酸性轉(zhuǎn)化酶（Acid invertase,AI）測(cè)試盒分光光度法

產(chǎn)品名稱:酸性轉(zhuǎn)化酶（Acid invertase,AI）測(cè)試盒分光光度法

貨號(hào)：SH161K

規(guī)格：50管/24樣

產(chǎn)品內(nèi)容：

提取液：液體50mL×1瓶，4℃保存；

試劑一：液體50mL×1瓶，-20℃保存；

試劑二：粉劑×1瓶，4℃保存；臨用前加入25mL試劑一充分溶解備用；用不完的試劑4℃保存；

試劑三：液體30mL×1瓶，4℃保存。

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

蔗糖轉(zhuǎn)化酶（Invertase，Ivr）催化蔗糖不可逆地分解為果糖和葡萄糖，是高等植物蔗糖代謝關(guān)鍵酶之一。根據(jù)zui適 pH，將高等植物Ivr分為酸性轉(zhuǎn)化酶（AI）和中性轉(zhuǎn)化酶（NI）兩種類型。AI(EC 3.2.1.26)主要存在于細(xì)胞液泡或自由空間中，zui適 pH 為4.5~5.0（酸性），通過(guò)降解液泡中蔗糖，調(diào)節(jié)液泡中蔗糖的利用和果實(shí)內(nèi)糖類的積累。
  AI催化蔗糖降解產(chǎn)生還原糖，進(jìn)一步與3,5－二硝基水楊酸反應(yīng)，生成棕紅色氨基化合物，在510nm有特征光吸收，在一定范圍內(nèi)510nm光吸收增加速率與AI活性成正比。

試驗(yàn)中所需的儀器和試劑：

可見(jiàn)分光光度計(jì)、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 mL玻璃比色皿、研缽、冰、蒸餾水。

操作步驟：      

一、粗酶液提?。?/span>  

按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。12000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。  

二、測(cè)定步驟及加樣表：

按下表操作：

混勻，煮沸10min左右（蓋緊，以防止水分流失），流水冷卻后充分混勻，510nm處蒸餾水調(diào)零，記錄各管吸光值A，如果吸光值大于2，可以用蒸餾水稀釋后測(cè)定（計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)），ΔA=A測(cè)定-A對(duì)照。

三、A I  活性計(jì)算：

標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為y=0.0016x-0.001；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（µg/mL），y為吸光值。

1. 按蛋白濃度計(jì)算

單位定義：37℃每mg蛋白每分鐘產(chǎn)生1µg還原糖定義為一個(gè)酶活性單位。

NI活性（U/mg prot）=[(ΔA+0.001)÷0.0016×V1]÷(V1×Cpr)÷T=20.8×(ΔA+0.001) ÷Cpr

1. 按鮮重計(jì)算

單位定義：37℃每g組織每分鐘產(chǎn)生1µg還原糖定義為一個(gè)酶活性單位。

NI活性（U/g）=[(ΔA+0.001)÷0.0016×V1]÷(W×V1÷V2)÷T=20.8×(ΔA+0.001) ÷W

V1：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.2mL；V2：加入提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本鮮重，g；T：反應(yīng)時(shí)間：30min。