產(chǎn)品貨號(hào):KX0210049

產(chǎn)品名稱:新型乳劑(佐劑)

類別:免疫佐劑

注意事項(xiàng):運(yùn)輸保存：建議常溫運(yùn)輸，2-8oC保存，無(wú)菌取用，有效期18 個(gè)月。（切勿凍存！）

產(chǎn)品描述:新型乳劑(佐劑)是一種具有自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)、配方的新型油包水佐劑，用于免疫小鼠和家兔等實(shí)驗(yàn)動(dòng)物以制備單、多克隆抗體。該佐劑以弗氏不佐劑為基礎(chǔ)，添加了多種具有強(qiáng)免疫刺激活性的 TLR 配體。該佐劑與常規(guī)使用的弗氏佐劑相比，具有（1）佐劑活性強(qiáng)于弗氏不佐劑；（2）與弗氏佐劑不同，不含有干擾免疫應(yīng)答的無(wú)關(guān)蛋白成分；（3）安全性好，副反應(yīng)率低；（4）免疫針次少、抗原用量低等多方面優(yōu)點(diǎn)。

使用方法:

用生理鹽水將抗原稀釋到2倍最終濃度（按小鼠每針次50μl、家兔每針次100μl用量配制）。備注：推薦使用的抗原用量為小鼠每針次10-20μg、家兔每針次20-50μg。

乳化：無(wú)菌條件下取出所需用量（按小鼠每針次 50μl、家兔每針次100μl）與抗原按體積比1:1混合乳化，至形成白色油包水的乳濁液狀態(tài)（鑒定方法：滴一滴乳濁液在常溫水面上，若凝聚不散開或散開緩慢，成滴狀浮于水面，即乳化，為合格的油包水劑）。乳化方式有以下幾種：

(1)機(jī)械Vortex法：抗原和佐劑放置于合適的EP管中，使用槍頭反復(fù)吹打混合后，放在旋渦混勻儀上劇烈振蕩乳化5-30min以上, 直至形成粘稠的乳劑為止。備注：乳化過(guò)程中儀器會(huì)放熱，因此可以將整個(gè)操作系統(tǒng)放置于4℃條件下進(jìn)行。

(2)手動(dòng)注射器混合法：

將等量的佐劑和抗原溶液在EP管中，槍頭反復(fù)吹打混合，隨后轉(zhuǎn)移至一個(gè)注射器內(nèi)，安裝針頭，針管有助于乳液的形成，用力上下抽吸，乳化30-60min以上，直到形成穩(wěn)定的乳液。備注：此操作過(guò)程中注意防脫針及個(gè)人安全。

將等量的佐劑和抗原溶液在EP管中，槍頭反復(fù)吹打混合，隨后轉(zhuǎn)移至一個(gè)注射器內(nèi)，利用三通閥等將其與另一個(gè)注射器連接，注意排凈空氣，將抗原和佐劑在兩個(gè)注射器中交替推動(dòng)，乳化30-60min以上，直至形成粘稠的乳劑并很難推動(dòng)為止。備注：此操作過(guò)程中注意漏液。

(3)機(jī)械攪拌法：抗原和佐劑放置于合適的EP管中，將佐劑乳化器（貨號(hào): BDYQ1001）攪拌頭置于混合液的中上部打開開關(guān)，然后用自上而下慢慢攪拌佐劑入抗原層，慢慢下移，隨后根據(jù)乳化的程度，可局部上下擺動(dòng)前進(jìn)，最終達(dá)到溶液底部完成乳化。博奧龍佐劑乳化器能夠輕松解決佐劑與抗原的乳化過(guò)程，一般1-10ml乳化量3-5min即可，最多不超過(guò)10min。

(4)研磨法：取適量佐劑放入無(wú)菌的研缽，緩慢滴加等體積的抗原溶液，邊滴邊按同一方向研磨，滴加抗原的速度要慢。待抗原全部加入后，繼續(xù)研磨一段時(shí)間，使之成為乳白色粘稠的油包水乳劑。注意：本方法適用于大量制備，缺點(diǎn)是研缽壁上易粘附大量乳劑，抗原損失較大。

(5)超聲法：使用配有小探頭的超聲波設(shè)備將抗原和佐劑的混合物進(jìn)行超聲處理。超聲波的能量有助于打破抗原和佐劑的界面，使其均勻乳化。這種方法適用于一些難以乳化的樣品，但是要控制超聲頻率、時(shí)間和溫度，超聲容易激發(fā)一些自由基，對(duì)抗原有未知損害。

通過(guò)皮下或肌肉單點(diǎn)注射免疫動(dòng)物，小鼠每針次100μl，家兔每針次200μl。備注：（1）佐劑與抗原混合后應(yīng)盡快注射，若放置時(shí)間較長(zhǎng)出現(xiàn)水油相分層，則必須按上述步驟 2重新混勻；（2）抽入針管前應(yīng)搖勻，抽入針管后應(yīng)盡快注射；（3）盡量選擇引流淋巴結(jié)附近（如腋窩和腹股溝附近）的皮下 或肌肉進(jìn)行免疫。

第21天按同樣方式加強(qiáng)免疫1針。備注：每次佐劑和抗原現(xiàn)配現(xiàn)用。

第35天采微量血進(jìn)行ELISA測(cè)定，抗體滴度應(yīng)在1:10000-1:10000000 范圍內(nèi)，隨后即可采全血或按常規(guī)方法進(jìn)行抗原沖擊免疫和脾細(xì)胞融合。

若抗體滴度沒(méi)有達(dá)到要求，可在第42天按同樣方式加強(qiáng)免疫1針。備注：通常情況下小鼠只需免疫2針，而家兔往往需要免疫3針。

若免疫3針，可在第52-56天采微量血進(jìn)行ELISA測(cè)定，抗體滴度應(yīng)在1:10000-1:1000000范圍內(nèi)，隨后即可采全血或按常規(guī)方法進(jìn)行抗原沖擊免疫和脾細(xì)胞融合。備注：佐劑免疫效果有時(shí)也與抗原特性有關(guān)， 若免疫3針后仍達(dá)不到要求，不建議進(jìn)行更多針次免疫。