BY-1556 hTERT-BTY牛甲狀腺細(xì)胞系
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- 公司名稱(chēng) 上海乾思生物科技有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號(hào) BY-1556
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時(shí)間 2025/8/6 12:57:07
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細(xì)胞株和菌株、胎牛血清、標(biāo)準(zhǔn)品和對(duì)照品、生化試劑、ELISA試劑盒、抗體和抗原、細(xì)胞因子、技術(shù)服務(wù)、實(shí)驗(yàn)耗材和消耗品、儀器設(shè)備。
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hTERT-BTY牛甲狀腺細(xì)胞系
hTERT-BTY牛甲狀腺細(xì)胞系作為牛源甲狀腺研究的突破性永生化模型,以其穩(wěn)定表達(dá)的人端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶(hTERT)和完整的甲狀腺濾泡上皮功能,在牛甲狀腺激素合成機(jī)制解析、代謝調(diào)控網(wǎng)絡(luò)研究及生物制藥生產(chǎn)中具有不可替代的地位。與 BTA-S2 黃牛皮膚細(xì)胞系的成纖維細(xì)胞特性及有限傳代能力不同,該細(xì)胞系源自牛甲狀腺組織并經(jīng)永生化改造,為探索甲狀腺這一關(guān)鍵內(nèi)分泌器官的生理功能提供了長(zhǎng)期穩(wěn)定的實(shí)驗(yàn)載體。
細(xì)胞起源與生物學(xué)特性
該細(xì)胞系源自健康成年牛的甲狀腺濾泡組織,通過(guò) 0.1% yi酶與 0.02% EDTA 聯(lián)合消化法獲得原代甲狀腺濾泡上皮細(xì)胞后,經(jīng)慢病毒介導(dǎo)的 hTERT 基因轉(zhuǎn)染實(shí)現(xiàn)永生化,再經(jīng)甲狀腺特異性標(biāo)志物甲狀腺球蛋白(Tg)免疫熒光篩選純化建立。其核心特征是高純度保留甲狀腺上皮細(xì)胞表型與永生化特性:Tg 陽(yáng)性率達(dá) 98%,促甲狀腺激素受體(TSHR)表達(dá)率 97%,而成纖維細(xì)胞標(biāo)志物波形蛋白陽(yáng)性率低于 1%,細(xì)胞純度較傳統(tǒng)培養(yǎng)法提升 60%,顯著高于 BTA-S2 細(xì)胞系的皮膚成纖維特性。
細(xì)胞形態(tài)呈現(xiàn)典型的濾泡上皮樣,胞體呈多邊形,直徑約 15-18μm,較 BTA-S2 細(xì)胞更小,細(xì)胞核呈圓形(核質(zhì)比約 1:3.5),排列呈單層或局部復(fù)層,可形成類(lèi)似甲狀腺濾泡的腺樣結(jié)構(gòu)(直徑 50-80μm),與甲狀腺濾泡上皮的在體結(jié)構(gòu)吻合度達(dá) 95%。培養(yǎng)體系需模擬內(nèi)分泌微環(huán)境:含 10% 胎牛血清的 F12K 培養(yǎng)基(添加 5μg/mL 胰島素和 10mIU/mL 促甲狀腺激素),在 37℃、5% CO?環(huán)境下貼壁生長(zhǎng),倍增時(shí)間約 40-44 小時(shí)(短于 BTA-S2 細(xì)胞系)。傳代需在細(xì)胞融合度達(dá) 80%-85% 時(shí)進(jìn)行,采用 1:4 比例接種,碘缺乏環(huán)境(<5μmol/L)會(huì)導(dǎo)致激素合成功能下降(甲狀腺素 T4 分泌量減少 48%)。
功能驗(yàn)證顯示,該細(xì)胞系保留關(guān)鍵甲狀腺功能:碘攝取率達(dá) 25%/24h,是 BTA-S2 細(xì)胞系的 12.5 倍;甲狀腺素 T4 分泌量達(dá) 32ng/(10?細(xì)胞?24h),三碘甲狀腺原氨酸 T3 達(dá) 8ng/(10?細(xì)胞?24h);連續(xù)傳代 100 次后仍保持核型穩(wěn)定(60 條染色體,含牛甲狀腺細(xì)胞特異性核型標(biāo)記),端粒長(zhǎng)度維持在 8-10kb(BTA-S2 細(xì)胞傳代 25 后端??s短至 5kb),無(wú)支原體及牛源病原體污染,永生化穩(wěn)定性顯著優(yōu)于原代甲狀腺細(xì)胞(傳代 100 次后功能保留率 90% vs 傳代 15 次后 50%)。
核心應(yīng)用領(lǐng)域
甲狀腺激素合成機(jī)制研究
hTERT-BTY 細(xì)胞系是解析牛甲狀腺激素合成調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的理想模型。在激素合成研究中,該細(xì)胞系表現(xiàn)出典型的內(nèi)分泌特異性:促甲狀腺激素(TSH)刺激后,環(huán)磷suan腺苷(cAMP)水平升高 6.8 倍,而 BTA-S2 細(xì)胞系在相同處理下無(wú)顯著變化。通過(guò)該模型發(fā)現(xiàn),牛甲狀腺過(guò)氧化物酶(TPO)基因啟動(dòng)子區(qū)存在獨(dú)te的 CREB 結(jié)合位點(diǎn),是 TSH 調(diào)控激素合成的關(guān)鍵元件,雙熒光素酶實(shí)驗(yàn)證實(shí)該區(qū)域可使啟動(dòng)子活性提升 7.2 倍,為理解牛甲狀腺功能的激素調(diào)控提供了直接證據(jù)。此外,其鈉碘同向轉(zhuǎn)運(yùn)體(NIS)的碘轉(zhuǎn)運(yùn)活性達(dá) 42pmol/(mg?min),顯著高于其他牛源細(xì)胞系(BTA-S2 細(xì)胞僅為 3.5pmol/(mg?min)),wan美模擬了甲狀腺的碘濃聚功能。
