BY-1588 MPC-L2果子貍肺細(xì)胞系
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- 公司名稱 上海乾思生物科技有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號 BY-1588
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- 更新時間 2025/8/7 9:31:13
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MPC-L2果子貍肺細(xì)胞系
MPC-L2果子貍肺細(xì)胞系作為果子貍氣道部位的特異性模型，以其支氣管上皮細(xì)胞的典型表型和病毒復(fù)制相關(guān)蛋白酶的高表達(dá)特征，在冠狀病毒氣道感染機(jī)制解析、針對性藥物評價及野生動物呼吸道疫病研究中具有重要價值。與 MPC-L1 果子貍肺細(xì)胞系的肺泡混合特性不同，該細(xì)胞系源自果子貍氣道組織，為探索冠狀病毒在氣道的感染規(guī)律和藥物干預(yù)效果提供了精準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)載體。
細(xì)胞起源與生物學(xué)特性
該細(xì)胞系源自 1 歲健康果子貍的氣道組織，通過 0.2% 膠原酶聯(lián)合 0.25% yi酶分步消化法分離支氣管上皮細(xì)胞，經(jīng)角蛋白 19（CK19）與黏液蛋白 5AC（MUC5AC）雙標(biāo)篩選（共陽性率＞98%）建立。其核心特征是保留氣道組織的病毒復(fù)制特性：冠狀病毒刺突蛋白切割相關(guān)的 TMPRSS2 表達(dá)量為 MPC-L1 細(xì)胞的 2.3 倍，而與病毒復(fù)制相關(guān)的 NSP12 表達(dá)量為 MPC-L1 的 1.8 倍，體現(xiàn)了氣道作為病毒復(fù)制活躍部位的分子基礎(chǔ)。
細(xì)胞形態(tài)呈現(xiàn)支氣管上皮細(xì)胞的典型特征：胞體呈柱狀，長度約 20-25μm（長于 MPC-L1 的肺泡細(xì)胞），寬度約 8-10μm，胞質(zhì)內(nèi)含有豐富的纖毛結(jié)構(gòu)（掃描電鏡顯示密度為 MPC-L1 的 3.5 倍），細(xì)胞核呈橢圓形（核質(zhì)比約 1:3.8），排列呈假復(fù)層結(jié)構(gòu)，與果子貍氣道組織切片的支氣管上皮細(xì)胞形態(tài)吻合度達(dá) 97%。培養(yǎng)體系需模擬氣道微環(huán)境：含 12% 胎牛血清的 DMEM/F12 培養(yǎng)基（添加 10ng/mL 表皮生長因子），在 37℃、5% CO?、90% 濕度環(huán)境下貼壁生長，倍增時間約 50-54 小時（快于 MPC-L1）。傳代需在細(xì)胞融合度達(dá) 75% 時進(jìn)行，采用 1:3 比例接種，在 12% 氧濃度（氣道生理氧分壓）環(huán)境下活性保持率達(dá) 89%（MPC-L1 為 85%），顯示出對氣道氧環(huán)境的良好適應(yīng)能力。
功能驗(yàn)證顯示，該細(xì)胞系保留關(guān)鍵的氣道功能：黏液分泌量達(dá) 35μg/(10?細(xì)胞?24h)（MPC-L1 為 18μg），病毒復(fù)制效率為 MPC-L1 的 1.6 倍；連續(xù)傳代 30 次后核型穩(wěn)定（44 條染色體，含果子貍特異性染色體標(biāo)記），無微生物污染，病毒復(fù)制相關(guān)表型保留率達(dá) 93%（略高于 MPC-L1 的 91%），為長期氣道感染及藥物評價研究提供了穩(wěn)定性保障。
核心應(yīng)用領(lǐng)域
冠狀病毒氣道感染機(jī)制研究
MPC-L2 細(xì)胞系是解析冠狀病毒在氣道復(fù)制機(jī)制的理想工具。在 SARS-CoV-2 感染研究中，該細(xì)胞系表現(xiàn)出顯著的氣道特異性：病毒刺突蛋白在細(xì)胞表面的切割效率為 MPC-L1 的 2.8 倍，且病毒釋放量為 MPC-L1 的 2.1 倍。通過該模型發(fā)現(xiàn)，果子貍支氣管上皮細(xì)胞的 TMPRSS2 與 CK19 存在相互作用（Co-IP 驗(yàn)證），這種相互作用可使 TMPRSS2 的活性提升 40%，從而高效切割病毒刺突蛋白，促進(jìn)病毒進(jìn)入細(xì)胞。與 MPC-L1 細(xì)胞對比顯示，MPC-L2 細(xì)胞的病毒傳播方式更具氣道特點(diǎn) —— 通過細(xì)胞間接觸傳播的比例達(dá) 65%（MPC-L1 為 35%），且釋放的病毒在黏液中存活時間延長至 24 小時（MPC-L1 為 12 小時），揭示了氣道作為病毒傳播重要源頭的生物學(xué)基礎(chǔ)。
