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三環(huán)抗抑郁劑固相萃取凈化方法

閱讀:3044        發(fā)布時間:2010-5-26

 

三環(huán)抗抑郁劑固相萃取凈化方法
1. 樣品制備
A. 血漿或血清
1mL的血漿或血清中加入4mL 100mmol/L的磷酸鹽緩沖液(pH6.0),充分混合,用1.0mol/L的KOH溶液調(diào)節(jié)pH值至6.0±0.5;
B. 全血
1mL血液中加入2mL甲醇,充分混合,離心去除蛋白沉淀;
取上清液,加入10mL 100mmol/L的磷酸鹽緩沖液(pH6.0),充分混合,將用1.0mol/L的KOH溶液調(diào)節(jié)pH值至6.0±0.5;
2. SPE凈化
a. 活化:用2mL甲醇,2mL去離子水和1mL 100mmol/L的磷酸鹽緩沖液(pH6.0)分別沖洗柱床;
注意:要保證吸附劑不干燥;
b. 上樣:上樣流速控制在1~2mL/min;
c. 淋洗:分別用3mL去離子水,1mL1.0mol/L的醋酸和3mL的甲醇分別淋洗,zui后將SPE柱抽5min至干燥;
d. 洗脫:用2mL二氯甲烷/異丙醇/氨水(78:20:2)以1~2mL/min的速度進行洗脫。收集全部洗脫液;
注意:洗脫液必須為當天新制備的新鮮溶液。
3. 蒸發(fā)干燥
將洗脫液在40℃以下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干 ;
4. 檢測方法
GC-NPD 或者GC-MS分析
衍生化
用50μL乙酸乙酯溶解蒸發(fā)后的樣品 ,加入50μL五氟丙酰酸酐(PFPA),充氮氣并密封,在70℃ 反應(yīng)20min,冷卻至室溫,蒸發(fā)至干; 100μL乙酸乙酯定容 。
非衍生化方法
沒有衍生化的樣品也可以直接進行分析,用100μL甲醇重新定容;進1~ 3μL測定;
LC檢測
將第3步中的樣品,用200μL乙腈/去離子水(25:75)定容,用漩渦混合器混合30s,進100μL測定。
5. 樣品成分
三環(huán)抗抑郁劑
本方法中使用的SPE柱
Bond Elut Certify(130mg,3mL, PN.12102051)。
 

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