)四個計數(shù)區(qū)的總細(xì)胞數(shù)，無活性細(xì)胞染成藍(lán)色，活細(xì)胞不被染色；

4)細(xì)胞密度=細(xì)胞總數(shù)/4×10000×2；

這里10000是不變的，因為計數(shù)的細(xì)胞是在體積為1mm×1mm×0.1mm即10-4cm3計數(shù)池內(nèi)，1cm3=1ml，將四個計數(shù)區(qū)的細(xì)胞數(shù)除以4取平均數(shù)，乘2是補償加等體積臺盼藍(lán)形成的稀釋。

5)細(xì)胞活性=活細(xì)胞數(shù)/細(xì)胞總數(shù)×*。

注:細(xì)胞密度高時，可調(diào)整細(xì)胞懸液和臺盼藍(lán)的比例，計數(shù)時乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)即可。

2.當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到傳代密度且細(xì)胞活性在90%以上時，可以凍存細(xì)胞。

3.37°C水浴預(yù)熱培養(yǎng)基。

4.在超凈臺中將要凍存的細(xì)胞移入離心管，1000rpm離心5min。

5.棄上清，用90%培養(yǎng)液 10%DMSO的混合液重懸細(xì)胞，并調(diào)整細(xì)胞密度為4-6×106/ml。

6.將細(xì)胞懸液分裝到凍存管中(1-1.5ml/管)。

7.將裝有細(xì)胞的凍存管放入程序降溫凍存盒，-20°C放1-2h后，-80°C過YE，然后快速轉(zhuǎn)移到液氮中。

收到復(fù)蘇好的細(xì)胞的處理方法：
1. 先從外包裝盒拿出離心管，在離心管表面噴一層酒精，并小心去掉封口膜；

2. 將離心管中的細(xì)胞在超凈工作臺內(nèi)取出一部分進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)（詳見細(xì)胞凍存）。

3. 如細(xì)胞密度小于3×106/ml，可直接將離心管中的細(xì)胞轉(zhuǎn)移到T25瓶中，置于37°C，5% CO2的培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。
4. 如細(xì)胞密度超過3×106/ml，操作步驟參照（細(xì)胞傳代）