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尿液中的合成代謝類固醇類藥物固相萃取凈化方法

閱讀:3210        發(fā)布時間:2010-5-25
尿液中的合成代謝類固醇類藥物固相萃取凈化方法
1.樣品預處理
在尿液中加入內(nèi)標物和2mLβ-葡萄糖醛酸酶( 5000F單位/mL)充分混合,在65℃條件下水解3h,處理前冷卻,用1.0mol/L的KOH溶液調(diào)節(jié)pH值至6.0±0.5;
2. SPE凈化
a. 活化:分別用3mL甲醇,3mL去離子水和1mL 100mmol/L的磷酸鹽緩沖液(pH6.0);在上樣前保持柱床濕潤;
b. 上樣:以1~2 mL/min的流速將樣品載入SPE柱;
c. 淋洗:用3mL10%(v/v)甲醇去離子水溶液淋洗,通空氣5min干燥柱床;再用1mL的正己烷或者正己烷/乙酸乙酯( 50/ 500,v/v)淋洗SPE柱;
d. 洗脫:可以選擇如下四種方法,收集洗脫液;
1) 3mL二氯甲烷/異丙醇/NH4OH( 78/ 80/ 2, v/v),溶劑流速控制1~ 2mL/min,收集洗脫液;洗脫液必須為當天制備的新鮮溶液;
2)3mL二氯甲烷/異丙醇(80/20);
3)3mL乙酸乙酯;
4)3mL甲醇。
3.蒸發(fā)干燥
4.衍生化
加入50μL MSTFA(含有3%的碘化*基甲硅烷基),充分混合,70℃條件下反應 20min,冷卻。
5. Varian Saturn 2200 GC-MS檢測
6. 樣品成分
睪丸激素
19-noretiocholanon
16-A-hydroxyetiocholanone
康復龍
普拉睪酮
10-去甲睪酮
康復龍代謝物1
康復龍代謝物2
11-B-羥基睪丸激素
去氫甲基睪丸素
19-norandosterone
16-A-表睪(甾)酮
司坦唑醇
方法中使用的SPE柱:
Bond Elut Certify(130mg, 3mL,PN.12102051)。
 
我公司可提供產(chǎn)品:Bond Elut Certify(130mg, 3mL,PN.12102051)
北京東方惠普科技有限公司
詳情可致電:010-820178366/68
:徐兢苑
 

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