SpCas9是一種依賴于sgRNA引導(dǎo)的 DNA內(nèi)切核酸酶。在靶標(biāo)DNA存在PAM（5’-NGG-3’）的情況下，SpCas9 Nuclease能在sgRNA引導(dǎo)下特異性結(jié)合并切割靶標(biāo)dsDNA，使DNA雙鏈斷裂并生成平末端。其切割位點位于目標(biāo)序列target sequence內(nèi)，距離PAM 3個堿基的位置。SpCas9不僅可用于基因編輯，還可應(yīng)用于體外靶標(biāo) DNA 的切割、目的片段的克隆等實驗。

LbCas12a是一種依賴crRNA介導(dǎo)的核酸內(nèi)切酶，在靶標(biāo)雙鏈DNA存在PAM（（5’-TTTV-3’）序列的情況下，LbCas12a能在crRNA介導(dǎo)下特異性識別并切割雙鏈DNA，而LbCas12a 特異性切割靶標(biāo)單鏈DNA不依賴PAM序列。LbCas12a-crRNA復(fù)合物與互補dsDNA或ssDNA結(jié)合后，其非特異性ssDNA反式切割活性被激活，通過設(shè)計兩端標(biāo)記熒光基團或其它小分子標(biāo)記的Reporter ssDNA，可實現(xiàn)Cas12a對DNA模板的檢測和信號放大，可通過熒光儀和試紙條觀察結(jié)果。

AapCas12b核酸酶是一種依賴 sgRNA介導(dǎo)的核酸內(nèi)切酶，在靶標(biāo)雙鏈DNA存在PAM（5’-TTN-3’）序列的情況下，由sgRNA介導(dǎo)特異性識別并切割雙鏈DNA，而AapCas12b特異性切割靶標(biāo)單鏈DNA則不依賴PAM序列。AapCas12b-crRNA復(fù)合物與互補的dsDNA或者ssDNA結(jié)合后，其非特異性ssDNA反式切割活性被激活。AapCas12b的好的反應(yīng)溫度為60℃，因此適合與環(huán)介導(dǎo)等溫擴增（LAMP）聯(lián)用。

LbuCas13a是一種由crRNA介導(dǎo)的核酸內(nèi)切酶，對PAM（PFS）位點無依賴性。在crRNA識別并切割靶標(biāo)RNA時，Lbucas13a的反式切割活性被激活，可非特異切割體系中單鏈 RNA(ssRNA)。通過設(shè)計兩端標(biāo)記熒光基團或者其他標(biāo)記物的RNA探針，可實現(xiàn)對RNA模板的檢測和信號放大，可通過熒光儀或試紙條觀察結(jié)果。

LwaCas13a是一種由crRNA介導(dǎo)的核酸內(nèi)切酶，與LbuCas13a一樣，對PAM（PFS）位點無依賴性。在crRNA識別并切割靶標(biāo)RNA時，Lwacas13a的反式切割活性被激活，可實現(xiàn)對體系中的ssRNA的非特異切割。通過設(shè)計兩端標(biāo)記熒光基團或者其他標(biāo)記物的RNA探針，可實現(xiàn)CRISPR/Cas13a對RNA模板的檢測和信號放大?？赏ㄟ^熒光儀或試紙觀察結(jié)果。