Fast T4 DNA Ligase，讓片段連接更高效

——快速高效的DNA連接酶

產(chǎn)品原理

DNA 連接酶是一種能夠催化相鄰DNA 的3’-OH 和5’- 磷酸基末段形成磷酸二酯鍵，并且把兩段DNA 拼接起來的核酸酶。T4 Ligase是目前應用比較多的病毒基因組編碼的DNA 連接酶，主要從缺失型嗜菌體中提取，噬菌體T4 的30 基因是該酶的合成基因。T4 DNA連接酶在分子生物學中有廣泛的應用。

產(chǎn)品簡介

在普通T4 DNA連接酶的基礎上，利用定向改造技術，將T4 DNA ligase的有效催化活性結構域通過多輪突變篩選，得到一種連接活性更強的突變體。采用zui高純度的生產(chǎn)標準和嚴格的質量檢測，有效去除核酸酶、切口酶的殘留，連接時間只需15min，打造一款快速高效的DNA連接酶。

產(chǎn)品應用

產(chǎn)品特點

1. 應用更廣泛：可催化粘性末端和平末端形成磷酸二脂鍵

2. 適用于多種樣本：包括FFPE、cfDNA等在內(nèi)的所有樣本均能高效連接

3. 適用于多種類型片段連接：兼容illumina平臺Y型接頭以及MGI平臺Bubble接頭

4. 嚴格質控：嚴格的批次性能與穩(wěn)定性質控

原料質控標準

核酸內(nèi)切酶殘留質控：2000 U的本品和0.6 μg Supercoiled pBR322 DNA在74℃下反應1小時，DNA電泳譜帶不發(fā)生變化。

核酸外切酶殘留質控：2000 U的本品和0.6 μg λ-Hind Ⅲ在74℃下反應1小時，DNA的電泳譜帶不發(fā)生變化。

連接效率測評

將本產(chǎn)品用于NGS建庫接頭連接模塊，樣本為模式樣本cfDNA模擬品，加入Y型建庫接頭，連接之后經(jīng)Agilent 2100檢測，理論上會出現(xiàn)三個峰：

①雙端均未連接接頭片段；② 僅一端連接接頭片段；③ 雙端均連接接頭片段

而在二代測序文庫構建中，只有雙端都連接接頭的片段才是合格可用的文庫，因而通常可以通過雙端均連接接頭的片段占比反應接頭連接效率。即雙端連接接頭片段占比越高，單端連接以及無接頭連接的片段占比越低，連接效率越高。

*峰指認：①未連接接頭 ②單端連接接頭 ③雙端連接接頭

*樣本制備：使用170 bp多重PCR產(chǎn)物作為cfDNA模擬品，該PCR產(chǎn)物經(jīng)過設計，3’端含有所有堿基的組合（共16種）。

可應用于MGI/Illumina平臺文庫構建中接頭連接

• 樣本類型：FFPE、cfDNA、腸道微生物

• 對比競品：N*品牌 T4 DNA Ligase

• 測序平臺：illumina^® 以及MGI^®

• 實驗結果：Fast T4 DNA Ligase在不同樣本類型中的連接效率高于N*

應用反饋

將本品應用于NGS建庫試劑盒中（Cat#12199），經(jīng)過不同條件建庫驗證，相比于競品K*品牌均能獲得更高的文庫產(chǎn)出。

【注】樣本來源：Calf thymus Fragment DNA

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翌圣生物成立于2014年，是致力于分子酶創(chuàng)新研發(fā)的國家高新技shu企業(yè)，總部位于上海市浦東新區(qū)醫(yī)學園區(qū)。公司圍繞“解析分子酶結構與功能，拓展分子酶應用場景，解決生命科學領域與精準醫(yī)療領域試劑核心問題”為重點，開發(fā)分子生物學，高通量測序，細胞生物學及體外診斷相關的酶原料與試劑。秉承客戶至上，合作分享，誠信務實，創(chuàng)新奉獻的價值觀，踏實服務于生命科學以及精準醫(yī)療領域。

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