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應用分享 | TPO用途之iPSC體外分化“人造血小板

2024-3-11  閱讀(226)

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Chaselection逐典現(xiàn)推出血小板生成素(TPO)、重組人干細胞因子(SCF)、酪氨酸蛋白激酶受體(FLT3)組合加油包,無動物源,非標簽純化,高純度、高活性、高安全性,支持造血干細胞,iPSC等細胞的體外培養(yǎng)與定向分化。

近年來,關(guān)于造血干細胞相關(guān)研究成為行業(yè)研究的熱點。18年在頂級生命科學期刊《Cell》上發(fā)表了日本京都大學細胞研究與應用中心Ito等人的研究“湍流激活血小板的生物發(fā)生使其體外制備達到臨床應用規(guī)模"(Turbulence Activates Platelet Biogenesis to Enable Clinical Scale Ex Vivo Production)[1],文章一經(jīng)發(fā)表就引起業(yè)界的高度關(guān)注。研究表明人造血小板,準確地說,是使用誘導多能干細胞(Induced pluripotent stem cell,iPSC)制備血小板的“生產(chǎn)效率"初步達到了臨床實際應用的水平,人造血小板開始從“實驗臺來到病床邊"。

iPSC是體外血小板生成的來源細胞

iPSC具有多向分化和自我更新的能力,能在體外無限增殖。與胚胎干細胞相比,iPSC來源于體細胞,通過重編程來重獲干性,來源不受限,無倫理爭議[2]。



圖1.誘導多能干細胞可以在體外被間接擴增,并被誘導分化為任何類型的細胞[3]。


通常,再生障礙性貧血(即“再障")或其他疾病造成的嚴重血小板減少,需要進行血小板輸血。采用血小板進行治療的一般過程:先采集患者細胞,制備成iPSC細胞。接著,再把iPSC細胞制備成造血祖細胞,再分化成巨核細胞,并冷凍作為主細胞庫,巨核細胞可以長時間儲存。最后,由巨核細胞制備血小板用于相應疾病的治療。

在培養(yǎng)造血干細胞或促進iPSC的定向分化過程中需要使用細胞因子進行調(diào)節(jié)。細胞周期由4個期組成:G1期、S期(合成期)、G2期和M期(有絲分裂期)。HSC 是處于 G0 期靜止狀態(tài)的細胞。HSC的負向調(diào)控因子(TGF-β、MIP-1α、p38)主要在細胞周期關(guān)卡(checkpoint)進行調(diào)節(jié),抑制細胞進入G0期。而一些 HSC 正向調(diào)控因子(SCF、FL3、TPO)可以使細胞走出G0期,開始擴增,因而在HSC的培養(yǎng)過程中,細胞因子的選擇至關(guān)重要。



圖2 細胞因子調(diào)節(jié) HSC 的細胞周期[4]

逐典血小板生成素TPO

逐典血小板生成素(TPO)分子量約19 kDa,分子序列和野生型同源性大于98%,采用E.coli原核表達系統(tǒng),不含動物源成分,通過非標簽純化方式,大幅度降低外源金屬離子引入風險,其純度>95%,內(nèi)毒素<0. 1 EU/μg,在保證安全性的同時大大提高了產(chǎn)品的特異性,滿足您的需求。

01產(chǎn)品特點

原核表達系統(tǒng),無動物源成分

活性高,比活≥1×107 units/mg

非標簽純化,外源金屬離子引入風險低

02產(chǎn)品數(shù)據(jù)

1.電泳(SDS-PAGE)



采用SDS-PAGE分離,顯示蛋白分子量約19kDa,且未見雜蛋白,與天然蛋白類似

2.活性(Bioactivity)-Bioactivity CELL BASE



通過對人Mo7e(巨細胞白血-病細胞株)細胞進行增殖劑量依賴性刺激實驗,結(jié)果表明ED50≤1.0ng/ml,對應的比活性≥1×107單位/mg。

參考文獻

[1] Ito Y, Nakamura S, Sugimoto N, Shigemori T, Kato Y, Ohno M, Sakuma S, Ito K, Kumon H, Hirose H, Okamoto H, Nogawa M, Iwasaki M, Kihara S, Fujio K, Matsumoto T, Higashi N, Hashimoto K, Sawaguchi A, Harimoto KI, Nakagawa M, Yamamoto T, Handa M, Watanabe N, Nishi E, Arai F, Nishimura S, Eto K. Turbulence Activates Platelet Biogenesis to Enable Clinical Scale Ex Vivo Production. Cell. 2018 Jul 26;174(3):636-648.e18.

[2] 岳偉,顧?;?誘導多能干細胞體外分化血小板技術(shù)的研究進展[J].中國輸血雜志,2023,36(09):851-856.

[3] Sugimoto N, Eto K. Generation and manipulation of human iPSC-derived platelets. Cell Mol Life Sci. 2021 Apr;78(7):3385-3401.

[4] 田菁,蔣永平.細胞因子在人造血干細胞體外擴增培養(yǎng)中的作用研究進展[J].生物醫(yī)學工程與臨床,2013,17(05):507-512.


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