NOTE：間充質(zhì)干細(xì)胞的成骨分化水平因細(xì)胞類型、細(xì)胞供體來源，培養(yǎng)條件、細(xì)胞代次、細(xì)胞狀態(tài)和分化時間等因素而異。

|  舉例說明：成脂誘導(dǎo)步驟

（以下步驟僅供參考，詳情參見參見說明書）

1.接種骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞：取對數(shù)生長期的細(xì)胞，按照2×104cells/cm2的細(xì)胞密度接種至包被后的培養(yǎng)器皿中，于37℃，5% CO2培養(yǎng)環(huán)境下培養(yǎng)至匯合度90%以上，棄掉上清，加入成脂誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基誘導(dǎo)液。

2. 細(xì)胞分化誘導(dǎo)：于37℃，5%CO２培養(yǎng)環(huán)境下培養(yǎng)約3天，更換為成脂誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基維持液，培養(yǎng)1天后，再更換為成脂誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基誘導(dǎo)液，繼續(xù)培養(yǎng)3天。

按照以上換液頻率誘導(dǎo)14-21天，并注意觀察細(xì)胞形態(tài)變化。根據(jù)細(xì)胞誘導(dǎo)形成的脂滴數(shù)量和大小，決定終止細(xì)胞誘導(dǎo)的時間，并進(jìn)行染色鑒定。

3. 細(xì)胞固定：吸去培養(yǎng)基,使用適量1×PBS清洗一次，棄去后取適量4%中性甲醛溶液覆蓋培養(yǎng)器皿底面，室溫固定30-60min，棄去固定液再使用1×PBS清洗兩次。

4. 油紅O染色：取生理鹽水或1×PBS與油紅O原液配制油紅O工作液（油紅O原液: 生理鹽水=3:2），現(xiàn)用現(xiàn)配。

向清洗干凈的誘導(dǎo)孔內(nèi)加入適量工作液，靜置染色30min；吸走油紅O工作液，用1×PBS清洗兩次，并加入適量1×PBS避免細(xì)胞干燥。

5. 誘導(dǎo)評估：顯微鏡下觀察成脂染色效果，并進(jìn)行圖像采集和誘導(dǎo)評估；誘導(dǎo)成功時，脂滴會與油紅O染料結(jié)合后呈現(xiàn)紅色或橘紅色。