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武漢艾美捷科技有限公司
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高度富集、低輸入——艾美捷m6A-RNA甲基化片段富集試劑盒

時間:2023/1/3閱讀:265
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N6-甲基腺苷(m6A)是真核生物RNA分子中極為常見和豐富的修飾。由甲基轉移酶復合物METTL3催化m6A修飾,并通過M6A RNA去甲基化酶FTOALKBH5,以α-酮戊二酸(α-KG)-Fe2+-依賴的方式催化M6A去甲基化。METTL3FTOALKBH5在許多生物中起著重要作用,從發(fā)育和代謝到生育的過程。在所有RNA堿基甲基化中,m6A80%以上,存在于各種物種中。m6A主要分布在mRNA中同樣也發(fā)生在非編碼RNA中,如tRNArRNAsnRNA。在mRNA轉錄物中m6A的相對豐度已被證明影響RNA代謝過程,如剪接,核輸出,翻譯能力和穩(wěn)定性,以及RNA轉錄。由m6A RNA甲基酶和脫甲基酶缺陷引起的m6A甲基化水平異??赡軐е?span style="font-family: Calibri;">RNA功能障礙并引起疾病。

 

例如,由于FTO突變患者的FTO活性增加,靶m RNAm6A的異常低水平,通過一種未定義的途徑,導致肥胖和相關疾病的發(fā)生。對RNA的化學M6A修飾的動態(tài)性和可逆性,也可作為一種具有深遠生物學意義的新表觀遺傳標記。因此,更多有用的信息,以更好地理解m6A RNA甲基氧化RNA 轉錄物的水平和分布有利于疾病的診斷和治療。

 

目前,有幾種方法被用于表位范圍的m6A映射。這些方法包括MeRIP,PA-m6A-seq,miCLIPm6A-CLIPMeRIP已被廣泛應用,但在m6A分析中無法實現(xiàn)高分辨率。PA-m6A-seq、mi CLIPm6A-CLIP提高了分析分辨率,但由于重復性差和工藝復雜。特別是,這些方法耗時(>2天)和費用昂貴。為了解決這些問題,m6A RNA甲基化片段富集試劑盒來了~

 

艾美捷m6A-RNA甲基化片段富集試劑盒【簡稱:MeRIP試劑盒】有以下特點:

1、高度富集:使用RNA 切割酶混合物同時對含有m6A 的目標序列兩端的RNA 進行片段化和切割/移除任何RNA 序列,而不影響被抗體占據(jù)的RNA 區(qū)域。短片段RNA 僅與抗m6A 抗體結合。因此,非常可靠地確定真正的m6A 富集目標區(qū)域,并可實現(xiàn)高分辨率繪圖。

2、低輸入:不結合的RNA 切割和免疫捕獲是在同一個單管中處理的,這樣可最大限度地保護含有m6A的目標區(qū)域,并最小化樣本損失,允許輸入RNA 低至500ng

3、極小背景:在含m6A 目標序列的兩(2)端切割非結合RNA 序列,可最小化MeRIP/測序背景,允許1000萬讀的數(shù)據(jù)分析。

4超快速、精簡程序: 從RNA cDNA 文庫的過程小于小時,動手時間<30 分鐘。

5、超級方便: 本試劑盒包含了每一步所需的所有組件,這足以捕獲含m6A RNA 序列,從而允許以一種很方便的方法來富集,結果可靠一致。

 

m6A-RNA甲基化片段富集試劑盒檢測原則和程序

EpiQuik™ CUT&RUN m6A RNA富集(MeRIP)試劑盒包含所需的所有必要試劑用于從總RNA開始成功地進行m6A RNA富集。在反應中,RNA切割/去除包含靶m6A的區(qū)域兩端的序列

使用珠結合的m6A捕獲抗體將含有m6A的片段下拉。富集的然后釋放、純化和洗脫RNA。試劑盒中包括非免疫IgG對照和m6A陽性對照。這些可用于證明試劑盒的功效和富集RNA定量或生物分析儀步驟。

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1:使用EpiQuik富集m6A RNA™ 切割并運行m6A RNA富集(MeRIP)試劑盒:捕獲含有m6ARNA片段通過抗m6A抗體(#A-1801,EpigenTek)從10µgRNA500ng陽性對照寡核苷酸。非免疫IgG用作陰性對照。富集的RNA是純化并熒光定量用于富集倍數(shù)比較。

2:文庫片段的大小分布:m6A片段富集通過抗m6A抗體(#A-1801,EpigenTek)并用于cDNA文庫制備。峰值195 bps反映m6A抗體結合的RNA插入大小(約55個基點)


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