40104ES Dispase II 分散酶II
- 公司名稱 翌圣生物科技(上海)股份有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號(hào) 40104ES
- 產(chǎn)地 上海
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時(shí)間 2025/8/4 14:58:04
- 訪問(wèn)次數(shù) 506
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供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 貨號(hào) | 40104ES |
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應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè) |
Dispase II,中文名分散酶II,一種非特異性金屬蛋白酶,細(xì)胞生物學(xué)中常用于從不同的組織或器官分離單細(xì)胞,并用于后續(xù)細(xì)胞培養(yǎng),如原代細(xì)胞的分離,細(xì)胞傳代等。另外,Dispase II還可用于消除懸浮細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中發(fā)生的細(xì)胞聚集。與其他細(xì)胞生物學(xué)常用蛋白酶(如胰蛋白mei、膠原酶、鏈霉蛋白mei等)相比,該酶具有以下優(yōu)勢(shì):1)一種快速有效且溫和的細(xì)胞消化酶,對(duì)細(xì)胞損傷小,且能維持細(xì)胞膜完整性;2)來(lái)源于細(xì)菌,無(wú)支原體或其他動(dòng)物病毒污染;3)穩(wěn)定性強(qiáng),不受溫度、pH及血清組分的影響;4)可用于多種類型組織和細(xì)胞的分離等。
本品非無(wú)菌Dispase II,來(lái)源于Bacillus polymyxa,使用時(shí)需對(duì)其除菌處理,用于細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)常用工作濃度為0.6-2.4 U/mL。
產(chǎn)品信息
貨號(hào) | 40104ES60 / 40104ES80 |
規(guī)格 | 100 mg / 1 g |
比活性(Specific Activity) | ≥0.8 U/mg (+37℃, casein as substrate, pH 7.5) |
單位定義(Unit Definition) | 在溫度37℃、pH值為7.5的條件下,每分鐘水解酪蛋白釋放出相當(dāng)于1 µM(181 µg)酪氨suan的福林陽(yáng)性氨基酸和肽所需要的酶量,即為一個(gè)蛋白酶活性單位,以U表示。 |
最佳pH(pH Optimum) | 6.0-8.5 |
抑制劑(Inhibitors) | EDTA, EGTA, Hg2+, 其他金屬離子。血清不會(huì)抑制dispase活性。 |
激活劑(Activator) | Ca2+,Mg2+,Mn2+,F(xiàn)e2+,F(xiàn)e3+,Al3+。最佳的Ca2+濃度為2 mM。本酶制品已含足量的Ca2+使其處于最佳活性。 |
使用說(shuō)明
1 母液及工作液配制
1)用50 mM HEPES-KOH緩沖液(pH 7.4, 150 mM NaCl)(60165ES)溶解適量本品凍干粉,配制成10 mg/mL的儲(chǔ)存液,用0.22 µM濾膜過(guò)濾除菌。
2)使用時(shí)用適當(dāng)細(xì)胞培養(yǎng)液將上述儲(chǔ)存液稀釋到工作液濃度即可,用于細(xì)胞分離時(shí)其常用工作濃度為0.6-2.4 U/mL。
【注】不推薦使用高于2.4 U/mL的工作濃度。
2 組織的解離
1)用無(wú)菌的小刀或者剪刀將組織jian成合適大小的組織塊;
2)用無(wú)菌PBS清洗組織塊;
3)向上述組織塊中加入Dispase II溶液(工作濃度為0.6-2.4 U/mL),并確保組織塊全部浸沒(méi)于Dispase 溶液中。
4)37℃孵育,孵育過(guò)程緩慢攪拌直至組織塊全部解離。【注】若第一次使用該酶,可通過(guò)細(xì)胞計(jì)數(shù)來(lái)確定需要的總孵育時(shí)間。一般對(duì)于較難解離組織,1h即可達(dá)到分離目的,但更長(zhǎng)時(shí)間(如數(shù)小時(shí))的孵育也不會(huì)明顯影響細(xì)胞活性。
5)如有需要,可將上述消化產(chǎn)物通過(guò)無(wú)菌不銹鋼網(wǎng)篩過(guò)濾,以分開(kāi)單細(xì)胞與殘留的組織塊?;蛘叽髩K組織沉淀后輕輕倒出上層細(xì)胞,若是需要,換用新鮮dispase溶液以進(jìn)一步解離殘留組織。
6)離心沉淀細(xì)胞,倒掉酶溶液;
7)用培養(yǎng)基重懸細(xì)胞沉淀,并于常規(guī)條件下培養(yǎng)細(xì)胞。
3 細(xì)胞傳代
1)利用Dispase 溶液(37℃預(yù)熱)浸沒(méi)細(xì)胞,于37℃孵育5 min;
2)吸除上述溶液,繼續(xù)于37℃孵育10 min;
3)顯微鏡下觀察細(xì)胞分離情況,如需要,可進(jìn)一步孵育15 min;
4)利用細(xì)胞培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞,輕輕旋轉(zhuǎn)使得細(xì)胞沉淀并用培養(yǎng)基清洗細(xì)胞;
5)換用新鮮細(xì)胞培養(yǎng)液重懸細(xì)胞,并按常規(guī)方法進(jìn)行細(xì)胞鋪板。
儲(chǔ)存條件
凍干粉4℃保存,保質(zhì)期2年。儲(chǔ)存液于4℃可穩(wěn)定保存2周,若長(zhǎng)期保存,請(qǐng)分裝后于-20℃凍存。避免反復(fù)凍融。
Q: 分散酶II用Hepe緩沖鹽溶液(50 mM Hepes/KOH pH7.4, 150 mM NaCl), 括號(hào)中是什么意思?可以用其他緩沖液替代嗎?
A: 括號(hào)內(nèi),是Hepes緩沖液的組成。建議用推薦的HEPES緩沖液溶解。其他緩沖液沒(méi)有驗(yàn)證數(shù)據(jù)。
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