細(xì)胞凋亡在胚胎發(fā)育、造血、免疫系統(tǒng)的成熟以及維護(hù)正常組織和器官的細(xì)胞恒定與生長平衡，乃至機(jī)體衰老方面都起著重要作用。因此，有關(guān)凋亡的研究在臨床和基礎(chǔ)等各個(gè)領(lǐng)域已經(jīng)廣泛開展,凋亡細(xì)胞的檢測方法顯得非常重要。

FLIVO®(熒光活體)是一種強(qiáng)大的無創(chuàng)檢測體內(nèi)半胱天冬酶活性的方法。NIR-FLIVO 690示蹤劑是caspases的非細(xì)胞毒性、細(xì)胞透過熒光抑制劑，優(yōu)化用于整個(gè)活體動(dòng)物。ICT的NIR-FLIVO 690示蹤探針包含大多數(shù)caspases (Val-Ala-Asp或VAD)的好的選擇結(jié)合序列。

接下來咱就聊一聊艾美捷ImmunoChemistry（ICT）FLIVO探針——用于細(xì)胞凋亡活體檢測，助力大家高精度檢測。

一、艾美捷FLIVO探針活體凋亡檢測之FAM-FLIVO®體內(nèi)Poly Caspase檢測試劑盒：

FLIVO®試劑盒提供了一種簡單、準(zhǔn)確的方法來檢測體內(nèi)caspase活性。類似于我們的FLICA®探針，但優(yōu)化了整個(gè)活動(dòng)物標(biāo)記。為標(biāo)記含有活性caspases的細(xì)胞，靜脈注射FLIVO并讓其循環(huán)約60分鐘。由于試劑是細(xì)胞本身的，當(dāng)它在體內(nèi)循環(huán)時(shí)，它很容易在遇到的所有細(xì)胞內(nèi)擴(kuò)散或擴(kuò)散。如果細(xì)胞內(nèi)存在活躍的caspase酶，FLIVO會(huì)與caspase活性位點(diǎn)形成不可逆共價(jià)鍵。如果細(xì)胞膜完好，結(jié)合的FLIVO探針將留在細(xì)胞內(nèi)。任何未綁定的FLIVO將在大約一個(gè)小時(shí)內(nèi)從動(dòng)物的循環(huán)中移除。組織中剩余的綠色熒光信號是注射試劑時(shí)發(fā)生的半胱天冬酶活性的直接測量。一旦多余的FLIVO從動(dòng)物體內(nèi)清除，組織就可以進(jìn)行分析了。無需進(jìn)一步染色。組織可以通過窗腔系統(tǒng)或其他可接近的腔直接觀察?；蛘撸繕?biāo)組織可以被移除并進(jìn)行分析。FLIVO非常敏感，會(huì)檢測到自然發(fā)生的背景細(xì)胞凋亡。凋亡細(xì)胞的caspase活性高于對照細(xì)胞，因此它們在FLIVO作用下熒光更亮。

二、艾美捷FLIVO探針活體凋亡檢測之FLIVO示蹤劑：

準(zhǔn)備樣品和對照品。

用45 mL diH20按1:10稀釋10X注射緩沖液。

用50μL DMSO重組NIR-FLIVO 690示蹤劑。

用450μL 1X注射緩沖液稀釋NIR-FLIVO 1:10。

靜脈注射50μL。

讓NIR-FLIVO循環(huán)4小時(shí)。

想象動(dòng)物。NIR-FLIVO690示蹤劑在690nm激發(fā)，在709nm發(fā)射。

如果不直接查看，則切除組織并處理樣本以進(jìn)行進(jìn)一步分析。

可選：用其他染色劑（如Hoechst 33342或抗體）標(biāo)記切除的樣品。

如果需要，修復(fù)切除的樣本。

用熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀分析切除的樣品。

以上，是有關(guān)于艾美捷FLIVO探針活體凋亡檢測的相關(guān)研究方案。