www.xmbio.com20世紀90年代起，分子生物學進入臨床檢測。短短的幾年中，以聚合酶鏈反應（PCR）為核心的分子生物學技術深入到臨床多個領域。在臨床檢驗中心，我國分子生物學在遺傳病診斷及產(chǎn)前篩查、腫瘤診斷與療效預后判斷、微生物耐藥機理的研究等方面取得較突出的成績。

  一、微流控芯片（microfluidic chip）技術

     微流控芯片技術是芯片技術與毛細管電泳聯(lián)合應用的定量檢測技術。它可用于核酸（DNA和RNA）、蛋白質(zhì)及細胞的檢測，并已產(chǎn)品化。進行微流控芯片檢測時，應將樣品、對照和指示劑系統(tǒng)導入預先已有復雜毛細管道刻蝕的芯片上，經(jīng)過電泳技術，利用內(nèi)對照系統(tǒng)對產(chǎn)物準確定量。

   微流控芯片技術在核酸檢測中引入了防污染系統(tǒng)，有效排除了假陽性。其與微點陣芯片不同的是每個芯片可用于多個臨床樣品檢測，每個芯片可重復使用20次。如以DNA芯片檢測為例，特異性由PCR控制，可提供檢測平臺和菜單式服務。此類的某些芯片每孔至少可供5個不同PCR產(chǎn)物同時進行分析。

該項檢測目前已應用于乙型肝炎病毒（HBV）基因分型、HBV基因某些變異（如1896c變異、抗拉米呋定YMDD變異等）研究、用血安全檢測和嚴重急性呼吸綜合征冠狀病毒及流感病毒檢測等方面。微流控芯片技術經(jīng)濟耐用，還可及時簡便地利用菜單為臨床提供信息。由于它采用多個單純PCR組合，可排除多重PCR檢測時互相干擾而影響檢測效率的問題。

二、依賴核酸序列的擴增（nucleic acid sequence based amplification，NASBA）技術和“分子燈塔”（molecular beacon）技術聯(lián)合應用

   NASBA技術主要為RNA直接擴增技術，而“分子燈塔”技術為RNA擴增產(chǎn)物的檢測技術。NASBA技術在RNA模板（sense RNA）提取后，經(jīng)過引物（oligo P1和primer P2）和2次連續(xù)逆轉(zhuǎn)錄酶反應，在同溫度條件下進入線性擴增循環(huán)，產(chǎn)物直接為單鏈反義RNA（anti-sense RNA）。“分子燈塔”技術已于前幾年的熒光實時定時檢測技術為先導進入臨床，其基本原理是核酸雜交反應。在同時標記有熒光集團（fluorophore）和淬滅集團（quencher）的“分子燈塔”探針進入靶RNA（anti-sense RNA）生成體系中，當探針與靶RNA有同源序列結(jié)合后，利用延伸時RNA聚合酶（T7 RNA polymerase）的外切酶作用，切去淬滅集團，使熒光集團釋放，然后進行檢測。
NASBA技術與逆轉(zhuǎn)錄（RT）-PCR檢測RNA不同。RT-PCR在檢測RNA時，必先利用逆轉(zhuǎn)錄酶形成cDNA，然后利用溫度階梯進行循環(huán)擴增，產(chǎn)物為cDNA，引物次序包含于終產(chǎn)物中。而NASBA技術可直接擴增RNA，是連續(xù)等溫度擴增，產(chǎn)物為單鏈RNA，引物次序不包含于終產(chǎn)物中。“分子燈塔”技術需低溫反應，檢測時以至少有109目標片段為好。而NASBA技術*反應溫度為41℃，擴增后產(chǎn)生1014擴增物，因此，兩項技術結(jié)合可形成適宜搭配，達到的匹配。

   三、蛋白質(zhì)芯片與表面增強激光解吸離子化飛行時間質(zhì)譜技術

   由蛋白質(zhì)芯片（phroteinChip）和表面增強激光解吸離子化飛行時間質(zhì)譜儀組成的表面增強激光解吸離于化飛行時間質(zhì)譜技術（SELDI），又稱為蛋白質(zhì)指紋圖譜。蛋白質(zhì)芯片制備包括：（1）生物原始樣品制備。蛋白質(zhì)經(jīng)親合作用結(jié)合到芯片的化學或生物位點上。（2）制備清洗的蛋白質(zhì)芯片。用水洗去非特異結(jié)合的蛋白質(zhì)和緩沖液中的雜質(zhì)，以消除干擾。（3）加入能量吸收分子（Energy Absorb Molecule，EAM）。芯片干燥后，每個位點上加能量吸收分子，與蛋白質(zhì)結(jié)合為混合晶體，以促進蛋白質(zhì)在SELDI檢測中的解吸附和離子化。SELDI測定包括：（1）用激光解吸電離的方法將保留在芯片上的蛋白質(zhì)解離出來。（2）電離的蛋白質(zhì)可通過表面增強激光解吸離子化飛行時間質(zhì)譜地測定出它們的質(zhì)量。

    SELDI技術可觀察到一組蛋白質(zhì)的動態(tài)變化，可檢測到經(jīng)典方法無法測定的低豐度的蛋白質(zhì)。蛋白質(zhì)芯片技術是近幾年生命科學領域中已嶄露頭角的新技術，它正在與各項生物技術有機結(jié)合中，擴展其應用范圍。目前蛋白質(zhì)芯片與SELDI技術已廣泛應用于癌癥、老年病、感染性疾病、心血管病等多種疾病研究，且成功地發(fā)現(xiàn)了艾滋病的抑制蛋白。美國FDA和NIH建立了早期檢測和卵巢癌的血清蛋白質(zhì)指紋圖譜。在腦脊液中定量檢測β淀粉樣變蛋白用于早期診斷老年癡呆也取得一定進展，并為設計特異性靶向蛋白抑制劑治療藥物提供了可靠依據(jù)。我國學者也報告了該技術在結(jié)直腸癌篩選的結(jié)果。雖然，SELDI技術創(chuàng)建至今僅4年，臨床應用報告僅見于近2年，但其在診斷學應用上已顯示出光明的前景，將給臨床診斷學帶來新的希望。

    總而言之，醫(yī)學技術的發(fā)展及其臨床應用的廣泛開展，必定為未來新的診療方法提供可能性，這些技術也只有在應用過程中才能得到恰當?shù)脑u估和改進。檢驗界的同行們積極關心新技術的出現(xiàn)和參與應用與改進，定將能拓展出更多的項目應用于臨床檢驗工作中。