甲狀腺疾病模型構(gòu)建
在牛甲狀腺功能異常研究中,該細(xì)胞系的應(yīng)用價(jià)值尤為突出。對(duì)比正常與碘過(guò)量處理的細(xì)胞系發(fā)現(xiàn),后者的甲狀腺球蛋白碘化水平下降 52%,促甲狀腺激素受體抗體(TRAb)表達(dá)量增加 4.3 倍,與臨床甲狀腺腫病例的病理特征吻合度達(dá) 93%。而 BTA-S2 細(xì)胞系因缺乏甲狀腺特異性功能,無(wú)法模擬此類(lèi)病理過(guò)程。通過(guò)該模型建立的 "碘過(guò)量 - 甲狀腺炎" 體外模型,證實(shí)炎癥因子 IL-6 可使 TPO 活性下降 38%,為牛地方性甲狀腺腫的發(fā)病機(jī)制提供了全新視角。在藥物干預(yù)研究中,10μmol/L 的硒代蛋氨酸處理可使該細(xì)胞系的抗氧化能力提升 55%,激素合成功能恢復(fù) 42%,為甲狀腺疾病的營(yíng)養(yǎng)調(diào)控提供了劑量依據(jù)。
生物制藥生產(chǎn)平臺(tái)
該細(xì)胞系是重組甲狀腺蛋白生產(chǎn)的優(yōu)質(zhì)載體。在重組 Tg 蛋白表達(dá)研究中,hTERT-BTY 細(xì)胞的產(chǎn)量達(dá) 180μg/(10?細(xì)胞?24h),是 BTA-S2 細(xì)胞系的 9 倍,且蛋白糖基化修飾與天然甲狀腺組織的一致性達(dá) 92%(CHO 細(xì)胞系僅為 75%)。通過(guò)該模型優(yōu)化的無(wú)血清培養(yǎng)體系,使重組 TSH 的表達(dá)量提升至 250IU/L,且批次間差異率<5%,顯著優(yōu)于傳統(tǒng)原代細(xì)胞(120IU/L,差異率 15%)。目前,該細(xì)胞系已用于牛甲狀腺功能檢測(cè)試劑盒的抗原生產(chǎn),使檢測(cè)靈敏度提升 3 倍,交叉反應(yīng)率下降至<1%。
與其他細(xì)胞系的差異及協(xié)同
除與 BTA-S2 細(xì)胞系差異顯著外,與永生化牛垂體細(xì)胞系相比,hTERT-BTY 細(xì)胞的甲狀腺特異性功能更強(qiáng)(T4 分泌量高 8 倍),而垂體細(xì)胞更適合下丘腦 - 垂體 - 甲狀腺軸的上游調(diào)控研究。在牛內(nèi)分泌網(wǎng)絡(luò)研究中,該細(xì)胞系的激素分泌模式與下丘腦細(xì)胞系的調(diào)控信號(hào)存在顯著相關(guān)性(相關(guān)系數(shù) 0.86),反映了內(nèi)分泌軸的協(xié)同作用。兩者可協(xié)同用于構(gòu)建 "下丘腦 - 垂體 - 甲狀腺" 軸的體外模型,全面解析牛的代謝調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。
優(yōu)勢(shì)與局限性
優(yōu)勢(shì)體現(xiàn)在:永生化特性實(shí)現(xiàn)長(zhǎng)期穩(wěn)定培養(yǎng)(>100 代),解決了原代甲狀腺細(xì)胞傳代受限的難題;完整保留甲狀腺激素合成功能,是內(nèi)分泌研究的標(biāo)準(zhǔn)模型;重組蛋白表達(dá)量高且修飾天然,適合生物制藥生產(chǎn)。局限性包括:永生化可能導(dǎo)致部分應(yīng)激通路改變(hTERT 過(guò)表達(dá)使應(yīng)激激素皮zhi醇敏感性下降 15%);無(wú)法wan全模擬甲狀腺的三維濾泡結(jié)構(gòu)(需類(lèi)器官培養(yǎng)彌補(bǔ));對(duì)非內(nèi)分泌干擾物的響應(yīng)靈敏度較低(如重金屬毒性檢測(cè)誤差率>8%)。
研究意義與展望
該細(xì)胞系的建立突破了牛甲狀腺研究的技術(shù)瓶頸,推動(dòng)甲狀腺功能研究從短期原代實(shí)驗(yàn)進(jìn)入長(zhǎng)期機(jī)制探索,目前已被 40% 的動(dòng)物內(nèi)分泌實(shí)驗(yàn)室采用,用于 12 項(xiàng)牛甲狀腺相關(guān)研究。未來(lái)通過(guò)基因編輯技術(shù)敲除 hTERT 的潛在干擾位點(diǎn)(目前干擾率 15%),結(jié)合微流控芯片構(gòu)建 "甲狀腺 - 血管" 共培養(yǎng)模型(目前單層培養(yǎng)功能模擬度 80%),有望進(jìn)一步提升其在精準(zhǔn)內(nèi)分泌研究中的價(jià)值。作為牛甲狀腺研究的標(biāo)gan模型,它不僅為反芻動(dòng)物內(nèi)分泌調(diào)控提供了關(guān)鍵工具,也為人類(lèi)甲狀腺疾病的比較醫(yī)學(xué)研究搭建了重要橋梁。
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