影響ElISA實驗效果常見問題原因分析及解決辦法

來源：上海繼錦化學科技有限公司 2010年12月14日 23:22

ELISA 試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在臨床上得到了廣泛的應(yīng)用，但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗的檢測效果影響較大，如不注意，有可能導致顯色不全、花板等結(jié)果。

操作步驟	可能原因	解決辦法
選擇試劑	選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑，嚴格按照試劑說明書進行操作，操作前將試劑在室溫下平衡 30-60 分鐘。
加樣	1.血清或血漿標本分離不好即進行加樣； 2.手工操作中，加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長（特別是室內(nèi)溫度較高時）； 3.加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。	1. 標本為血清：將血液先自然存放 12小時后，再用 3000rmp 離心 15 分鐘；標本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標本收集管，采血后必須立即顛倒采血管混合 510次，放置一段時間后，3000rpm 離心 15 分鐘；若在幾天內(nèi)檢測，可放在 28℃冰箱中，若要貯存，則置于20℃的低溫冰箱內(nèi)。 2. 加樣后及時放入孵箱。 3. 加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。 4. 如果采用 AT 或其他全自動加樣，選擇 FAME 或其他后處理儀器加酶試劑。 5. 標本較多時，請分批操作。
孵育	1. 孵育時未貼封片或加蓋，使標本或稀釋液蒸發(fā)，吸附于孔壁，難于清洗； 2. 孵育時間人為延長，導致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍，難以清洗。	1.貼封片或加蓋； 2.按說明步驟嚴格控制操作時間。

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