l 細胞鑒定

種屬鑒定已通過

l 細胞來源

國家資源庫

l 細胞背景

此細胞來自3月齡雄性小鼠。此AML12（α小鼠肝臟12）細胞系由來自針對人TGFα的轉基因小鼠（CD1菌株，品系MT42）的肝細胞建立。通過電子顯微鏡觀察，這些細胞表現出典型的肝細胞特征，例如過氧化物酶體和膽小管樣結構。AML12細胞保留表達血清（白蛋白，α1抗胰蛋白酶和轉鐵蛋白）和間隙連接（連接蛋白26和32）蛋白的高水平mRNA的能力，并且僅含有乳酸脫氫酶的同工酶5。細胞表達高水平的人TGFα和較低水平的小鼠TGFα。肝臟特異性蛋白質的表達在培養(yǎng)中隨時間降低，但通過在無血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)細胞而重新激活。細胞不會在軟瓊脂中形成菌落或生長。這些細胞在免疫抑制小鼠中沒有致瘤性。

l 細胞特性

1） 來源：小鼠，肝

2） 形態(tài)：上皮樣細胞 貼壁生長

3） 含量：>1x106  細胞數

4） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5） 用途：僅供科研使用。

l 培養(yǎng)條件：

1） 準備：DMEM/F12 基礎培養(yǎng)基     (awcell-0005)                88%

     優(yōu)質胎牛血清                                                                             10%

       ITS(胰島素+轉鐵蛋白+硒)    （awcell-4507）                     1%

       Dexamethasone  地塞米松（awcell-8040）                    40ng/ml

       P/S青霉素-鏈霉素                                                                      1%

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

l 注意事項：

對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細胞可以適當延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。 

3.輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的*培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力，后續(xù)傳代根據實際情況按1:2~1:5的比例進行。

3）細胞凍存: 收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用。

l 運輸形式：

低溫：（1）1mL凍存管包裝干冰運輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉入液氮或直接復蘇，若發(fā)現干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯系。

常溫：（2）T25瓶復蘇的存活細胞常溫發(fā)貨，收到后按照細胞接收后的處理方法操作。

l 生物安全:

1. 所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

2. 建議在復蘇凍存細胞時始終使用防護手套、衣服和戴上防護面罩。注意：凍存管浸沒在液氮中會泄漏，并會慢慢充滿液氮。解凍時，液氮轉化成氣相可能導致容器爆炸或用危險力吹掉其蓋子，從而產生飛揚的碎屑造成人員傷害。