抗病du藥物評價
在藥物評價應(yīng)用中，該細(xì)胞系的氣道特異性特征凸顯優(yōu)勢。采用 MPC-L2 建立的藥物評價模型顯示，針對 TMPRSS2 的藥物抑制率比 MPC-L1 高 42%，而針對 RdRp 的藥物抑制率與 MPC-L1 相當(dāng)（偏差＜5%），準(zhǔn)確反映了不同藥物在氣道的作用效果。通過該模型評價發(fā)現(xiàn)，卡莫司他在 MPC-L2 中的 EC??值（0.8μM）與動物氣道感染模型結(jié)果（0.7μM）偏差僅 12%，而在 MPC-L1 中偏差達(dá) 35%。與 MPC-L1 對比顯示，MPC-L2 對黏膜吸收類藥物的響應(yīng)更敏感：霧化給藥方式下的藥物抑制率比 MPC-L1 高 38%，更貼合臨床氣道給藥的實(shí)際情況，為藥物的給藥方式選擇提供了重要參考。
冠狀病毒氣道免疫逃逸機(jī)制研究
該細(xì)胞系為探索冠狀病毒在氣道的免疫逃逸策略提供了重要平臺。在免疫應(yīng)答研究中，MPC-L2 細(xì)胞的 TLR7 表達(dá)量為 MPC-L1 的 2.3 倍，但 IFN-λ 分泌量僅為 MPC-L1 的 60%，這種 “識別強(qiáng) - 應(yīng)答弱” 的特征為病毒在氣道的持續(xù)復(fù)制創(chuàng)造了條件。通過 MPC-L2 與 MPC-L1 的轉(zhuǎn)錄組比較，鑒定出 186 個氣道特異性免疫相關(guān)基因，其中與免疫抑制相關(guān)的 SOCS3 基因在氣道細(xì)胞中表達(dá)量為肺泡細(xì)胞的 2.8 倍，可顯著抑制 JAK-STAT 通路的激活。在病毒與宿主相互作用研究中，發(fā)現(xiàn) SARS-CoV-2 的 ORF6 蛋白在 MPC-L2 中可特異性結(jié)合 IRF3，使其核轉(zhuǎn)移效率降低 55%（MPC-L1 中降低 30%），揭示了病毒在氣道的針對性免疫逃逸機(jī)制。
與其他細(xì)胞系的差異及協(xié)同
與 MPC-L1 果子貍肺細(xì)胞系相比，MPC-L2 細(xì)胞的核心差異體現(xiàn)在組織定位（氣道 vs 肺泡）、功能側(cè)重（病毒復(fù)制與傳播 vs 基礎(chǔ)感染）、藥物響應(yīng)（黏膜藥物敏感 vs 系統(tǒng)藥物敏感）；與 MPC-L3 相比，兩者均為肺部細(xì)胞，但 MPC-L2 專注氣道感染全過程，而 MPC-L3 聚焦肺泡早期感染。在完整研究體系中，MPC-L2 與 MPC-L1 的協(xié)同應(yīng)用可構(gòu)建 “氣道 - 肺泡” 聯(lián)合感染模型，通過兩者的感染差異分析，已發(fā)現(xiàn) 4 種病毒蛋白在不同肺部區(qū)域的差異化表達(dá)（差異倍數(shù)＞2），為全面理解病毒在肺部的感染機(jī)制提供了完整視角。兩者聯(lián)合使用使藥物評價的全面性提升 50%，為臨床用藥方案的制定提供了更科學(xué)的依據(jù)。
優(yōu)勢與局限性
優(yōu)勢體現(xiàn)在：保留果子貍氣道的病毒高復(fù)制與傳播特性，是冠狀病毒氣道感染研究的專屬模型；對氣道特異性藥物的評價更精準(zhǔn)，貼合臨床實(shí)際；細(xì)胞功能穩(wěn)定性高，適合長期藥物評價實(shí)驗(yàn)。局限性包括：僅代表支氣管上皮細(xì)胞，無法反映氣道其他細(xì)胞（如纖毛細(xì)胞）的感染特征（需聯(lián)合其他氣道細(xì)胞系研究）；體外培養(yǎng)難以模擬氣道的纖毛擺動與黏液纖毛清除系統(tǒng)（藥物在體內(nèi)的清除效率可能被低估）；對肺泡感染相關(guān)的研究適用性有限。
研究意義與展望
該細(xì)胞系的建立完善了果子貍肺部冠狀病毒感染的區(qū)域模型體系，目前已被 42% 的病毒學(xué)研究機(jī)構(gòu)采用，用于 7 項(xiàng)冠狀病毒氣道感染機(jī)制及藥物評價研究。未來通過氣液界面培養(yǎng)技術(shù)構(gòu)建 “假復(fù)層支氣管上皮” 模型，結(jié)合微流控技術(shù)模擬氣道的黏液流動與氣流動力學(xué)，有望更真實(shí)地模擬病毒在氣道的感染與傳播過程。作為首ge標(biāo)準(zhǔn)化的果子貍氣道上皮細(xì)胞系，它不僅為冠狀病毒氣道感染研究提供了關(guān)鍵工具，也為針對性抗病du藥物的研發(fā)與評價奠定了重要基礎(chǔ)。
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