土壤羥胺還原酶（hydroxylamine reductase,HR）試劑盒說明書

可見分光光度法

注意：正式測定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。

測定意義

土壤羥胺還原酶能將土壤中氮代謝過程中形成的中間產(chǎn)物羥胺還原為氨，土壤中的還原態(tài)化合物可作為氫的供體，其強(qiáng)弱影響到土壤氮代謝過程中氮素的氨揮發(fā)損失，間接影響氮肥的利用效率。

測定原理

硫酸鐵銨中的Fe³⁺可將羥胺氧化為氮?dú)?，自身被還原為Fe²⁺，F(xiàn)e²⁺在弱酸條件下與鄰菲羅琳形成橙紅色配合物，在 510nm 處有吸收峰，羥胺還原酶作用于羥胺，使配合物形成量減少，510nm處吸光值的減少可反映羥胺還原酶的活性。

自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器

天平、常溫離心機(jī)、可見分光光度計(jì)、1mL玻璃比色皿、震蕩儀、氮吹儀。

試劑組成和配制

試劑一：液體 10mL×1 瓶，4℃保存。

試劑二：粉劑×1 瓶，4℃保存。臨用前加10mL蒸餾水充分溶解。

試劑三：液體 30mL×1 瓶，4℃保存。

試劑四：液體 20mL×1 瓶，4℃保存。

試劑五：液體 10mL×1 瓶，4℃保存。

試劑六：液體 5mL×1 瓶，4℃避光保存。

試劑七：液體 5mL×1 瓶，4℃避光保存。

測定操作表

計(jì)算公式

標(biāo)準(zhǔn)曲線：y =0.185x-0.1828，R²=0.9992

酶活定義：每克土壤每天轉(zhuǎn)化1μg 羥胺為一個(gè)酶活力單位。

HR 活性（μg/d/g）=（△A+ 0.1828）÷0.185×V 反總÷（W×V 樣÷V 樣總）÷T

= 1816.32×（△A+0.1828）÷W

V 反總：反應(yīng)總體積，1mL；V 樣：反應(yīng)體系中加入樣本體積，0.1mL；V 樣總：加入提取

液體積，1.4mL；W：樣本質(zhì)量，g；T：24h

注意事項(xiàng)

1. 土壤表層溶解氧濃度較大，取樣應(yīng)取表層 5cm 以下的土壤，否則酶活性較低或者測定不

到。

2. 試劑三盡量不要敞口放置，取完立即加蓋擰緊。

3. 反應(yīng)體系zuihao能用氮吹儀排除溶解氧，若無此裝置，則加入試劑三后立即密封，于 30℃

反應(yīng) 1h。