大腸桿菌O157：H7顯色培養(yǎng)基

HiCrome MacConkey Sorbitol Agar Base　

原理　 　 　 　 　　　　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　

麥康凱山梨醇瓊脂培養(yǎng)基 是根據(jù)Rappaport和Henigh的文獻(xiàn)描述而制備的（1）。培養(yǎng)基中含有山梨醇和BC指示劑，不含乳糖。用于鑒別大腸桿菌O157:H7腸道病原菌。

大多數(shù)大腸菌群菌株 會(huì)發(fā)酵山梨醇，產(chǎn)生酸。當(dāng)pH值低于6.8時(shí)，培養(yǎng)基中的中性紅會(huì)變成粉紅色。同時(shí)普通大腸桿菌具有ß-D葡萄糖醛酸酶，當(dāng)遇到培養(yǎng)基中BC指示劑時(shí)，會(huì)呈現(xiàn)藍(lán)綠色。當(dāng)兩種顏色疊加時(shí)，普通大腸桿菌在此種培養(yǎng)基中，最終會(huì)呈現(xiàn)藍(lán)紫色。

大腸桿菌O157:H7不發(fā)酵山梨醇（2），也不具備ß-D葡萄糖醛酸酶活性（3），因而在此種培養(yǎng)基中產(chǎn)生的菌落為無色。

March和Ratnam報(bào)告（2），山梨醇麥康凱瓊脂培養(yǎng)基對(duì)大腸桿菌O157:H7的檢測(cè)具有100%的敏感性和85%的特異性，該培養(yǎng)基可作為篩選大腸桿菌O157:H7的可靠手段。

此培養(yǎng)基中：碳源、氮源及其它必要的生長(zhǎng)營(yíng)養(yǎng)素，由酪蛋白酶解產(chǎn)物和?蛋白胨提供；結(jié)晶紫和膽鹽會(huì)抑制大多數(shù)革蘭氏陽性菌生長(zhǎng)；培養(yǎng)基中的氯化鈉維持滲透壓平衡。

如果需要，此培養(yǎng)基還可添加 碲酸鹽頭孢克肟添加劑（FD147），可使培養(yǎng)基更具有選擇性（4）。亞碲酸鉀可使大腸桿菌O157選擇性生長(zhǎng)，并抑制嗜水氣單胞菌和普羅維登菌的生長(zhǎng)；頭孢克肟可抑制變形桿菌。

注：假單胞菌在此培養(yǎng)基中也可產(chǎn)生無色菌落。若需對(duì)可疑菌落辨別，可進(jìn)行氧化酶試驗(yàn)，在5-10秒內(nèi)觀察結(jié)果。

應(yīng)用　　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　

HiCrome™麥康凱山梨醇瓊脂培養(yǎng)基 推薦用于從食物和動(dòng)物飼料中選擇性分離大腸桿菌O157:H7。

培養(yǎng)基成分　　　　　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　

成分                               克/升

酪蛋白酶水解物                     17

?蛋白胨                           3

山梨醇                             10

膽鹽混合物                         1.5

氯化鈉                             5

結(jié)晶紫                             0.01

中性紅                             0.03

BC指示劑 ,                         01

瓊脂                               13.5

最終pH（25℃）                    7.1±0.2

配置　　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　

在495ml蒸餾水中溶解25.06克,加熱至沸騰以*溶解。15磅滅菌（121°C）15分鐘。冷卻到45°C?；靹颍谷霟o菌培養(yǎng)皿。

如果需要添加液態(tài)碲酸鹽頭孢克肟添加劑（FD147），在無菌培養(yǎng)基冷卻前添加。

質(zhì)量控制　　　　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　

● 外觀——淺黃色至粉紅色，單一自由流動(dòng)粉末

● 成膠性——牢固，可與1.35%瓊脂凝膠相媲美

● 制備好的培養(yǎng)基的顏色和透明度——在培養(yǎng)皿中為紫紅色、澄清并稍不 透明的凝膠形式

● 配比濃度——5.01%w／v(5.01g/100ml水)水溶液在25°C下pH為7.1±0.2

● pH值——6.90-7.30

培養(yǎng)結(jié)果　　　　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　

5-37°C孵育18-24小時(shí)后觀察培養(yǎng)特征（如有必要，可延至48小時(shí)）。

參考文獻(xiàn) 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　

1.Hansen W. and Yourassawsky E., (1984), J. Clin. Microbiol., 20:1177.

2.Karmali M.A., Petric M., Lim C., et al, (1985), J. Infect. Dis., 151-775.

3.Thompson et al. (1990). J. Clin. Microbiol. 29, 2165-2168.

4.Zadik P.M., Chapman P.A. and Siddons C.A., (1993), J. Med. Microbiol., 39, 155-158.

     產(chǎn)品引用文獻(xiàn)

1. Sreepriya Prakasan, Parmanand Prabhakar, Manjusha Lekshmi, Sanath Kumar,Binaya Bhusan Nayak.Isolation of Shiga toxin-producing Escherichia coli harboring variant Shiga toxin genes from seafood.Vet World. 2018 Mar; 11(3): 379–385.

2. SK Manna, C Manna,et al.Serogroup distribution and virulence characteristics of sorbitol-negative Escherichia coli from food and cattle stool.Journal of Applied Microbiology, 2010, 108 (2) :658–665

3. KM Mbae，MK Ndwiga，F(xiàn)G Kiruki.Microbiological Quality of Kachumbari , a Raw Vegetable Salad Popularly Served Alongside Roast Meat in Kenya.Journal of Food Quality,2018,(35):1-7